专利名称：：治疗骨质疏松症的复方鹿茸健骨胶囊的制作方法
技术领域：
：本发明涉及治疗骨质疏松症的复方鹿茸健骨胶囊、其制备方法和其质量控制方法。
背景技术：
：骨质疏松症是以骨量减少为特征，骨组织的显微结构改变和骨折危险频率增加的疾病，尚属临床常见病、多发病之一，且病程长，直到近10年才逐渐得到人们的重视。此病在中老年人中多见。据报道我国部分地区60岁以上老年人骨质疏松症的发病率达59.87%，因骨质疏松症而并发骨折的发生率达9.6%。据1993年香港第四届国际骨质疏松研究会报告，老年男性患骨质疏松症者占21.2%,绝经后的妇女占34.5%，而我国现有老年人数已达一亿三千万。国际医学界已把骨质疏松症与高血压、动脉硬化、糖尿病、肿瘤并列为老年人的重要疾病。对于本病目前一般多采用大剂量钙剂，雌、孕激素，降钙素，维生素D类药物进行治疗，但由于药品来源、使用方法、生物利用度、价格、毒副作用等原因尚不能在我国广泛应用。西医称之为"骨质疏松症"尚属祖国中医"骨痿"范畴。中医学认为，腰为肾之府，肾主骨，肾阳衰微不能温养腰腑及骨骼，引起形寒骨痛。肾阴不足，髓减骨弱，骨质失养，故腰膝酸痛，耳鸣或耳聋，发白早脱等，从而可见骨痿与肾虚密切相关。
发明内容在此基础上，本发明人进行了广泛深入的研究，结果发现，鹿耷、何首乌、龟甲、杜仲、紫河车、当归、三七、水蛭、砂仁配伍组合为复方鹿茸健骨胶囊;经药理学研究证明复方鹿茸健骨胶囊可抑制去卵巢所致的骨质疏松症大鼠的体重和骨质的降低以及长度的缩短，增加骨强度和骨密度，减少骨钙的丢失。复方鹿茸健骨胶囊对维甲酸所致的大鼠骨质疏松症有较好的治疗作用。给予复方鹿茸健骨胶囊组骨重、骨长、骨密度和骨强度明显高于模型组。病理组学检查又表明复方鹿茸健骨胶囊治疗的骨质疏松症大鼠的破骨细胞减少，成骨细胞明显活跃，此外复方鹿茸健骨胶囊可显著改善肾阳虚小鼠的阳虚症状，具有一定镇痛和免疫增强作用。鹿茸《中药学大辞典》"壮元阳，补气血，益精髓，强筋骨。"《药性论》"主补男子腰肾虚冷，脚膝无力。"《日华子本草》"补虚赢，壮筋骨，破瘀血，安胎下气"。何首乌《中药学大辞典》"补肝，益肾，养血。"《滇南本草》"涩精，坚肾气，止赤白便浊，缩小便。"《药品化义》"益肝，敛血，滋阴。治腰膝软弱，筋骨酸痛，止肾泻。"龟甲《中药学大辞典》"滋阴潜阳，补肾壮阳。"《日用本草》"治腰膝酸软，不能久立。"《纲目》"治腰脚酸痛，补心肾，益大肠，消痈肿。"杜仲《中药大辞典》"补肝肾，强筋骨，安胎，治腰脊酸痛，足膝痿弱，小便余沥。"《药性论》"主肾冷，肾虚腰痛。"《玉楸药解》"益肝肾，养筋骨，去关节湿淫，治膝酸痛，腿足拘挛。"紫河车《本草拾遗》"主血气羸瘦，妇人劳损，面皮黑。"《本草再新》"大补元气，理血分，治神伤梦遗。"当归《中药大辞典》"补血和血，调经止痛。"《珍珠囊》"头破血，身行血，尾止血。"《纲目》"治痛疽，排脓止痛，和血补血。"三七《纲目》"止血，散血，定痛。"《玉楸药解》"和营止血，通脉行瘀、行瘀血而敛新血。"水蛭《中药大辞典》"破血，逐瘀，通经。"《本经》"主逐恶血，瘀血，月闭，破血瘕积聚，无子，利水道。"砂仁《纲目》"补肺醒脾，养胃益肾，理元气，通滞气，散寒饮胀痞。"6《医林纂灵》"润肾补肝，补命门，和脾胃，开郁解。"方中选用鹿茸甘温入肾经，补肾阳，强督脉，向为补精填髓，助阳起痿之要药，《本草纲目》"生精补髓，养血益阳，强筋健骨，治一切虚损。"制何首乌补肝肾益精血强筋骨，二药共为君药，有阳生阴长之意，维护人体的元阴元阳以维护人体之本元，使阴阳归于平秘，精髓充盈，骨正筋柔痼疾可除。臣以龟甲甘咸入肾经，滋养肝肾育阴潜阳。与君药鹿茸伍用，撷取龟鹿二仙之义；杜仲甘温补肝肾强筋骨，用于肾虚腰痛筋骨无力；紫河车温肾补精，益气养血，三臣药不仅辅助君药增强补肾之力，而且又有益气养血之功。佐以三七化瘀行滞，消肿定痛。《医学中衷参西录》"化瘀血而不伤新血允为理血妙品。"水蛭活血祛瘀，通络和营，当归补血活血，《本草备要》"血滞能通，血虚能补，血枯能润，血乱能抗"三者伍用，疏其气血，濡养骨脉，佐助君臣药补不碍邪，行不妨正，相得益彰。使以砂仁健脾和胃，斡旋中州，升降气机，以助行药势，《本草疏经》说"为开脾胃之要药，和中气之正品，若兼肾虚气不归元之非此为向导不济。"诸药合用，共奏补肾壮骨活血止痛之功效。现代药理研究还证明，鹿茸有强壮作用，为良好的全身强壮剂。对长期不易愈合和一时新生不良的溃疡和创口，能增强再生过程。还可以促进健康人淋巴细胞转化的作用，可能为免疫促进剂。制何首乌具有促进红细胞生长发育和增强抗寒能力以及抗菌的作用。此外还对离体蛙心有兴奋作用，特别对疲劳的心脏，强心作用更显著。龟甲含有胶质，脂肪和钙盐等成分，有强壮、免疫促进和抑制结缔组织增生、消结块、增加血浆蛋白的作用。杜仲煎剂有扩张血管、增强机体免疫功能、镇痛抗炎、降低血清胆固醇的作用。紫河车有抗感染、增强机体抵抗力和激素样作用。当归能显著扩张冠脉，使血流量明显增加。对物质代谢和内分泌有一定影响，内含的挥发油能使大脑镇静。还可以降低血小板凝聚及抗血栓形成。水蛭素不受热或乙醇的破坏，能阻止凝血酶对纤维蛋白元之作用，阻止血液凝固。三七能影响血小板的聚集，有显著抗凝作用。扩张冠脉，增加冠脉流量，镇痛抗炎，抗菌保肝的作用。具体而言，本发明涉及1、治疗骨质疏松症的复方鹿茸健骨胶囊，其有效成分由下列原料药制成鹿茸40g制何首乌240g龟甲240g杜仲180g紫河车60g当归140g三七60g水蛭35g砂仁80g。2、制备如上1所述胶囊的方法，取鹿茸、紫河车、三七、制何首乌60g，粉碎成细粉；剩余制何首乌用7倍量70%乙醇回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓縮至相对密度为1.281.30/60'C的稠膏备用；取龟甲，加8倍量水煎煮3次，第一次3小时，第二、三次各2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；取当归、砂仁加5倍量水，蒸馏提取挥发油4小时，收集挥发油，将P环糊精与20%乙醇按l:5研匀后，加入挥发油，挥发油与e环糊精按1:10，置胶体磨中碾磨15分钟，冷藏24小时，滤过，40'C干燥，过80目筛，备用，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣备用；取杜仲、水蛭，加10倍量水，煎煮2小时，滤过，滤液放置，药渣与上述备用药渣混合，加8倍量水，煎煮2小时，滤过，合并上述各煎煮液，浓縮至相对密度为1.281.30/60°0}的稠膏；与上述醇提取膏合并，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，加入挥发油包合物，混匀，制颗粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。3、控制如上1所述胶囊产品质量的定性方法，选自如下方法(1)取本品内容物4g，加50X乙醇40ml，置沸水浴加热2分钟，滤过，沉淀物干燥，研细，取少许，滴加水合氯醛试液，置显微镜下观察；可见碎断的茸毛和毛干；骨疏质和骨密质碎块，呈不规则形状的棕黄色碎块，大小不一，边缘弯曲，表面呈现乱纹及点状孔隙，骨陷窝较多，大多呈类圆形；(2)取本品内容物5g,加60-卯。C石油醚50ml,冷浸过夜，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取紫河车对照药材lg，加60-90'C石油醚10ml，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2fi1、对照药材溶液ljil，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一甲醇一冰醋酸按15:0.5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本品内容物6g，加甲醇30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯化钠饱和水溶液15ml使溶解，移入分液漏斗中，用乙醚提取两次，每次30ml，弃去乙醚液，继用水饱和正丁醇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和氨试液洗涤两次，每次20ml，弃去碱液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rgl、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各lfil，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲垸一乙酸乙酯一甲醇一水按15:40:22:10于l(TC以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在IOO'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)取砂仁对照药材2g，力卩60-90。C石油醚10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取如上(2)项下的供试品溶液及上述对照药材溶液各5ftl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一甲醇一冰醋酸按15:0.5:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯于365mn下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。4、控制如上1所述胶囊产品质量的定量方法，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定如下色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—甲醇—0.1%磷酸水溶液按32:50:18为流动相；流速为0.9ml/分；检测波长为254nm;理论板数按大黄素峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备精密称取大黄素5mg，置于50ml的量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取3ml，置25ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；每lml中含大黄素12fig;9供试品溶液的制备取本品约l.lg,研细，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5moI/L硫酸10ml，超声处理5分钟，再加三氯甲垸10ml，加热回流l小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲垸提取3次，每次10ml,合并三氯甲烷液，60'C以下挥去三氯甲烷，残渣加三氯甲烷一甲醇按4:6混合液溶解至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.45pm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOpl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含制何首乌以大黄素dsHn)Os计，不得少于65jig。复方鹿茸健骨胶囊对于去卵巢大鼠骨质疏松症有较好的治疗作用，可抑制骨松症大鼠骨重的降低及骨长度的縮短，增加骨密度和骨强度，减少骨钙和血钙的丢失。复方鹿茸健骨胶囊对于维甲酸所致的大白鼠骨质疏松症有较好的治疗作用。给予复方鹿茸健骨胶囊组的大鼠骨重、骨长度、骨密度和骨强度明显高于模型组。病理检查表明复方鹿茸健骨胶囊组大鼠的破骨细胞较少，成骨细胞明显活跃。复方鹿茸健骨胶囊可以显著改善氢化可的松造成的阳虚小鼠的阳虚症状，表现在能对抗阳虚小鼠体温降低。此外，复方鹿茸健骨胶囊具有一定的活血化瘀、镇痛和免疫增强作用。复方鹿茸健骨胶囊的药效学实验报道如下。实验材料药物复方鹿茸健骨胶囊为胶囊制剂，药粉为棕色。每克粉含生药3.18克，每粒胶囊含粉0.36克。由长春中医学院附属药厂提供。批号960906。骨疏康颗粒为辽宁省东港市制药厂产品，批号951103。每袋12克。维甲酸为山东良福制药有限公司产品，批号961208。氢化可的松注射液为大连第四制药厂产品，含量0.5%。血清钙试剂盒为北京中生生物技术公司产品。实验动物Wistar大鼠，$150190克，早220260克；昆明种小鼠体重1822克。雌雄兼用。均为吉林省中医中药研究院动物室提供。动物合格证号为960101017，960101018。实验方法和结果l.复方鹿茸健骨胶囊对去卵巢所致的雌性大鼠骨质疏松症的影响将雌性大鼠乙醚麻醉，腹位固定，然后在最末肋骨下，距脊椎柱外侧约2cm处，去毛消毒，纵行切开皮肤约1.5cm，剥离肌肉组织，结扎输卵管，再摘除卵巢，将子宫角送回腹腔中，施青霉素药粉，缝合切口。同法切除另一侧卵巢[1]。术后，将去卵巢大鼠60只，随机分五组。分别为模型组、骨疏康颗粒组、复方鹿茸健骨胶囊高、中、低剂量组。对照组为同批大鼠12只，施假手术，灌胃蒸馏水10ml/kg,阳性药组灌胃骨疏康颗粒2.0g/kg，，复方鹿茸健骨胶囊高、中、低剂量组3.2、1.6、0.8g(生药)/kg。每日一次，连续3个月，末次给药后称体重，禁食12小时，不禁水。取血用于血清钙测定。取大鼠前肢肱骨，作病理组织学检査。取两侧后肢胫骨，剔除软组织，测量胫骨长度和直径，并称胫骨重量，计算平均值。采用北京产SD-100型单光子骨密度仪测定左侧颈骨骨密度。用自制强度计测定骨强度值。取右胫骨测定骨钙含量。结果见表l、2。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实验结果表明，去卵巢大鼠出现明显骨质疏松症状，表现在骨重减轻，骨长缩短，骨密度和骨强度降低，血钙和骨钙降低。模型病理组织学表现为骨皮质变薄，骨小梁数量减少，并明显变细，成骨细胞数量减少，破骨细胞数量增加。经复方鹿茸健骨胶囊治疗后，可使大鼠骨重和骨长度增加，骨密度和骨强度增强，骨和血钙含量增加，病理检査骨小梁增粗、骨皮质厚度增加，软骨细胞增生活跃，骺板变宽。这一结果表明复方鹿茸健骨胶囊对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症有明显的治疗作用。2.复方鹿茸健骨胶囊对维甲酸所致骨质疏松大鼠的影响取雄性大鼠，随机分6组，分别为正常对照组、模型对照、阳性对照和复方鹿茸健骨胶囊高、中、低剂量组。正常对照组，每日灌胃蒸馏水；模型组，每日灌胃维甲酸70mg/kg;阳性药组每日灌胃维甲酸70mg/kg同时，灌胃骨疏康颗粒2.0gAcg;复方鹿茸健骨胶囊高、中、低剂量组灌胃70mg/kg维甲酸，同时灌胃复方鹿茸健骨胶囊3.2、1.6、0.8g(生药)/kg[2]。两周后停服维甲酸，继续给药两周。末次给药后1小时处死大鼠，取胫骨称重，测胫骨长度、直径、骨密度和骨强度。取胫骨作病理学检查。结果见表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>结果表明模型组动物骨重、骨长、骨密度和骨强度都明显低于正常对照组。模型组病理组织学出现明显骨质疏松表现，给予复方鹿茸健骨胶囊的大鼠骨重、骨长、骨密度和骨强度均高于模型组，复方鹿茸健骨胶囊组大鼠病理检查骨皮质变厚，骨小梁增粗，破骨细胞减少，成骨细胞明显活跃。结果表明复方鹿茸健骨胶囊对维甲酸所致的大鼠骨质疏松症有较好的治疗作用。3.复方鹿茸健骨胶囊对肾阳虚小鼠的影响取小鼠60只，随机分为6组，为正常对照组、模型组、阳性药组、复方鹿茸健骨胶囊高、中、低剂量组。给药剂量分别为骨疏康颗粒3g/kg，复方鹿茸健骨胶囊6、3、1.5g(生药)/kg，模型组和正常对照组给予等体积水。同时，除正常对照组外，其余各组小鼠均肌注氢化可的松O.lml/只，每日一次，连续15日，每5日称体重、测体温一次。末次给药后1小时，测体重、体温(用上海产数字温度计测定)，测5分钟内自主活动次数(XZC-4型小鼠自主活动测定仪，黑龙江省牡丹江市中华电器厂产品)结果见表4。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>结果表明给予氢化可的松小鼠体重和体温较正常对照组小鼠均显著降低，自主活动次数较正常对照减少。给予复方鹿茸健骨胶囊的阳虚小鼠体温升高，与模型组比较差异显著。5分钟内小鼠自主活动次数与模型组比较有增加趋势。体重无明显增加。4.复方鹿茸健骨胶囊对血液流变学的影响取大鼠45只，随机分为5组，按表5所示剂量分组给药，对照组给等体积水。每日灌胃一次，连续7日，末次给药后l小时，用35mg/kg戊巴比妥钠麻醉。腹主动脉取血4ml，肝素抗凝。用WTB型毛细血管粘度计测定全血粘度，血桨粘度、红细胞压积和纤维蛋白原。其结果见表5。表5.复方鹿茸健骨胶囊对大鼠血液流变学的影响(X±SD)组别动物数全血粘度血浆粘度红血球压积纤维蛋白原Cg/kg)(只)80S—120S-1(%)(%)正常对照94.18±0.444.59±0.261.59±0.1040.78±2.112.98士O.45骨疏康颗粒2.093.88±0.17#4.39±0.291.47±0.09#41.00±1.732.48±0.45#复方鹿茸健骨胶囊3.293.81±0.17#4.46±0.271.49±0.06s41.40±1.672.58±0.46复方鹿茸健骨胶囊1.693.82±0.22#4.35±0.331.50±0.04s40.88±2.202.53±0.43s复方鹿茸健骨胶囊0.893.92±0.314.31±0.301.50±0.0939.33土2.692.42±0.36s(与对照组比较#P<0.05，##P<0.01，下同)结果表明复方鹿茸健骨胶囊对大鼠全血粘度和血浆粘度均有明显降低作用，对血桨纤维蛋白原含量也有降低作用，但对红血球压积无明显影响。5.复方鹿莺健骨胶囊对小鼠的镇痛作用(l)热板法取雌性小鼠放于热板上(GJ-8402型热板测痛仪，浙江产)筛选。以自小鼠放在热板上至出现舔后足所用的时间(秒)，作为该鼠痛阈值，取痛阈值在1025秒的小鼠50只，随机分5组，按表6所示剂量灌胃给药，每日1次，连续7日，末次给药后l、3、5小时，测小鼠痛阈值，结果见表6。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>结果表明复方鹿茸健骨胶囊可延长小鼠痛阈值，与正常对照组比较差异显著。(2)化学刺激法取小鼠50只。随机分5组，按表7所示剂量灌胃给药，每日l次，连续7日，末次给药后l小时，各鼠均腹腔注射l^冰醋酸10ml/kg，观察10分钟内，每只小鼠出现扭体反应的扭体次数。结果见表7。表7.复方鹿茸健骨胶囊对小鼠的镇痛作用(扭体法，X土SD)组别动物数扭体次数抑制百分率P(g/kg)(只)(10分钟内)(%)正常对照1017.3±8.7骨疏康颗粒3.01011.9±9.631.3>0.05复方鹿茸健骨胶囊6.0105.3±6.869.4<0.01复方鹿茸健骨胶囊3.01012.2±7.929.4>0.05复方鹿茸健骨胶囊1.51012.8±9.926.0>0.05结果表明复方鹿茸健骨胶囊能明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，其中以高剂量组效果最为显著。6.对小鼠体内碳粒廓清功能的影响取小鼠50只，随机分5组，按表8所示剂量灌胃给药，每日1次，连续7日，末次给药后1小时，各组小鼠均尾静脉注射稀释(1:4)的一得阁墨汁10ml/kg，然后在2和15分钟，眼眶静脉采血0.05ml，加入盛有5ml0.01^Na2CO3溶液试管中，摇匀后，在560nm处比色。并计算吞噬指数K值(K^10gOD广10gOD2/13)结果见表8。表8.复方鹿茸健骨胶囊对小鼠吞噬功能的影响(X土SD)组别动物数吞噬指数P(g/kg)(只)(K)正常对照一100.0171±0.0090骨疏康颗粒3.0100.0211±0.0082>0.05复方鹿茸健骨胶囊6.0100.0372±0.0208<0.05复方鹿茸健骨胶囊3.0100.0281±0.0141>0.05复方鹿茸健骨胶囊1.5100.0191±0.0128>0.05结果表明复方鹿茸健骨胶囊高剂量组有增加单核巨噬细胞吞噬功能的作用，与对照组比较有显著性差异。骨质疏松的主要病理特征为骨含量减少，骨组织的显微结构改变及骨折危险频度增加。它可分为原发性和继发性两种类型。原发性骨质疏松增长发病率的95%以上。多以老年人或绝经后妇女为主[3]。现代研究表明，绝经后(包括手术绝经)妇女由于性腺功能衰退，雌激素分泌不足，可导致骨转换率增加，骨吸收大于骨形成，而患骨质疏松症[3]。我们用成年雌性大鼠，摘除卵巢，模拟了骨质疏松这一动物模型。模型组与正常对照组比较骨重、骨长、骨密度、骨强度及血钙和骨钙明显降低，表明模型成立。给予复方鹿茸健骨胶囊的大鼠，骨长度、骨密度、骨强度及血钙和骨钙明显高于模型组(见表l、2)表明复方鹿茸健骨胶囊可抑制或缓解骨质疏松症的发生。维甲酸是维生素A的衍生物，它可以引起大鼠胫骨骨小梁密度减少，间隙增大，胫骨中段骨皮质变薄，骨髓腔扩大，而导致大鼠发生骨质疏松症[4]。复方鹿茸健骨胶囊可使维甲酸造成的骨质疏松大鼠骨重量、骨长、骨强度和骨密度明显高于模型组(见表3)。表明复方鹿茸健骨胶囊对维甲酸造成的骨质疏松症有治疗作用。病理组织学检査结果也有证明，复方鹿茸健骨胶囊对去卵巢和维甲酸所致的骨质疏松症有较好的治疗作用。祖国医学称骨质疏松症为骨痿。认为肾主藏经，其充在骨。年老体衰，肾虚则骨无以充，营养不良，脾胃虚弱，气血生化之源受到影响，筋骨得不到濡养，或肢体长期滞动，气血运行缓慢，筋骨濡养不足，均可导致骨痿[5〕。实验采用肾阳虚小鼠观察，结果表明复方鹿茸健骨胶囊有对抗肾阳虚作用(见表4)。说明复方鹿茸健骨胶囊是以补肾益精充髓途径，而达壮骨作用。复方鹿茸健骨胶囊降低全血粘度特别是高切变指标明显，对血桨粘度也有明显减低作用，可明显减低血纤维蛋白原含量。说明本品有一定的活血化瘀作用。骨质疏松症多伴有疼痛，我们采用热板法和化学刺激法，实验证明复方鹿茸健骨胶囊对小鼠有镇痛作用，这有利于临床缓解症状。此外，复方鹿茸健骨胶囊有增强小鼠单核一巨噬细胞的吞噬功能。说明本品有一定免疫增强作用。综上所述，通过摘除卵巢和维甲酸所致骨质疏松模型，证明复方鹿茸健骨胶囊有明显的对抗骨质疏松作用。对小鼠阳虚症状有明显的治疗作用。同时有一定活血化瘀、镇痛和免疫增强作用。参考文献1.沈霖等，青娥丸加味对大鼠卵巢切除诱导的实验性骨质疏松症的影响中医研究1994;7(2):19.2.谭正怀等，补天生力胶囊治疗老年性骨质疏松的药理研究中成药1996;18(1):29.3.张世斌，骨质疏松症及其诊断与防治中国老年学杂志1996，16专刊2.4.吴波等，维A酸致大鼠骨质疏松模型与机理研究药学学报1996;31(4):241.5.高根德，中西医结合骨科临床手册人民卫生出版社第一版北京1996，391.权利要求1、治疗骨质疏松症的复方鹿茸健骨胶囊，其有效成分由下列原料药制成鹿茸40g制何首乌240g龟甲240g杜仲180g紫河车60g当归140g三七60g水蛭35g砂仁80g。2、制备如上1所述胶囊的方法，取鹿茸、紫河车、三七、制何首乌60g，粉碎成细粉；剩余制何首乌用7倍量70%乙醇回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓縮至相对密度为1.281.30/6(TC的稠膏备用；取龟甲，加8倍量水煎煮3次，第一次3小时，第二、三次各2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；取当归、砂仁加5倍量水，蒸馏提取挥发油4小时，收集挥发油，将e环糊精与20%乙醇按l:5研匀后，加入挥发油，挥发油与e环糊精按1:10，置胶体磨中碾磨15分钟，冷藏24小时，滤过，4(TC干燥，过80目筛，备用，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣备用；取杜仲、水蛭，加10倍量水，煎煮2小时，滤过，滤液放置，药渣与上述备用药渣混合，加8倍量水，煎煮2小时，滤过，合并上述各煎煮液，浓縮至相对密度为1.281.30/6(TC的稠膏；与上述醇提取膏合并，加入上述细粉，混匀，千燥，粉碎成细粉，加入挥发油包合物，混匀，制颗粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。3、定性测定如上l所述胶囊产品质量的方法，选自如下方法(1)取本品内容物4g，加50X乙醇40ml，置沸水浴加热2分钟，滤过，沉淀物干燥，研细，取少许，滴加水合氯醛试液，置显微镜下观察；可见碎断的茸毛和毛干；骨疏质和骨密质碎块，呈不规则形状的棕黄色碎块，大小不一，边缘弯曲，表面呈现乱纹及点状孔隙，骨陷窝较多，大多呈类圆形；(2)取本品内容物5g，加60-9(TC石油醚50inl，冷浸过夜，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取紫河车对照药材lg，加60-90'C石油醚10ml，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2nl、对照药材溶液ljil，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一甲醇一冰醋酸按15:0.5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本品内容物6g，加甲醇30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯化钠饱和水溶液15ml使溶解，移入分液漏斗中，用乙醚提取两次，每次30ml，弃去乙醚液，继用水饱和正丁醇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和氨试液洗涤两次，每次20ml，弃去碱液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rgl、三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各lnl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水按15:40:22:10于1(TC以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100。C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)取砂仁对照药材2g，加60-90'C石油醚10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取如上(2)项下的供试品溶液及上述对照药材溶液各5^U，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一甲醇一冰醋酸按15:0.5:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯于365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。4、定量测定如上1所述胶囊产品质量的方法，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定如下色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈一甲醇一0.1%磷酸水溶液按32:50:18为流动相；流速为0.9ml/分；检测波长为254nm;理论板数按大黄素峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备精密称取大黄素5mg，置于50ml的量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取3ml，置25ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；每lml中含大黄素12jig;供试品溶液的制备取本品约l.lg，研细，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸10ml，超声处理5分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流l小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量三氯甲垸洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，60。C以下挥去三氯甲垸，残渣加三氯甲烷一甲醇按4:6混合液溶解至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.45fim微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOfll,注入液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含制何首乌以大黄素0:15111((05计，不得少于65pg。全文摘要一种治疗骨质疏松症的复方鹿茸健骨胶囊，涉及中药制备
技术领域：
，本发明涉及治疗骨质疏松症的复方鹿茸健骨胶囊，及其制备方法和其质量控制方法。其有效成分由鹿茸、制何首乌、龟甲、杜仲、紫河车、当归、三七、水蛭、砂仁原料药制成，主要采用煎煮、乙醇回流提取等制备工艺。文档编号G01N30/00GK101574498SQ20091006654公开日2009年11月11日申请日期2009年2月20日优先权日2009年2月20日发明者冷向阳,孙立群,张文泰申请人:白求恩医科大学制药厂