专利名称：一种d-型和/或l-型苯乳酸快速检测方法
技术领域：
一种D-型和/或L-型苯乳酸快速检测方法，特别涉及D-型苯乳酸和/或L-型 苯乳酸的定性检测和含量测定的方法，属于生物防腐剂的检测方法技术领域。
背景技术：
苯乳酸是乳酸菌产生的一种新型抑菌物质。研究表明苯乳酸抑菌谱广，它 对多种食源性致病菌如致病性大肠杆菌、单核细胞增李斯特菌和金黄色葡萄球 菌；腐败菌包括产毒素的丝状真菌如赭曲霉、疣孢青霉和桔青霉，有很强的抑 菌作用。
苯乳酸是一种天然防腐剂。它存在于天然蜂蜜中，对人和动物细胞无毒。 乳酸菌是公认为安全(Generally recognized as safety, GRAS)的微生物，千百年来 用于食品保藏。因此，苯乳酸被认为是继乳酸菌产生的第一代抑菌物质如乳酸、 醋酸，第二代抑菌物质如Nisin(乳酸链球菌素)等细菌素以外，可用于食品体系的 新型抑菌物质。与Nisin相比，苯乳酸抑菌谱宽、稳定性高、亲水性强。
目前对苯乳酸的检测方法主要有薄层层析和高效液相色谱等方法。其中薄 层层析的方法只能定性检测和半定量检测苯乳酸。而已有的高效液相色谱检测 方法是利用反相柱层析对样品中的苯乳酸进行检测，根据保留时间与峰面积来 定性和定量检测苯乳酸；然而，利用反相柱层析不能将D-型苯乳酸和L-苯乳酸 分离开，检测的是总苯乳酸含量，其弊端是1)不能鉴定出样品中苯乳酸的构 型，2)不能分别对D-型和/或L-型苯乳酸进行定性和定量分析。然而，D-型和/ 或L-型苯乳酸的同时定性定量分析，对于不同构型苯乳酸作为新型生物防腐剂 的效价分析及苯乳酸发酵生产的构型形式分析，具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种D-型和/或L-型苯乳酸的快速检测方法。本发明检 测快速，定量准确，重现性好；可检测的样品范围广；可用于苯乳酸发酵生产 研究中的定性定量检测，及苯乳酸作为生物防腐剂在食品工业中的剂量检测。
本发明的技术方案 一种D-型和/或L-型苯乳酸快速检测方法，通过高效液 相色谱方法，利用手性柱将待测样品中的D-型和/或L-型苯乳酸与杂质分离，通 过紫外光吸收在线检测，分别通过高效液相色谱的保留时间和峰面积来定性和 定量检测D-型和/或L-型苯乳酸。
高效液相色谱条件为高效液相色谱仪型号为AgilentllOO;手性层析柱型 号为Chiral-cel OJ-R;流动相为pH2.0、 0.2 M H3P04-KH2P04缓冲液-甲醇-乙氰体积比为85 : 1 : 14的混合液；流速为0.4 mL/min;柱温为20。C;上样量为50 |iL; 检测条件为210nm。
本发明的有益效果本发明检测快速，定量准确，重现性好；可检测的样 品范围广；可用于苯乳酸发酵生产研究中的定性定量检测，及苯乳酸作为生物 防腐剂在食品工业中的剂量检测。
图l D-型苯乳酸标准样品的检测结果图。 图2 L-型苯乳酸标准样品的检测结果图。 图3 D-型和L-型苯乳酸混合物的检测结果图。 图4微生物发酵产物中的D-型和L-型苯乳酸的检测结果图。
具体实施例方式
实施例l D-型苯乳酸标准样品的快速检测
以Sigma公司产品D-苯乳酸配制成1 mg/mL浓度的标准溶液，取一定体积 的该溶液进行高效液相色谱检测分析。高效液相色谱条件为高效液相色谱仪 型号为Agilent 1100;手性层析柱型号为Chiral-cel OJ-R;流动相为0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)缓冲液-甲醇-乙氰(体积比为85 : 1 : 14);流速为0.4 mL/min;柱温为20。C;上样量为50 jiL;检测条件为210nm。
图1给出了 D-型苯乳酸标准样品的检测结果图。D-型苯乳酸在该层析条件 下的出峰保留时间约为18.3 min，可通过积分软件进行D-型苯乳酸的峰面积计 算，并进行样品中D-型苯乳酸的定量分析。
实施例2 L-型苯乳酸标准样品的快速检测
以Sigma公司产品L-苯乳酸配制成1 mg/mL浓度的标准溶液，取一定体积 的该溶液进行高效液相色谱检测分析。高效液相色谱条件为高效液相色谱仪 型号为Agilent 1100;手性层析柱型号为Chiml-cel OJ-R;流动相为0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)缓冲液-甲醇-乙氰(体积比为85 : 1 : 14);流速为0.4 mL/min;柱温为20。C;上样量为50 pL;检测条件为210nm。
图2给出了 L-型苯乳酸标准样品的检测结果图。L-型苯乳酸在该层析条件 下的出峰保留时间约为17.2 min，可通过积分软件进行L-型苯乳酸的峰面积计 算，并进行样品中L-型苯乳酸的定量分析。
实施例3 D-型和L-型苯乳酸混合物的快速检测
以Sigma公司产品D-型苯乳酸和L-型苯乳酸配制成0.5 mg/mL D-型苯乳酸 和0.5 mg/mL L-苯乳酸混合液，取一定体积的该混合液进行高效液相色谱检测分 析。高效液相色谱条件为高效液相色谱仪型号为Agilent 1100;手性层析柱型 号为Chiral-cel OJ-R;流动相为0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)缓冲液-甲醇-乙氰 (体积比为85 : 1 : 14);流速为0.4 mL/min;柱温为20。C;上样量为50 pL;检测条件为210 nm。
图3给出了 D-型和L-型苯乳酸混合物的快速检测图。D-型和L-型苯乳酸在 该层析条件下的出峰保留时间分别约为18.6和17.3 min，可通过积分软件分别 进行D-型和L-型苯乳酸的峰面积计算，并进行样品中D-型和L-型苯乳酸的定
量分析。
实施例4待测样品中的D-型和L-型苯乳酸的快速检测
以植物乳杆菌发酵液为待测样品，通过高效液相色谱检测分析D-型和L-型 苯乳酸的含量。高效液相色谱条件为高效液相色谱仪型号为Agilent 1100;手 性层析柱型号为Chiral-cel OJ-R;流动相为0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)缓冲 液-甲醇-乙氰(体积比为85 : 1 : 14);流速为0.4 mL/min;柱温为20。C;上样 量为50jiL;检测条件为210nm。
图4给出了植物乳杆菌发酵液中的D-型和L-型苯乳酸的检测结果图。D-型 和L-型苯乳酸在该层析条件下的出峰保留时间分别约为18.9和17.6 min，可通 过积分软件分别进行D-型和L-型苯乳酸的峰面积计算，并进行样品中D-型和 L-型苯乳酸的定量分析，分别为0.408 mg/mL和0.397 mg/mL。
权利要求
1、一种D-型和/或L-型苯乳酸快速检测方法，其特征是通过高效液相色谱方法，利用手性柱将待测样品中的D-型和/或L-型苯乳酸与杂质分离，通过紫外光吸收在线检测，分别通过高效液相色谱的保留时间和峰面积来定性和定量检测D-型和/或L-型苯乳酸；高效液相色谱条件为高效液相色谱仪型号为Agilent 1100；手性层析柱型号为Chiral-cel OJ-R；流动相为pH 2.0、0.2M H3PO4-KH2PO4缓冲液-甲醇-乙氰体积比为85∶1∶14的混合液；流速为0.4mL/min；柱温为20℃；上样量为50μL；检测条件为210nm。
全文摘要
一种D-型和/或L-型苯乳酸快速检测方法，属于生物防腐剂的检测方法技术领域。本发明通过高效液相色谱方法，利用手性柱将待测样品中的D-型和/或L-型苯乳酸与杂质分离，通过紫外光吸收在线检测，分别通过高效液相色谱的保留时间和峰面积来定性和定量检测D-型和/或L-型苯乳酸。本发明检测快速，定量准确，重现性好；可检测的样品范围广；可用于苯乳酸发酵生产研究中的定性定量检测，及苯乳酸作为生物防腐剂在食品工业中的剂量检测。
文档编号G01N30/02GK101308124SQ200810123519
公开日2008年11月19日 申请日期2008年6月17日 优先权日2008年6月17日
发明者周宏敏, 波 江, 沐万孟, 罗昭锋 申请人:江南大学