专利名称：一种检测去甲睾酮(诺龙)的直接竞争酶联免疫测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属生物医药技术领域，药物检测，食品安全检测试剂。具体而言，
本发明利用免疫反应的高灵敏性和特异性，以及酶促反应的放大效应和易检测性，建立起 来的一种检测去甲睾酮(诺龙)的直接竞争酶联免疫测定试剂盒 背景技术"19-去甲睾酮"，又称诺龙(19-Nortestosterone)是雄性激素睾酮的 衍生物，为一种蛋白质同化类激素.此类激素及其类似物曾经是应用最为广泛、效果最显 著的一类生长促进剂。这类激素，主要是通过调节机体代谢，影响蛋白质和脂肪代谢，而起 到促进生长，增加胴体蛋白质含量，降低脂肪含量，剌激骨髓造血，加速骨生长，降低饲料消 耗等作用，是养殖业中最常用的动物生长促进剂。在竞技运动中，为提高运动成绩.增强骨 骼和肌肉.也有运动员非法使用。诺龙在动物体内残留，若长期摄入有这类化合物残留的 食品，有引起性功能紊乱，肝肾功能损害，甚至于诱发肿瘤等潜在性危害。故欧盟各国和我 国已明文禁止在饲料中添加该类物质，(作为A类残留监测药物)。体育运动竞赛时的兴奋 剂监测中，这类激素占同化类激素阳性样品的60 %以上.也是必检项目。
由于要求去甲睾酮在食品中不得检出。检测限在0.5ng/g(ml)或者更低，故要求 高灵敏度的检测方法和手段，这对分析检测是一个挑战。现今有关去甲睾酮的检测方法， 多采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)，液相色谱-质谱联用(LC-MS)或多级联用技术如 LC-MS-MS，其设备要求高，技术难度大，对技术人员要求也高。本发明试剂盒利用酶联免疫 测定原理，定量检测动物组织，粪便，胆汁.尿液中的去甲睾酮残留，是一种不需要昂贵的 仪器投入，一般中等文化水平的人员，经过短期培训，就可掌握的检测方法。该试剂盒检测 多种样品中的去甲睾酮，其线性范围为0. 05ng/ml 4ng/ml， IC5。为0. 7ng/ml左右，灵敏度 为O. 05ng/ml。为食品中去甲睾酮残留和体育运动中兴奋剂监测，提供了一种高效，快速，特 异的检测方法。 发明内容本发明提供一种快速检测去甲睾酮的酶联免疫试剂盒。其制备的去甲 睾酮试剂盒，线性范围为0. 05ng/ml 4ng/ml， IC5。为0. 7ng/ml左右，灵敏度为0. 05ng/ml 。 稳定期在6个月以上(4t:冰箱保存)。 本发明公开免疫原的合成，动物的免疫，特异性抗体的制备，试剂盒的调试和装 配，试剂盒各种参数的确定及样品的前处理和测定方法。 去甲睾酮，化学名17P-羟-19-去甲基-雄甾-4-烯-3_酮。縮写为19-NT，分 子量274.4，为小分子物质，不具有免疫原性而仅具有免疫反应性，生产去甲睾酮的酶联免 疫测定试剂盒，必须要制备对去甲睾酮有高度特异性的抗体。要获得对去甲睾酮有高度特 异性的抗体，首要条件是要有一个能激发动物产生抗体的抗原。因此，免疫原的制备最为重 要。其解决的方案是去甲睾酮共价连接上一个大分子物质，通常是与一种蛋白质交联。常 用的有牛血清白蛋白，卵清蛋白，甲状腺球蛋白，大钥匙孔状槭血蓝蛋白等，本发明公开一 种制备去甲睾酮免疫原的方法。首先用一羟胺化合物，羧甲基羟胺，修饰19-NT，生成去甲睾 酮-3-羧甲基肟(19-NT-3-CM0)，后者与N-羟基丁二酰亚胺反应，用二环己碳二亚胺(DCC) 或水溶性碳二亚胺{1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)-碳二亚胺，N-Ethyl-N' -(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide， EDAC ;l-环己_3_(2-玛啉-4-乙基)碳二亚胺对甲基苯亚磺 酸盐N_Cyclohexyl_N'_ (2-morpholinoethyl) carbodiimidemetho_p_toluenesulfonate，， CMEC}催化，使之活化，然后与载体蛋白分子中游离胺基相连，生成去甲睾酮免疫原。
有了免疫原，第二步就是用免疫原免疫动物，本发明是免疫1.5 2kg大小的新西 兰雌性家兔，获得对去甲睾酮有特异性反应的多克隆抗体。本发明提供一种能产生高滴度 抗体的免疫方案。 为了检测特异性抗体，建立直接竞争酶联免疫测定，必须合成去甲睾酮与一种酶 交联的抗原-酶交联物(酶标抗原)，交联的酶包括辣-根过氧化物酶，碱性磷酸酶，P-半 乳糖苷酶等。本发明公开一种合成去甲睾酮与酶交联的方法，以制备酶标抗原，这是建立直 接竞争酶联免疫测定方法的关键技术。 在以上基础上，组装检测试剂盒。用聚苯乙烯96孔或48孔酶标板，包被二抗。 (选用羊抗兔抗体，有商品供给。 一般选用效价高，效价在l : 1000 2000、稳定性好的二
抗。)。 优化包被浓度，抗体浓度，酶标抗原浓度，使之达到检测要求。
本发明提供组成试剂盒相关试剂的配制及组装流程 (1)用选购的二抗包被酶标板。(2)孵育后洗涤去未吸附上的多余二抗。(3)用另 一种蛋白封闭板上未吸附二抗的多余位点，以减少测定时的非特异性吸附。(4)提供去甲 睾酮抗体和去甲睾酮-酶交联物(酶标抗原)浓縮液。(5)提供抗体和酶标抗原应用稀释 液。(6)提供浓縮洗涤液(7)提供去甲睾酮的标准液，用样品制备液配制7个标准Ong/ml， 0. 05ng/ml，0. lng/ml，0. 5ng/ml， 1. 0ng/ml，2. Ong/ml ，4. Ong/ml (8)提供酶显色缓冲溶液和 酶反应底物液，本试剂盒所用的酶反应底物为H202和四甲基联苯胺(TMP) ， H202配于显色缓 冲溶液中，四甲基联苯胺(TMP)单独配制。(8)提供酶反应终止液，终止液为2M硫酸。(9) 提供样品制备液。为配制去甲睾酮标准液和测定时样品的制备。
以上试剂均放4 °C冰箱保存。
应用本试剂盒检测去甲睾酮的检测步骤 (1)按照测定样品数和制作标准曲线所需孔数(每样品和标准均作二个孔)，从冰 箱取出所需用的孔条，放置使温度平衡至室温(25°C )。 (2)将去甲睾酮抗体浓縮液用抗体稀释液按1 : IOO稀释后，每孔加lOOiU，加 盖，室温放置30分钟。 (3)将浓縮洗涤液用双蒸馏水按1 : 9稀释后，作为洗涤液，倒去孔中抗体液，用洗 涤液洗涤3次，每孔，每次250iU，每次加洗涤液后，静置3分钟，倒掉，甩干，再进行下一次 洗涤。最后一次洗涤，尽量将液体甩掉。 (4)各孔加入标准或样品，各标准和样品各加2孔，每孔加50 iU。将酶标抗原浓 縮液，用抗体稀释液按l : 100稀释后，每孔加50iU。另取2孔，加0标准50iU和抗体稀 释液50 iU作为空白孔，稍平行振荡酶标板，混匀各孔中液体。加盖，室温放置30分钟。
(5)同(3)洗涤各孔，最后甩干。 (6)各孔加显色液100 ii 1，显色液由显色缓冲液与TMB液组成，临用时以10 : 1 配制(即1000 ii 1显色缓冲液加100 ill TMB液)。加入后，加盖，室温暗处避光放置15分 钟。
(7)每孔加终止液50iil，混匀，于30分钟内，用酶标仪，在波长450nm下，测定其
光密度。 用各孔的0D45。减去空白孔的0D45。，得各孔的实际测定值。求出二平行孔的平均值， 得各标准或样品的测定值。按照下式求出各标准和样品的抑制率
各标准或样品的抑制率％ =(各标准或样品的测定值/0标准的测定值)X 100% 用各标准浓度的对数值为X，其相应的抑制率为Y，在坐标轴上作图，得去甲睾酮 浓度的半对数坐标标准曲线，在标准曲线上，找出样品抑制率相对应的X轴上的点，就可计 算出样品中去甲睾酮的浓度。现已有ELISA计算的相关软件，利用这些软件，只要输入测定 值，立即就可得出结果。 本试剂盒所用的检测方法，属直接竞争酶联免疫测定方法。96孔酶标板已预先包 被了二抗，加入去甲睾酮的特异性抗体，此抗体与二抗结合后，固定在酶标板上。然后，加入 标准抗原或含有去甲睾酮的样品，和酶标-去甲睾酮，标准或样品中去甲睾酮与酶标-去甲 睾酮，共同竞争与去甲睾酮抗体结合，经孵育后，洗涤去未结合的酶标_去甲睾酮，显色测 定。测定值与标准或样品中去甲睾酮量的对数值呈反比，以此达到定量测定去甲睾酮的目 的。
图1为合成去甲睾酮衍生物-"去甲睾酮-3-羧甲基肟"的
硅胶薄层层析(TLC)图。 从上到下样品为月亏化24小时的去甲睾酮，后化12小时的去甲
睾酮，及去甲睾酮 图2为合成免疫原去甲睾酮_牛血清白蛋白(19-NT-BSA)紫外扫描图
用19-NT， 19-NT-BSA， BSA进行紫外扫描结果。
图3为用此试剂盒测定所作的19-NT标准曲线。
根据实施5. 2测定数据所作的标准曲线。 以下具体实施方式
，可进一步了解本发明。此处仅提供一种优选方法，但对本发明 的内容和权利要求不构成任何限制。
实施例1主要试剂和主要仪器
1. 1试齐[J 去甲睾酮(购自Sigma)，羧甲基羟胺(Sigma)，吡啶；N-羟基丁二酰亚胺(NHS) ;N， N-二甲基甲酰胺(DMF) ;二环己碳二亚胺(DCC);(均购自国药上海化学试剂公司)，牛血清 白蛋白(BSA);卵清蛋白(OVA);四甲基联苯胺(TMP);(购自华美生物工程公司，进口分装 产品)。辣根过氧化物酶(R. Z > 3)(上海丽珠东风生物技术有限公司).羊抗兔多抗(上 海康成生物科技公司).S印hadex G-25 (Sigma)，其余均为分析纯试剂.
1. 2主要仪器 精密分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司，Sartorius， BS124s， d = O.OOOlg);带扫描PC紫外-可见分光光度计(上海欣茂仪器有限公司)；高速台式离心机 (上海安亭实验仪器厂)；酶标仪，P型可调移液器一套(热电上海公司)；SZ_97自动三重 水纯水蒸馏(上海本波仪器有限公司)以及其他实验室常用仪器.
实施例2去甲睾酮免疫原和酶标抗原的合成
2. 1去甲睾酮_3-羧甲基肟(19-NT-3-CM0)，的合成 称取去甲睾酮83mg(0. 3mmmo1)溶于lml无水吡啶，搅拌下，加入45mg(0. 45mmol) 羧甲基羟胺，室温搅拌24小时后(中途12小时时取样，硅胶薄层层析鉴定)，减压抽干吡 啶，得黄色油状物。加2ml乙酸乙酯溶解，用蒸馏水洗三次，分离出有机相。加热减压去乙 酸乙酯近干，加3ml乙醚，置冰箱，得白色沉淀。离心，将沉淀干燥，此为去甲睾酮-3-羧甲 基肟，得约40mg。溶解于lml匿F，用硅胶薄层层析(TLC)鉴定。薄层层析结果见图1. TLC 图中，19-NT-3-CM0留在原点，12小时取样时，肟化尚未完全.可见二点。24小时后，肟化基 本完全.仅见一个点。19-NT则离开原点，随层析液前移.
2. 2去甲睾酮_3-羧甲基肟的活化 上制备的去甲睾酮-3-羧甲基肟DMF液，加入25mg DCC(约0. 23mmo1) ，4。C搅拌 下，加入NHS 18mg(约0. 15mmol)，避光4。C搅拌过夜.次日，离心去沉淀.上清为活化的去 甲睾酮-3-羧甲基肟. 2. 3免疫原去甲睾酮_牛血清白蛋白(19-NT-BSA)的合成 称取BSA 50mg加2000 yl PH8 9的蒸馏水和2000 y 1 DMF溶解，4。C搅拌下，加 入活化的19-NT-CM0 500 y 1. 4。C搅拌过夜.次日，取出用0. 01M PBS(pH7. 5透析3日.每 天换2次透析液.透析后，定蛋白浓度，并用uv扫描鉴定，计算交联率.此法交联率一般在 15 20左右.此扫描图与BSA，19-NT扫描图对照.其结果见图2.如此合成的免疫原，为 去甲睾酮-牛血清白蛋白(19-NT-BSA) 2. 4酶标抗原去甲睾酮_辣根过氧化物酶(19-NT-HRP)的合成称取HRP 10mg加500 yl PH8 9的蒸馏水和500 y 1 DMF溶解，4。C搅拌下，加
入活化的19-NT-CM0 100 ii 1. 4。C搅拌过夜.次日，取出用0. 01MPBS(pH7. 5)透析3日.每
天换2次透析液.透析后，过S印hadex G 25柱，收集有色峰.为合成的酶标抗原去甲睾
酮_辣根过氧化物酶(19-NT-HRP). 实施例3去甲睾酮多克隆抗体的生产 用3只新西兰长耳雌兔，每只兔免疫4次.首次用免疫原19-NT-BSA配成lmg/ml 浓度，取3ml，加3ml弗氏完全佐齐U，充分乳化后.每只兔用2ml (即lmg免疫原)于兔背部， 多点皮下注射为首次免疫.以后分别在第21天，51天，91天再免疫3次.第21天，51天， 用3ml lmg/ml浓度的免疫原，加3ml弗氏不完全佐剂乳化，每只兔用lml，于臀部肌肉二侧注 射.第51天免疫后10天，采血检查抗体产生情况.第91天，免疫原用0. 9%氯化钠液配成 0. 5mg/ml溶液，每只免从耳静脉注射lml免疫原.此次后，第10天，就可从兔耳静脉或心脏收 获血液.收集血液让其自然凝结.离心收集血清，此为抗去甲睾酮(19-NT)的多克隆抗体。
按照此免疫方案， 一般都能收获高滴度的多克隆抗体。 用二抗包被酶标板，利用合成的酶标抗原(19-NT-HRP)，测定多克隆抗体效价.
下为测定结果 稀释倍数1 : 3200 1 : 6400 1 : 12800 1 : 25600 1 : 51200 1 : 102400 1 : 204800抗血清0D值2. 868 2. 792 2. 322 1. 664 1. 13 0. 587 0. 3240. 阴性对照0.231 0.218 0.116 0.054 0.012 0.007 0.002 可见，生产抗血清效价达IO万以上.用可按l : 10000 1 : 20000稀释用.
实施例4优化试剂盒组成，确定各试剂最终浓度 用方阵法确定包被二抗，19-NT多抗，19-NT-HRP三者的最佳浓度。4. 1包被酶标 板二抗配成2mg/ml浓度，用0. 01M碳酸盐缓冲溶液(pH9. 6)按1 : 1000 (1000 y 1缓冲液 加lyl 二抗)稀释后，每孔加100ia，加盖，放入4t:冰箱过夜。次日用洗涤液洗3次，最 后一次甩干后，每孔加200 ill封闭液，封闭液为含2%卵清蛋白的0. OIM碳酸盐缓冲溶液 (pH9. 6)。加入后，加盖，放入4t:冰箱过夜。次日用洗涤液洗3次，最后一次甩干后，将酶标 板放入37t:烘箱30分钟，烘干。取出后用铝箔真空包装。 4. 2配抗体浓縮液以制备19-NT多抗，1 : 2000稀释(用抗体保存液)。测定时
用抗体稀释液按i : ioo稀释应用。 4. 3配19-NT-HRP浓縮液合成的19_NT_HRP，用酶保存液，按1 : 8稀释。测定时 用抗体稀释液按l : IOO稀释应用。 4. 4配浓縮洗涤液0. 5M PBS液(pH7. 2) +0. 5%体积的Tween-20为洗涤液。用时
用蒸馏水或去离子水按i:9稀释用。 4. 5配抗体稀释液为0. 1M PBS (pH7. 2)加0. 1 %明胶。 4. 6配样品配制液为0. 1M PBS(pH7. 2)力Q 0. 1%水杨酸钠加0. 05%吐温-20。
4. 7配制19-NT标准用样品配制液配。共配制7个标准0ng/m1，0. 05ng/ml， 0. lng/ml， 0. 5ng/ml，1. Ong/ml， 2. Ong/ml， 4. Ong/ml。 4. 8配制显色液显色液由二部份组成，一是"显色缓冲液"，另一是"TMB"液。显 色缓冲液:Na2HP04 1. 84g+柠檬酸0. 47g+H20 100ml+30% H202 50 ii 1， TMB液用95%的乙 醇或用二甲亚砜配成lmg/ml浓度。 4.9配终止液2M硫酸。浓硫酸按1 : 8用水稀释则可。
4. 10试剂盒组成 (1)已包被二抗的96孔或48孔酶标板(真空铝箔包装) (2)19-NT标准7个标准Ong/ml，0. 05ng/ml，0. lng/ml，0. 5ng/ml，1. Ong/ml， 2. Ong/ml ，4. Ong/ml (3) 19-NT抗体浓縮液(用时按1 : 100稀释应用) (4) 19-NT-HRP浓縮液(用时按1 : 100稀释应用) (5)抗体稀释液 (6)显色缓冲液 (7) TMB液 (8)终止液。
(9) 10X洗涤液 (10)样品制备液。 实施5样品处理和测定 5. l测定样品的处理 尿样2ml新鲜尿液加2ml 0. 1M醋酸盐缓冲溶液(pH4. 8)，加40 蜗牛酶液，6ml 蒸馏水，37t:保温4小时，酶解。然后，沸水浴加热5分钟。离心，取上清1ml加4ml预先用 水平衡的三氯甲烷，旋转混合抽提10分钟。离心，取下有机相2ml， N2气吹干，残渣加200 y 1 样品制备液，旋转混合。室温平衡30分钟，作样品测定液。
组织样品lg组织样品加4ml匀桨液(0. 9%氯化钠+0. 1 %水杨酸钠)，匀浆。然
后，沸水浴加热5分钟。匀浆液定容为5ml。离心，取上清lml加4ml预先用水平衡的三氯
甲烷，旋转混合抽提10分钟。离心，取下有机相2ml，N2气吹干，残渣加200 iil样品制备液，
旋转混合。室温平衡30分钟，作样品测定液。 尿样品的稀释系数和组织样品稀释系数均为2。 5. 2样品和标准液的测定 按照说明书第4， 5页所述的检测步骤，用组装好的试剂盒进行测定。 测定所得标准品数椐如下
标准浓度 (pg/ml)050100500100020004000空白
0D4502. 2952. 1931.9141. 2970. 9560. 6050. 3580. 052
2. 3122. 0892.0131. 2650. 9610. 6150. 2240. 081
平均值2. 30352. 1411. 96351.2810. 95850.610. 2910. 0665
测定值2. 2372. 07451.8971.21450.8920. 54350. 2245
抑制率％10092. 7384.854. 2939. 8727.2910. 03 所绘的标准曲线如图3所示。IC5。 = 0. 723ng/ml 实施6试剂盒的各参数 试剂盒的特异性及交叉反应 17H9-NT 100% 17a-19-NT 60% 19-甲基睾酮 10% 甲羟孕酮 <0. 2% 氯地孕酮 <0. 2% 孕酮 <0. 2% 氢化可的松 <0. 2% 准确度用0. 5ng/ml标准做24个孔，重复测定。计算"板内变异"CV = 4. 3%"板 间变异"< 15%。灵敏度为0. 05ng/ml。 精确度用尿做回收试验，分别添加0. lng/m1，0. 5ng/ml， lng/ml其回收率分别 是73%，86%，及84% 试剂盒稳定性S(pg/ml)01005001000200002. 2951. 9141. 2970. 9560. 60537度一周2. 2351. 8071. 2130. 9010. 56937度二周1. 9831. 6571. 0340. 710. 38737度三周1. 7211. 5210. 8320. 6550. 286 热稳定性试验，37度3周，相当于4度保存7. 4个月。可见试剂盒的稳定期在半年 以上。
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权利要求
本发明公开一种测定去甲睾酮(诺龙)的直接竞争酶联免疫试剂盒。其特征包括免疫原的制备，酶标抗原的制备，抗体制备和试剂盒各组份的配制及酶标板的包被。
2. 根据权利l所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，合成去甲睾酮免疫原的方法。用 去甲睾酮溶于无水吡啶，搅拌下，加入羧甲基羟胺，去甲睾酮与羧甲基羟胺的摩尔比为1 : 1.5左右，室温搅拌24小时后，减压抽干吡啶，得黄色油状物。加乙酸乙酯溶解，用蒸馏 水洗三次，分离出有机相。加热减压去乙酸乙酯近干，加3ml乙醚，置冰箱，得白色沉淀。为 去甲睾酮-3-羧甲基肟，再与N-羟基丁二酰亚胺反应，用二环己碳二亚胺(DCC)或水溶性 碳二亚胺{1-乙基_3- (3- 二甲氨丙基)-碳二亚胺；1-环己-3- (2-玛啉-4-乙基)碳二 亚胺_对甲基苯亚磺酸盐}催化，得去甲睾酮_3-羧甲基肟活化物，该活化物与载体蛋白在 碱性条件下，与载体蛋白上氨基相联，为去甲睾酮的免疫原。载体蛋白如牛血清白蛋白，卵 清蛋白，甲状腺球蛋白，大钥匙孔状槭血蓝蛋白。
3. 根据权利1-2所述，其特在于，合成一种酶标抗原的方法用去甲睾酮_3-羧甲基肟活化物，在碱性条件下与酶相联，其酶可为辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，P-半乳糖苷酶。
4. 根据权利1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，试剂盒溶液的优化配制。标准溶液和样品的配制，是用含O. 1% 0. 5%水杨酸钠和0. 05% 0. 1%吐温-20的0. 1 0. 01M的磷酸盐缓冲溶液。抗体稀释液用含0. 1 0. 5%明胶的0. 1 0. 01M磷酸盐缓冲溶液。 显色液为二组份，其中， 一组份为显色缓冲液，由磷酸氢二钠和柠檬酸组成，每毫升含0. 2 0. 5iU 30% H202 ;另一组份为四甲基联苯胺(TMB)液。TMB液用95%乙醇或二甲亚砜配制成lmg/ml浓度。
5. 根据权利l所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，用采用羊抗兔抗体(二抗)包被 96或48孔酶标板。用2%卵清蛋白液封闭孔中未吸附二抗的部位。
6. —种用直接竞争酶联免疫测定方法，测定各种样品中去甲睾酮(诺龙)的方法。其 特征在于(1) 样品的前处理方法。用溶剂抽提方法，大大简化了测定过程。(2) 用权利l-5所述工艺组装的试剂盒测定，检测过程为用包被有羊抗兔抗体的酶标板，加入去甲睾酮抗体，孵育后洗涤甩干，加入标准或样品 溶液和酶标抗原(去甲睾酮_辣根过氧化物酶)，孵育后洗涤甩干，加显色剂显色，终止，测 定。标准或样品去甲睾酮浓度的对数值与0045。值呈反比。以此达到定量测定去甲睾酮的 目的。此直接竞争酶联免疫测定试剂盒，检测范围为0. 05 4ng/ml，灵敏度可达0. 05ng/ ml。
全文摘要
本发明属生物医药领域。公开一种检测去甲睾酮(诺龙)的直接竞争酶联免疫测定试剂盒。本发明提供去甲睾酮抗原合成方案，首先用去甲睾酮合成去甲睾酮-3-羧甲基肟，后者在碳二亚胺催化下，用N-羟基丁二酰亚胺活化，与牛血清白蛋白结合，合成免疫原；与辣根过氧化物酶结合，合成酶标抗原。用免疫原，免疫新西兰大白兔，获得去甲睾酮多抗。测定时，用羊抗兔多抗(二抗)包被酶标板，二抗与去甲睾酮多抗结合，洗涤后加入样品或标准和酶标抗原，显色测定，就可得出结果。本发明试剂盒中配制的各试剂，使用方便。这为食品安全，药物，及体育运动兴奋剂检测中，去甲睾酮的检测，提供一个快速，特异，灵敏和准确的检测方法。
文档编号G01N33/543GK101769921SQ200810204939
公开日2010年7月7日 申请日期2008年12月30日 优先权日2008年12月30日
发明者徐基芳, 王文卓, 王武康 申请人:王武康