专利名称：：一种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种畜牧兽医用诊断试剂，尤其是涉及一种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂。二
背景技术：
：山羊奶的营养组成和含量最接近人类母乳，加之，乳蛋白和脂肪颗粒小，易消化，吸收快，特别是山羊奶不含过敏原，富含多种营养和保健因子，因而，被国际营养界和医学界誉为"唯一可与人类母乳相媲美的天然营养保健品"。近年来，在欧美等发达国家和我国的港澳台地区，以及深圳、广州、福州、北京、上海等大中城市，掀起了山羊奶消费热。山羊奶以高于牛奶34倍的价格热销，产品供不应求，市场开发潜力很大，这是我国目前奶山羊养殖业兴旺的动力。目前随着奶山羊养殖的规模越来越大，奶山羊乳房炎问题显得也更加突出。乳房炎是对奶山羊危害最大的疾病之一。以奶山羊养殖规模和数量最大的省份之一陕西为例，隐性乳房炎的发病率夏季可达到40%，甚至有些羊场超过60%;隐性乳房炎治疗不及时会严重影响产奶量，最后可能发展成为临床型乳房炎，导致奶山羊乳房肿胀，泌乳停止，甚至乳房坏死，给奶山羊养殖者带来严重的经济损失。另外，奶山羊乳房炎在泌乳的各个阶段都可能发生，并且隐性乳房炎的发病率高于临床型乳房炎。患乳房炎的奶山羊不仅泌乳量明显下降，羊奶品质也大大降低，有害微生物含量和抗生素残留超标，严重影响消费者身体健康。因此，快速准确诊断奶山羊乳房炎对于降低奶山羊养殖场损失，提高养殖效率以及保护消费者健康都有着重要的意义。病原微生物感染是导致乳房炎发生的根本原因，从这个意义上讲乳房炎诊断应当以病原微生物的检出与否作为首要依据，但由于导致乳房炎的病原微生物种类繁多，并且其分离鉴定方法费时耗力，检测成本高，难以在生产中推广应用。由于乳房炎发生的整个过程中都伴随着白细胞向炎症部位的浸润，并且炎症程度与白细胞浸润的数量紧密相关，因而乳汁中白细胞数量的测定同样可以指示乳房炎的发生与否以及严重程度。目前国内外绝大多数奶牛乳房炎诊断试剂都是以这一原理设计研发并在实践中得到了肯定。乳房炎发生后乳汁的酸碱度也普遍会发生变化，呈现升高的规律，因此也有一些乳房炎诊断试剂依据乳汁PH值在乳房炎发生过程中的变化特点而设计。奶山羊乳房炎是泌乳动物乳腺的炎症变化，伴有乳汁的生理变化和化学变化，以及微生物和体细胞数目的增加。正常乳汁中体细胞数约在150万/ml至200万/ml之间，pH值在6.06.5之间。当乳房发生炎症时血液中白细胞会迁移到乳腺中，导致乳汁中白细胞数高于200万/ml，白细胞数目升高程度和乳汁中病原菌数量变化呈正相关，同时乳汁pH值也出现升高的规律。白细胞数目越高，奶山羊乳房炎越严重。由于奶山羊和奶牛免疫系统在物种进化上的差异，以及奶山羊和奶牛泌乳机制的差异，显然简单地套用以白细胞数量为依据而设计的奶牛乳房炎诊断液来诊断奶山羊是否患有乳房炎，或者单纯依赖乳汁PH值变化来检测奶山羊乳房炎都是缺乏科学依据的。国际上奶牛的乳房炎以乳汁中的体细胞数超过50万/ml作为诊断的标准，诊断试剂在050万/ml归为阴性和可疑。结合实验室的调查结果以及国内外的一些报道，分析发现正常奶山羊乳汁中白细胞数目远高于患乳房炎奶牛乳汁中的白细胞数量，奶山羊正常乳汁中的体细胞数平均为1.5X107ml，而且患乳房炎奶山羊乳汁中的白细胞数量更高。国外研究表明在阴性和可疑阶段的奶山羊的体细胞数在200万左右。因此用现有的奶牛乳房炎诊断液来诊断奶山羊乳房炎必然导致假阳性结果(19%)，给奶山羊养殖带来不必要的经济损失。奶山羊患乳房炎后分泌的乳汁pH值也会发生变化，一般的由弱酸性向弱碱性变化，这种变化利用指示剂可以准确显示。虽然患乳房炎奶山羊分泌的乳汁pH值普遍存在这一规律，但也有例外，譬如由于动物的代谢问题、其他疾病以及种属特性等原因的影响，正常乳之间的体细胞数量也存在着一定的差异，而且在实际中还存在一些乳汁的pH升高，但体细胞数没有发生变化的个体，使得单纯依赖指示剂法检测乳房炎的假阳性率达18%。因此，仅依赖体细胞或者乳汁pH值变化来检测乳房炎，尤其是奶山羊乳房炎都存在假阳性的问题，势必给养殖场带来不必要的经济损失。因此，研发能够避免上述两种乳房炎诊断液缺陷的新的乳房炎诊断试剂有着重要的实用价值。三
发明内容本发明为了解决上述
背景技术：
中的不足之处，提供一种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂，其能够同时指示奶山羊体细胞数和乳汁pH值变化，用于临床上检测奶山羊是否患乳房炎，使用方便，检测效果好。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为—种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂，其特征在于包括以下原料十二烷基硫酸钠310重量份、氢氧化钠26重量份、溴麝香草酚蓝10重量份，盐酸310重量份和蒸馏水7080重量份。—种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂的制造方法，其特征在于包括以下步骤(1)先将蒸馏水放入洗净的盐水瓶中；(2)然后称量十二烷基硫酸钠溶解在蒸馏水中；(3)待十二烷基硫酸钠完全溶解之后，再加入氢氧化钠溶解，至完全澄清透亮，混合液呈无色；(4)再加入溴麝香草酚蓝溶液(47.4%的乙醇500mL中加入lg溴麝香草酚蓝粉末)；(5)最后加入调节pH值用的盐酸，混匀即可，诊断试剂为深蓝色。与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下本发明结合了指示剂诊断法的特点，弥补了由于奶山羊和奶牛乳汁中体细胞数差异所造成的诊断缺陷，可以对奶山羊的隐形乳房炎进行定期检测，以便及早发现进行治疗，减轻对奶山羊的伤害，减少奶量的损失，增加经济效益。本诊断试剂造价低廉，操作方便，在奶山羊场容易被接受，值得在中小型奶山羊场进行推广使用。四具体实施例方式本发明奶山羊隐性乳房炎诊断试剂包括以下原料十二烷基硫酸钠310重量份、氢氧化钠26重量份、溴麝香草酚蓝10重量份、盐酸310重量份和蒸馏水7080重量份。实施例1:氢氧化钠2g、十二烷基硫酸钠3g、溴麝香草酚蓝10g、盐酸3mL和蒸馏水70mL。实施例2:氢氧化钠4g、十二烷基硫酸钠6g、溴麝香草酚蓝10g、盐酸4mL和蒸馏水75mL。实施例3:氢氧化钠6g、十二烷基硫酸钠10g、溴麝香草酚蓝10g、盐酸10mL和蒸馏水80mL。其中，蒸馏水pH值在6.0左右，最好为三蒸水；溴麝香草酚蓝溶液配方如下47.4X的乙醇500mL中加入lg溴麝香草酚蓝(指示剂)粉末，乙醇为分析纯，指示剂为分析纯；盐酸按照l:io稀释使用。配制方法1、先按实施例中的配比将原料准备好，将蒸馏水放入洗净的盐水瓶中；2、然后称量十二烷基硫酸钠溶解在蒸馏水中；3、待完全溶解之后，加入相应的氢氧化钠溶解，至完全的澄清透亮，混合液呈无色；4、再加入溴麝香草酚蓝溶液；5、最后加入调节pH值用的盐酸，混匀即可，诊断试剂为深蓝色。检测方法取约2ml的新鲜奶样放在检测盘中，加入lmL诊断试剂缓慢摇动，观察颜色变化；然后补足2mL诊断试剂，摇动观察凝胶沉聚变化，综合两步的检测结果，作出最终判定。乳汁中加入该诊断试剂后，无沉淀或凝胶样现象出现，同时混合液呈黄色或黄绿色，则判定为未患乳房炎；乳汁中加入该试剂后，有沉淀或凝胶样现象出现，同时混合液颜色呈蓝绿色或蓝色，则判定为患乳房炎；少数情况下，乳汁中加入该诊断试剂后，有沉淀出现，但混合液呈黄色或黄绿色，仍判为患乳房炎；个别情况下，乳汁中加入该诊断试剂后，无沉淀或凝胶样现象出现，但颜色呈蓝绿色或蓝色，则判为未患乳房炎。诊断试剂中的十二烷基硫酸钠是阴离子表面活性剂，能溶解细胞膜，破坏乳中的体细胞，产生核酸；氢氧化钠有利于DNA的释放，DNA再与十二烷基硫酸钠结合产生凝胶。乳汁中体细胞数越多，释放的DNA就越多，产生的凝胶就越多，乳腺炎的感染程度越大。氢氧化钠在诊断试剂中能加速细胞电荷的改变，有利于变形细胞之间的凝结。溴麝香草酚蓝是一种酸碱指示剂，变色范围P朋.0(黄)7.6(蓝)。效果检测在奶羊场随机采集新鲜奶样170份，进行细菌培养，然后利用本诊断试剂实施例1进行检测。对每一份样品进行绵羊鲜血平板和普通琼脂平板接种，每板接种奶样100iU，37t:培养箱中培养1824h，观察菌落生长情况和革兰氏染色，确定细菌生长情况。在170份奶样中99份检出了乳房炎致病菌，利用本诊断试剂进行指示剂和凝胶沉聚综合检测，结果检出了101份阳性奶样。实施例2、3的检测结果与实施例1的相差不大，不再详细说明。检测报告本诊断试剂在陕西凤翔范家寨乡奶山羊场，西北农林科技大学畜牧厂和白水县林皋镇奶山羊场进行了效果检测试验。到达奶山羊场后由挤奶工挤奶，实验人员收取奶样。利用奶牛诊断盘收取2ml奶样，依照本诊断试剂说明书进行操作与判定。随即采样依照病原菌分离方法进行细菌分离，对照诊断试剂检测结果进行效果评估。检测结果见表_1、表_2和表_3。表-1:陕西凤翔范家寨乡奶山羊场检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表-3:白水县林皋镇奶山羊场检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注YLMT-1为上述配方实施例权利要求一种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂，其特征在于包括以下原料十二烷基硫酸钠3～10重量份、氢氧化钠2～6重量份、溴麝香草酚蓝10重量份、盐酸3～10重量份和蒸馏水70～80重量份。2.根据权利要求1所述的一种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂的制造方法，其特征在于包括以下步骤(1)先将蒸馏水放入洗净的盐水瓶中；(2)然后称量十二烷基硫酸钠溶解在蒸馏水中；(3)待十二烷基硫酸钠完全溶解之后，再加入氢氧化钠溶解，至完全澄清透亮，混合液呈无色；(4)再加入溴麝香草酚蓝溶液；(5)最后加入调节pH值用的盐酸，混匀即可，诊断试剂为深蓝色。全文摘要本发明涉及一种奶山羊隐性乳房炎快速诊断试剂，其能够同时指示奶山羊体细胞数和乳汁pH值变化，用于临床上检测奶山羊是否患乳房炎，使用方便，检测效果好。本发明包括以下原料十二烷基硫酸钠3～10重量份、氢氧化钠2～6重量份、溴麝香草酚蓝10重量份，盐酸3～10重量份和蒸馏水70～80重量份。制造方法包括以下步骤(1)先将蒸馏水放入洗净的盐水瓶中；(2)然后称量十二烷基硫酸钠溶解在蒸馏水中；(3)待十二烷基硫酸钠完全溶解之后，再加入氢氧化钠溶解，至完全澄清透亮，混合液呈无色；(4)再加入溴麝香草酚蓝溶液；(5)最后加入调节pH值用的盐酸，混匀即可，诊断试剂为深蓝色。文档编号G01N21/82GK101693917SQ200910024340公开日2010年4月14日申请日期2009年10月16日优先权日2009年10月16日发明者尚川川,席功科,罗军,陈德坤,韩炎森申请人:西北农林科技大学;