一种温补气血的中药组合物及其制备方法、质量控制方法

专利名称：：一种温补气血的中药组合物及其制备方法、质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药组合物及其制备方法、质量控制方法，特别涉及一种温补气血的中药组合物制剂及其质量控制方法。
背景技术：
：中医认为疲劳是由于体力、脑力的过度透支，或不合理的生活方式，或不良精神情绪剌激，干扰了人体的正常活动而造成的。《黄帝内经》中认为"疲劳"即"有所劳倦，形气衰少"、"血气乃竭，令人解"，其表现为"倦、身重、体重、四肢不举"等症状，其病机多为气血不足，脏腑功能衰弱。由党参、白术(炒)、茯苓、炎甘草、当归、川芎、白芍(酒炒)、熟地黄、炙黄芪、肉桂等十味中药组合而成的中药组合物制剂作为温补气血的中药，临床效果甚佳。党参为桔梗科植物党参Codonopsispilosula(Franch.)Na皿f.、素花党参CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.)LT.Shen或川党参CodonopsistangshenOliv.的干燥根。秋季采挖，洗净，晒干。白术为菊科植物白术Atractylodesmacroc印halaKoidz.的干燥根茎。冬季下部叶枯黄、上部叶变脆时采挖，除去泥沙，烘干或晒干，再除去须根。茯苳为多孔菌科真菌茯苳Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。多于79月采挖，挖出后除去泥沙，堆置"发汗"后，摊开晾至表面干燥，再"发汗"，反复数次至现皱纹、内部水分大部散失后，阴干，称为"茯苓个"；或将鲜茯苓按不同部位切制，阴干，分别称为"茯苓皮"及"茯苓块"。甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、胀果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根及根茎。春、秋二季采挖，除去须根，晒干。当归为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根。秋末采挖，除去须根及泥沙，待水分稍蒸发后，捆成小把，上棚，用烟火慢慢熏干。川芎为伞形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort.的干燥根茎。夏季当茎上的节盘显著突出，并略带紫色时采挖，除去泥沙，晒后炕干，再去须根。白芍为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall.的干燥根。夏、秋二季采挖，洗净，除去头尾及细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。熟地黄为生地黄的炮制加工品。炙黄芪为黄芪的炮制加工品。肉桂为樟科植物肉桂Cinnamom咖cassiaPresl的干燥树皮。多于秋季剥取，阴干。
发明内容本发明目的在于提供一种温补气血的中药组合物；本发明第二个目的在于提供一种温补气血的中药组合物的制备方法；本发明的第三个目的在于提供该中药组合物制剂的质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明一种温补气血的中药组合物制剂的原料组成为党参40-120重量份、白术(炒)40-120重量份、茯苓40-120重量份、炙甘草20-60重量份、当归80-160重量份、川芎20-60重量份、白芍(酒炒)40-120重量份、熟地黄80-160重量份、炙黄芪40-120重量份、肉桂5-40重量份。本发明一种温补气血的中药组合物制剂的原料组成优选为党参80重量份、白术(炒)80重量份、茯苳80重量份、炎甘草40重量份、当归120重量份、川芎40重量份、白芍(酒炒)80重量份、熟地黄120重量份、炙黄芪80重量份、肉桂20重量份。本发明一种温补气血的中药组合物制剂的制备方法为以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、丸剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、或口服液体制剂。本发明一种温补气血的中药组合物丸剂的制备方法优选为以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜3550g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。本发明一种温补气血的中药组合物膏剂的制备方法优选为以上十味，加水煎煮三次，第一、二各次2小时，第三次1小时合并煎液，滤过，滤液静置24小时，取上清液减压浓縮至相对密度为1.281.32(8390°C)的清膏。每100g清膏加炼蜜700g，混匀，加热至沸，滤过，即得。本发明一种温补气血的中药组合物酒剂的制备方法优选为以上十味，粉碎成粗粉，用白酒1720体积份作溶剂，浸渍48小时，以每分钟13ml的速度缓缓渗漉，收集漉液，加入蔗糖172重量份，搅匀，静置，滤过，即得。本发明一种温补气血的中药组合物颗粒剂的制备方法优选为以上十味，当归、川芎、白术、白芍、肉桂粉碎成粗粉，用50%乙醇作溶剂，浸渍24小时后缓缓渗漉，收集漉液2700体积份；其余熟地黄等五味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至适量，放冷，加入乙醇适量，静置，取上清液与上述漉液合并，回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.301.32(9095°C)的清膏。取清膏1份，加蔗糖粉5份，制成颗粒，干燥，即得。本发明一种温补气血的中药组合物片剂的制备方法优选为以上十味，党参、熟地黄、黄芪、甘草、茯苓加火煎二次，第一次2小时，第二次？.5小时，合并煎液，滤过，滤过浓縮至稠膏状；当归、川芎、白术用60%乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇，并浓縮至稠膏状；肉桂提以挥发油至尽。取白芍粉成细粉，与上述稠膏混匀，制成颗粒，干燥。喷加肉桂油，混匀，压片，包糖衣，即得。本发明一种温补气血的中药组合物糖浆剂的制备方法优选为以上十味，熟地黄加水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，茯苓加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，甘草膏用热水化开与滤液浓縮至适量。当归渗滤提取两次，第一次用4倍量乙醇提取，收集初滤液，第二次用4倍量60%乙醇渗滤提取。肉桂用8倍量60%乙醇渗滤提取，收集初提液，将以上初提液合并备用。川芎用7倍量60%乙醇渗滤提取，收集初提液，继续提取；白术、白芍用7倍量60%乙醇渗滤提取，黄芪用7倍量25%乙醇渗滤提取，收集初滤液，党参用7倍量25%乙醇渗滤提取。将当归、肉桂、川芎、黄芪等续提液与白术、白芍、党参等提取液合并，回收乙醇，浓縮至适量。将水煎煮浓縮液、乙醇提取浓縮液与当归、肉桂初提混合液及川芎，黄芪初提液依次混合均匀，调整容量及含醇量，静置三天，吸取上清液，余液滤除沉淀与上清液合并，加入单糖浆(按应出液数的25%)、菠萝香精(按应出液数的0.3%)，搅匀，静置七天，测定含醇量，吸取上清液，灌装，即得。上述重量份与体积份对应于g/ml。上述中药组合物制剂的质量控制方法，该方法包括如下步骤鉴别A:取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土5-20g，研匀，加乙醇50-200ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-4ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各0.5-2g，分别加乙醇20-80ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各5-30ii1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5_15:2_5比例的石油醚(6090°C)-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；鉴别B:取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材lg，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各510ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9:l正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；含量测定C:色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17:83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000;对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每lml含40iig的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品研细，取1.Og，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45iim)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各510iU，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明药物组合物具备良好的温补气血的作用，对人体有较强的增强免疫力作用，并与抗肿瘤药物具有协同作用。本发明治疗控制方法专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。具体实施例方式实施例1丸剂组方党参80g白术(炒)80g茯苓80g炙甘草40g当归120g川芎40g6白芍(酒炒)80g熟地黄120g炙黄芪80g肉桂20g制法以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每lOOg粉末用炼蜜3550g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。质量控制方法白术、熟地黄薄层鉴别取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各1015iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。鉴别B:取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材lg，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各510ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9:l正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；含量测定C:色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17:83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000;对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每lml含40iig的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品研细，取1.Og，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45iim)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各510iU，注入液相色谱仪，测定，即得。以芍药苷(C23H28On)计，每lg不得少于O.55mg。实施例2:药效学实验下述本发明制剂为实施1所制备，但该实验不作为本发明的限制，本发明所提供的各种剂型均能实现本发明的效果。—、对小鼠耐高温实验的影响试验方法昆明种小鼠，置于室温(20±2)°C，相对湿度60%的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、剌五加阳性对照组、本发明中药组合物制剂组。空白对照组灌胃量为每日每次O.4ml蒸馏水；剌五加阳性对照组灌胃剌五加液，剂量0.2gkg-1d-1;中药组合物制剂组12.7gkg-1d-1。各组给药7d后，进行测试。各组末次给药后lh，将小鼠装在小铁笼中，置入(5560rC烤箱中，充分供氧，秒表记录每只小鼠自主呼吸时间至停止呼吸的死亡时间，作为小鼠耐高温的时间。二、对小鼠耐低温实验的影响试验方法昆明种小鼠，置于室温(20±2)°C，相对湿度60%的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、剌五加阳性对照组、中药组合物制剂组。空白对照组灌胃量为每日每次0.4ml蒸馏水；剌五加阳性对照组灌胃剌五加液，剂量0.2gkg—1d—1;中药组合物制剂组12.7gkg—1d—、各组给药7d后，进行测试。各末次给药后lh，将小鼠装入小铁笼中放入(-10士0.5)t:的冰箱内，充分供氧，秒表记录每只小鼠放置冰箱的时间至停止呼吸的死亡时间，作为小鼠耐低温的时间。三、对小鼠亚硝酸盐中毒缺氧实验的影响试验方法昆明种小鼠，置于室温(20±2)°C，相对湿度60%的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、剌五加阳性对照组、中药组合物制剂组。空白对照组灌胃量为每日每次0.4ml蒸馏水；剌五加阳性对照组灌胃剌五加液，剂量0.2gkg—1d—1;中药组合物制剂组12.7gkg—1d—、各组给药7d后，进行测试。各组末次给药后lh，将小鼠腹腔注射5%亚硝酸钠，0.3ml/只，秒表记录每只小鼠自注射开始时间至停止呼吸的时间，作为小鼠中毒缺氧的时间。四、对小鼠耐低张缺氧实验的影响试验方法昆明种小鼠，置于室温(20±2)°C，相对湿度60%的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、剌五加阳性对照组、中药组合物制剂组。空白对照组灌胃量为每日每次0.4ml蒸馏水；剌五加阳性对照组灌胃剌五加液，剂量0.2gkg—1d—1;中药组合物制剂组12.7gkg—1d—、各组给药7d后，进行测试。各组末次给药后lh，将小鼠放入盛有15g钠石灰的150ml磨口广口瓶中(每瓶一只)，用凡士林密封瓶口后，开始记录每只小鼠从瓶口密封时间到小鼠死亡时间，作为小鼠耐缺氧的时间。以上试验结果见表l。表1中药组合物制剂对耐高温、耐低温、耐亚硝酸钠缺氧、耐低张缺氧时间的影响(^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。以上结果表明中药组合物制剂对小鼠耐高温的时间越长，表明其生存能力及耐力较强。对小鼠耐低温的时间越长，说明其抵抗力，免疫力越强，证明制剂对人体有较强的增强免疫力作用。中药组合物制剂对小鼠耐亚硝酸钠缺氧、耐低张缺氧能力的实验显示，该制剂能显著提高小鼠的缺氧耐力(P<0.05)。五、与抗癌药物的协同作用试验方法中药组合物制剂水溶解制成浓度分别为每毫升含生药4.8g的药液，高温消毒后置于4t:冰箱内保存备用。取生长良好的S^腹水，用生理盐水1:5稀释后，调整细胞浓度为1X1.72X1.7个/mL，每只小鼠腋皮下接种0.2mL，随机分组，每组10只，设溶剂对照组，单独用药组和联合用药组。各组剂量设置如下中药组合物制剂组0.lml/10g，ig，7d;紫杉醇组5mg/kg，ip，7d;注射用丝裂霉素(匪C)组lmg/kg，ip，7d;阿霉素(ADR)组1.5mg/kg，ip，7d;中药组合物制剂+紫杉醇组0.lml/10g，ig+5mg/kg，ip，7d;中药组合物制剂+MMC组:0.lml/10g，ig+lmg/kg，ip，7d;全大补丸+ADR组0.lml/10g，ig+l.5mg/kg，ip，7d。接种次日起给药，第10天脱颈椎处死，解剖取瘤块，比较各组瘤质量大小，计算各组抑瘤率。合并用药的效应根据Webb氏分数乘积法计算(fa)u=1-[1-(fa)J[l_(fa)2]，(fa、和(fah分别为两药抑瘤率，(fa)u为计算的理论相加效应。如果合并用药的效应大于计算的相加效应，则表示协同。中药组合物制剂在0.48g生药/10g剂量时，没有明显的抑制肿瘤作用，但与低剂量的紫杉醇、匪C和ADR联合用药时，表现明显的抑瘤作用，抑瘤率大于Webb氏分数乘积法计算的(fa)u，判定为有协同效应。结果见表2。实施例3:实施例1丸剂的鉴别方法筛选试验本中药组合物制剂降低质量控制方法试验操作繁琐程度的同时，更全面的保证了药材的质量。本发明中，在含量测定项下利用HPLC测定制剂中白芍药材的特征成分芍药苷的含量，间接的鉴别了芍药苷的存在，也就验证了白芍药材的存在；本发明组方中芍药、黄芪的薄层鉴别供试品制备繁琐，须经过溶液萃取、大孔树脂柱等过程的纯化才可以鉴别出制剂中的芍药和黄芪药材，操作极其繁琐。本发明中熟地黄、白术药材的薄层鉴别，可以更全面的控制制剂的质量，而且试验操作过程非常简单，不仅样品处理方便，而且利用一个鉴别条件同时对两种药材进行鉴别。中药熟地黄为生地黄的经高温炮制后的加工品。药材中的多糖经高温裂解，生成5_羟甲基糠醛，为熟地黄中的代表性成分。白术药材中含有挥发油，为白术的有效成分。白术挥发油中主要含有苍术酮(atractylone)、白术内酯A、B(butenolideA，B)，另含3_P-乙酰氧基苍术酮、3-P-羟基苍术酮等。本处方药味较多，成分复杂，本发明中利用薄层色谱检测白术中的挥发油类成分，以此鉴定制剂中是否含有白术药材。熟地黄中的5-羟甲基糠醛和白术药材中的挥发油成分极性相近差不大，本发明通过使用相同薄层色谱条件，同时鉴别熟地黄和白术药材，不仅鉴别结果可靠，而且大大简化了试验的操作的过程，降低了制剂检验的工作量。1、供试品的制备91.l供试品的前处理中药组合物制剂为十味药材粉碎后加入炼蜜制成蜜丸。制剂中含有大量蜂蜜，黏性较大，很难分散，提取时溶剂不易进入制剂内部，会造成提取不完全。硅藻土为固体粉末，没有黏性，流动性好，可以吸收蜂蜜，使蜜丸容易分散，而且硅藻土对化合物没有吸附作用，使用溶剂提取时不会化学成分的损失。因此本发明利用硅藻土将蜜丸分散后，再使用合适溶剂提取相应的化学成分。通过试验验证使用硅藻土分散蜜丸的必要性。方法一<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>药组合物制剂18g，用剪刀剪成小块，加乙醇100ml，超声处理40分，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液1。方法二使用硅藻土分散取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液2。取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。吸取上述四种溶液各1015iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。供试品溶液2色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显明显的相同颜色的斑点，而供试品1色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上斑点颜色不明显，说明未加硅藻土分散的样品提取不完全。因此选择将蜜丸用硅藻土分散后再提取。1.2提取溶剂的选择白术、熟地黄中的化学成分的极型较低，根据"相似相溶"的原理，应当选择低极性的有机溶剂如石油醚(6090°C)、乙酸乙酯，但这类溶剂渗透性较差，本制剂为蜜丸，虽经硅藻土分散，但这类制剂恐也难以进入，所以选择极型较大、渗透性较好、而且可以提取这类成分的乙醇提取。本发明通过试验优选提取中药组合物制剂中白术、熟地黄中化学成分的最优提取方法。试验一石油醚(6090°C)提取取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加石油醚(6090°C)100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液l。试验二乙酸乙酯提取取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙酸乙酯100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液2。试验三乙醇提取取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液3。取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。吸取上述五种溶液各1015iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。供试品3色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显明显的相同颜色的斑点；在供试品1色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置没有观察到相同颜色的斑点；供试品2色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置的斑点颜色不明显。试验结果表明，石油醚(60-9(TC)、乙酸乙酯不能将制剂中的白术、熟地黄化学成分提取出来，而乙醇提取效率较高，因此选择乙醇为提取中药组合物制剂中白术、熟地黄化学成分的最优溶剂。1.3提取溶剂量的考察取中药组合物制剂18g三份，分别加硅藻土10g研匀，分别加乙醇50、100、150ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液1、2、3。取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。吸取上述五种溶液各1015iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。供试品1、2、3在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显相同颜色的斑点，供试品2、3斑点较供试品1更清晰、明显，但供试品2、3的斑点颜色基本相似，无差别，表明100ml乙醇可将制剂中的白术、熟地黄成分基本萃取完全。所以确定白术、熟地黄供试品溶液的最佳提取溶剂量为100ml乙醇。1.4提取时间的考察取中药组合物制剂18g三份，分别加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，分别超声处理15、40、60分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液1、2、3。取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。吸取上述五种溶液各1015iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。供试品1、2、3在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显相同颜色的斑点，供试品2、3色谱中较供试品1色谱中的斑点更清晰、明显，但供试品2、3的斑点颜色基本相似，无差别，表明超声提取40分钟可将制剂中的白术、熟地黄成分基本萃取完全。因此确定白术、熟地黄供试品溶液的最佳提取时间为40分钟。1.5对照药材提取溶剂量的考察为了保证对照药材的阳性对照效果，对照药材溶液制备时需要与供试品溶液处理过程相同。由于对照药材仅为一味药材，且药材提取量较小，所以对照药材提取溶剂量与供试品有所不同。取白术对照药材lg三份，分别加乙醇20、40、60ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为白术对照药材溶液1、2、3;取熟地黄对照药材lg三份，分别加乙醇20、40、60ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为熟地黄对照药材溶液1、2、3;吸取上述六种对照药材溶液各1015iil，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。白术对照药材溶液1、2、3在硅胶GF254薄层上均显暗斑。比较斑点情况，白术对照药材溶液1的斑点较暗淡，不易观察；白术对照药材溶液2、3的斑点清晰、明确，且无显著差异。表明40ml乙醇可以将白术药材中成分基本提取完全；熟地黄对照药材溶液1、2、3经2，4_二硝基苯肼乙醇试液显色后在薄层上均显斑点。比较斑点情况，熟地黄对照药材溶液1的斑点较暗淡，不易观察；熟地黄对照药材溶液2、3的斑点清晰、明确，且无显著差异。表明40ml乙醇可以将熟地黄药材中成分基本提取完。因此确定白术、熟地黄对照药材的最佳提取溶剂量为40ml乙醇水，超声提取40min。1.6供试品及白术、熟地黄对照药材点样量的确定取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。分别吸取供试品溶液、白术、熟地黄对照药材溶液5、15、25iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-9(TC)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。白术、熟地黄对照药材溶液点样量为5iU时，白术、熟地黄对照药材溶液斑点颜色较弱，不宜观察；点样量为15yl的白术、熟地黄对照药材溶液斑点颜色明显，斑点大小适中，无拖尾；点样量为25iU的白术、熟地黄对照药材溶液斑点偏大，明显拖尾。供试品溶液点样量为5iU时，供试品色谱中，在与白术、熟地黄对照药材相对应的位置上斑点强度较低，不宜观察；供试品溶液点样量为15iU时，供试品色谱中，在与白术、熟地黄对照药材溶液相对应的位置上斑点明显，斑点大小适中，无拖尾，前后无干扰；供试品溶液点样量为25iU时，供试品色谱中，在与白术、熟地黄对照药材溶液相对应的位置上斑点偏大，斑点与前后斑点相连，明显拖尾，而且点样时由于点样次数较多，破坏了硅胶薄层的表面。因此，确定供试品溶液、白术、熟地黄对照药材溶液的最优点样量为15iU。1.7薄层板及显色条件的选择白术、熟地黄中的化学成分均为弱极型的化学成分，适合使用硅胶薄层分离。常见的硅胶薄层有两种硅胶G、硅胶GF254。两种硅胶的对化合物的分离能力相同，其区别在于硅胶GF254加入254nm的荧光指示剂，对于紫外没有吸收的化合物，在紫外254nm照射下在硅胶薄层板GF254上可以形成暗斑。白术、熟地黄中的化学成分在日光下没有颜色，而且均没有紫外吸收，需要借助其他显色方法进行观察。本发明以硅胶G、硅胶GF254进行试验，选择适于鉴别白术、熟地黄的最佳薄层板和显色条件。取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。分别吸取供试品溶液、白术、熟地黄对照药材溶液15iU，点于同一硅胶GF254、硅胶G薄层板上，以石油醚(60-9(TC)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干。方法一将硅胶GF254、硅胶G薄层板在日光下观察，白术、熟地黄对照药材色谱中14未观察到斑点。方法二将硅胶G薄层板在紫外(365nm)下观察，白术、熟地黄对照药材色谱中未观察到斑点。方法三将硅胶GF254在紫外(254nm)下观察，白术、地黄对照药材溶液色谱中观察到明显斑点，且供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而在地黄对照药材色谱相应的位置上，供试品中有其他成分干扰，未完全分离。方法四将硅胶GF254、硅胶G薄层板喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。在地黄对照药材色谱中观察到明显斑点，且供试品色谱中，在与熟地黄对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而白术对照药材溶液中没有观察到明显斑点。因为地黄中含有5-羟甲基糠醛为醛类化合物，可以特定的与2，4-二硝基苯肼反应，生成有颜色的化合物，所以可以使用2，4_二硝基苯肼鉴别熟地黄中的成分。由试验结果可知硅胶GF254在紫外(254nm)下观察可以鉴别白术药材，再喷以2，4-二硝基苯肼可以鉴别熟地黄药材，而硅胶G薄层只能鉴别熟地黄中的化学成分。所以选择硅胶GF254薄层和与2，4-二硝基苯肼分离、鉴别中药组合物制剂中的白术、熟地黄成分。1.8薄层板及显色条件的选择白术、熟地黄成分极性较小，因此所以选择石油醚(6090°C)和极性稍大的醋酸乙酯为展开剂，通过实验选择合适的比例，使所需成分得到分离。取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。分别取缺确白术的白术阴性制剂18g按供试品制备方法制备缺白术阴性对照溶液。分别取缺确熟地黄的熟地黄阴性制剂18g按供试品制备方法制备缺熟地黄阴性对照溶液。取5块硅胶G薄层板，每块薄层均点样上述五种溶液各1015iU，分别以石油醚(6090。C)、石油醚(6090。C)-醋酸乙酯(10:1)、石油醚(6090°C)-醋酸乙酯(8:3)、石油醚(609(TC)-醋酸乙酯(1:1)、醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。结果如下薄层板1以石油醚为展开剂，由于展开剂极性太低，供试品、对照药材中白术、熟地黄成分均未展开；薄层板2以石油醚(609(TC)-醋酸乙酯(10:1)为展开剂，极性较低，展开不充分，供试品中白术、熟地黄成分未与其他斑点分离；薄层板3以石油醚(609(TC)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，极性适中，白术对照药材品中目标斑点Rf值为0.55，熟地黄对照药材品中目标斑点Rf值为0.45，且与其他成分分离良好，供试品中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上显相同颜色的斑点，且白术、熟地黄成分目标斑点与其他成分斑点分离良好，阴性无干扰；薄层板4、5分别以石油醚(6090°C)_醋酸乙酯(1:1)、醋酸乙酯为展开剂，由于展开剂极性太大，供试品、对照药材中白术、熟地黄成分Rf值较大，与其他成分斑点重叠，分离失败。所以确定白术、熟地黄硅胶薄层最佳的展开剂15为石油醚(6090°C)-醋酸乙酯(8:3)。综上试验最后确定中药组合物制剂中白术、熟地黄的薄层色谱鉴别条件为取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。吸取上述三种溶液各1015ii1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实施例4颗粒剂组方党参80g白术(炒)80g茯苓80g炙甘草40g当归120g川芎40g白芍(酒炒)80g熟地黄120g炙黄芪80g肉桂20g以上十味，当归、川芎、白术、白芍、肉桂粉碎成粗粉，用50%乙醇作溶剂，浸渍24小时后缓缓渗漉，收集漉液2700体积份；其余熟地黄等五味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至适量，放冷，加入乙醇适量，静置，取上清液与上述漉液合并，回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.301.32(9095tO的清膏。取清膏1份，加蔗糖粉5份，制成颗粒，干燥，即得。实施例5片剂组方党参80g白术(炒)80g茯苓80g炙甘草40g当归120g川芎40g白芍(酒炒)80g熟地黄120g炙黄芪80g肉桂20g以上十味，党参、熟地黄、黄芪、甘草、茯苓加火煎二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤过浓縮至稠膏状；当归、川芎、白术用60%乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇，并浓縮至稠膏状；肉桂提以挥发油至尽。取白芍粉成细粉，与上述稠膏混匀，制成颗粒，干燥。喷加肉桂油，混匀，压片，包糖衣，即得。实施例6口服液组方党参80g白术(炒)80g茯苓80g炙甘草40g当归120g川芎40g白芍(酒炒)80g熟地黄120g炙黄芪80g肉桂20g以上十味，熟地黄加水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，茯苓加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，甘草膏用热水化开与滤液浓縮至适量。当归渗滤提取两次，第一次用4倍量乙醇提取，收集初滤液，第二次用4倍量60%乙醇渗滤提取。肉桂用8倍量60%乙醇渗滤提取，收集初提液，将以上初提液合并备用。川芎用7倍量60%乙醇渗滤提取，收集初提液，继续提取；白术、白芍用7倍量60%乙醇渗滤提取，黄芪用7倍量25%乙醇渗滤提取，收集初滤液，党参用7倍量25%乙醇渗滤提取。将当归、肉桂、川芎、黄芪等续提液与白术、白芍、党参等提取液合并，回收乙醇，浓縮至适量。将水煎煮浓縮液、乙醇提取浓縮液与当归、肉桂初提混合液及川芎，黄芪初提液依次混合均匀，调整容量及含醇量，静置三天，吸取上清液，余液滤除沉淀与上清液合并，加入单糖浆(按应出液数的25%)、菠萝香精(按应出液数的0.3%)，搅匀，静置七天，测定含醇量，吸取上清液，灌装，即得。权利要求一种温补气血的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为党参40-120重量份、白术(炒)40-120重量份、茯苓40-120重量份、炙甘草20-60重量份、当归80-160重量份、川芎20-60重量份、白芍(酒炒)40-120重量份、熟地黄80-160重量份、炙黄芪40-120重量份、肉桂5-40重量份。2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为党参80重量份、白术(炒)80重量份、茯苳80重量份、炎甘草40重量份、当归120重量份、川芎40重量份、白芍(酒炒)80重量份、熟地黄120重量份、炙黄芪80重量份、肉桂20重量份。3.如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为原料药粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜3550g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。4.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于鉴别方法为取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土5-20g，研匀，加乙醇50-200ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-4ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各0.5-2g，分别加乙醇20-80ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各5-30iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5-15:2_5比例的石油醚(6090°C)-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下步骤鉴别A:取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土5-20g，研匀，加乙醇50-200ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇O.5-4ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各0.5-2g，分别加乙醇20-80ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各5-30iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5-15:2_5比例的石油醚(6090°C)-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；鉴别B:取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材lg，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各510ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9:l正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；含量测定C:色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17:83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000;对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每lml含40iig的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45iim)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各510iU，注入液相色谱仪，测定，即得。6.—种温补气血的中药组合物丸剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下步骤鉴别A:白术、熟地黄薄层鉴别取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各lg，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各1015iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90°C)-醋酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。鉴别B:取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材lg，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各510ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9:l正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；含量测定C:色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17:83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000;对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每lml含40iig的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品研细，取1.Og，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45iim)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各510iU，注入液相色谱仪，测定，即得。以芍药苷(C23H28On)计，每lg不得少于0.55mg;所述温补气血的中药组合物丸剂的制备方法为党参80g、白术(炒)80g、茯苓80g、炙甘草40g、当归120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地黄120g、炙黄芪80g、肉桂20g十味，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末用炼蜜3550g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。全文摘要本发明公开了一种温补气血的中药组合物及其制备方法、质量控制方法，该组合物由党参、白术(炒)、茯苓、炙甘草、当归、川芎、白芍(酒炒)、熟地黄、炙黄芪、肉桂等原料药制成，该组合物制剂具备良好的温补气血的作用，对人体有较强的增强免疫力作用，并与抗肿瘤药物具有协同作用。本发明治疗控制方法专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。文档编号G01N30/02GK101773568SQ20091007615公开日2010年7月14日申请日期2009年1月12日优先权日2009年1月12日发明者付建家,付立家申请人:北京亚东生物制药有限公司