专利名称：中药制剂清热凉血丸的质量控制方法
技术领域：
本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的中药制剂清热凉血丸 的质量控制方法。
背景技术：
清热凉血丸是《卫生部药品标准》中药成方制剂第九册第一百九十二页收载的制 剂，卫生部标准WS3-B-1843-94记载处方及质量标准处方黄芩500g地黄500g制法以上二味，粉碎成细粉，过筛，混勻，用水制丸，干燥，即得。鉴别取本品lg，研碎，加甲醇20ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液作为供试品 溶液。另取黄芩甙对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法(附录57页)试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 7 2 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点ο但是上述标准存在如下问题鉴别方法点样薄层板展开晾干后，置紫外光灯 (365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有红褐色斑点，无荧光斑点 鉴别手段存在问题；另外没有反映药物内在质量的指标成分的含量测定项，对于质量控制 标准而言，还是有所欠缺，为提高中药的产品质量，需要完善产品质量标准。
发明内容
本发明的目的是本发明的目的在于克服现有技术的清热凉血丸标准不足之处，提 供一种能够定性、定量检测药物成分的清热凉血丸的质量控制方法。为了达到本发明的目的采用的技术方案是一种中药制剂清热凉血丸的质量控制 方法，其中所述的药物配方由中药材黄芩500g 地黄500g组成，以上二味，粉碎成细粉， 过筛，混勻，用水制丸，干燥，即得，其特征在于其方法的步骤是(1)以黄芩苷、梓醇为对照品，薄层色谱法鉴别清热凉血丸处方中是否含有黄芩、 地黄成分；(2)以黄芩苷为对照品，高效液相色谱法检测清热凉血丸处方中黄芩苷的含量。所述的中药制剂清热凉血丸的质量控制方法，其特征在于所述的薄层色谱法 鉴别清热凉血丸处方中否含有黄芩的方法为取本品lg，研碎，加甲醇20ml，加热回流2 小时，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的 溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，醋酸乙酯；丁酮甲酸水= 10 7 2 2，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述的薄层色谱法鉴别清热凉血丸处方中是否含有地黄成分的方法为取本品 粉末2g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯20ml超声 处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml，作为供试品溶液；另取梓醇对照品，加甲醇 制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 5 μ 1，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水为展开剂，氯仿甲醇水= 14 6 1，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。所述的中药制剂清热凉血丸的质量控制方法，其特征在于以黄芩苷为对照品，液 相色谱法检测清热凉血丸处方中黄芩苷的含量的方法为(1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 水磷酸=47 53 0. 2为流动相；检测波长为280nm ；理论板数按黄芩苷峰计算应不低 于 2000 ；(2)对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含 0. Img的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取样品2g，研细，取粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密量取70%乙醇IOOml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，称定重量，用70%乙醇补 足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得；本品每克含黄芩苷不得少于2%ig。本发明的清热凉血丸质量标准中设置以黄芩苷、梓醇为对照品，薄层色谱法鉴别 清热凉血丸处方中是否含有黄芩、地黄成分；高效液相色谱法检测清热凉血丸处方中黄芩 苷的含量，本品每克含黄芩苷不得少于的定量指标及检验方法，使质量标准较为完 善，严格控制药品的质量，确保提高产品质量，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。本发明的优点和积极效果是1.本质量控制方法中薄层色谱法鉴别黄芩苷显色中采用喷以三氯化铁乙醇 溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，大大增加薄层斑点检出效果，便于观察鉴别，保障了鉴 别结果的准确性。2.本质量控制方法中增加了薄层色谱法鉴别地黄活性成分梓醇步骤，可更加准确 地检验出假药和劣药，提高了使用中的安全性。3.本质量控制方法中增加了高效液相法测定黄芩苷含量步骤，提高了清热凉血丸 质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效，而且对促进产品销售、增加产品的市 场竞争力、保证患者用药安全意义重大4.本发明质量控制方法简单、易操作，消除了原有黄芩苷鉴别的不确定性，是一种 能够更全面、准确的鉴别中药制剂清热凉血丸的鉴别方法修订后的质量标准，提高了药品 的质量控制。
图1是清热凉血丸原部颁标准中收录的薄层鉴别黄芩的紫外光灯下的检视图。图2为本发明清热凉血丸的鉴别黄芩的薄层色谱图。
图3为本发明清热凉血丸的鉴别地黄的薄层色谱图。图4为本发明清热凉血丸的供试样品溶液的液相色谱图。图5为本发明清热凉血丸的黄芩苷标准品溶液的液相色谱图。图6为本发明清热凉血丸的空白对照品溶液的液相色谱图。图7为本发明清热凉血丸的含量测定线性考察曲线图。
具体实施例方式本发明对中药制剂清热凉血丸质量控制方法增加了地黄的薄层鉴别和黄芩的含 量测定；同时，对原标准中黄芩鉴别方法，重新进行了修订，下面结合实施例，对本发明进一 步说明，实施例1改进后的清热凉血丸质量标准处方黄芩500g地黄500g制法以上二味，粉碎成细粉，过筛，混勻，用水制丸，干燥，即得。性状本品为黄褐至黑褐色的水丸；味甘、苦。鉴别(1)取本品lg，研碎，加甲醇20ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液作为供 试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层 色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 7 2 2)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品粉末2g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙 酸乙酯20ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml，作为供试品溶液。另取梓 醇对照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μ 1，分别点于同一高效硅胶G薄层板 上，以氯仿-甲醇-水(14 6 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，105°C加 热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检查应符合丸剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版一部附录IA)。含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷 酸07 53 0.2)为流动相；检测波长为观此！!!。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得。供试品溶液的制备取样品2g，研细，取粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密量取70%乙醇IOOml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，称定重量，用70%乙醇补足减 失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。本品每克含黄芩苷不得少于2%ig。功能与主治滋阴，清热，凉血。用于孕妇上焦火盛，头晕目眩，口舌生疮，耳鸣牙 痛，孕妇血热子烦。
用法与用量口服，一次6g，一日1 2次。注意痰湿气郁之子烦者忌服。规格每瓶装6g贮藏密闭，防潮。实施例2清热凉血丸质量标准起草说明清热凉血丸原质量标准中有黄芩鉴别，无含量测定项，此次提高标准增加了地黄 的薄层鉴别和黄芩的含量测定；同时，对原标准中黄芩鉴别方法，重新进行了修订。1.黄芩的鉴别1. 1材料与试剂甲醇、乙酸乙酯、丁酮、甲酸分析纯黄芩苷对照品中国药品生物制品检定所，批号110715-200514清热凉血丸样品天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂生产；批号D081001硅胶G板青岛海洋化工分厂1.2供试品溶液的制备取本品1. 0g，加甲醇20ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。1.3对照品溶液的制备取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。1. 4空白对照品溶液的制备按处方、工艺，除黄芩外制备空白对照品，再将空白对照品粉碎成细粉，按照供试 品溶液制备方法制备空白对照品溶液。1. 5实验方法方法1 参照清热凉血丸原部颁标准中收录的黄芩薄层鉴别方法。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各 ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 7 2 2)为 展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯OMnm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无荧光斑点，有红褐色斑点。 结果见图1。图1中1 供试品2 对照品3 空白对照品对清热凉血丸原部颁标准中收录的黄芩薄层鉴别方法进行修改，改变显色方法方法2 照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶 液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 7 2 2) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白对照品色谱无干 扰。结果见图2。图2中1 供试品2 对照品3 空白对照品1. 6确定黄芩薄层鉴别方法为取本品lg，研碎，加甲醇20ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。 另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中 国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 7 2 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.地黄的鉴别2. 1材料与试剂甲醇、乙酸乙酯、氯仿分析纯梓醇对照品中国药品生物制品检定所，批号110808-200407清热凉血丸样品天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂生产；批号D081001高效硅胶G板2. 2供试品溶液的制备取本品粉末2g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸 乙酯20ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml，作为供试品溶液。2. 3对照品溶液的制备取梓醇对照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。2. 4空白对照品溶液的制备按处方、工艺，除地黄外制备空白对照品，再将空白对照品粉碎成细粉，按照供试 品溶液制备方法制备空白对照品溶液。2. 5实验方法照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各 5 μ 1，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(14 6 1)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白对照品无干扰。结果见图3。图3中1:供试品 2:对照品3:空白对照品。2. 6确定地黄鉴别方法为取本品粉末2g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤 过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml，作为供 试品溶液。另取梓醇对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层 色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一 高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(14 6 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴 香醛试液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点。二 .黄芩苷的含量测定1.仪器与材料仪器Waters洸95高效液相色谱仪；检测器Waters2487 ;Sartorius CP224S.电 子天平.材料色谱柱Diamonsil C18，5 μ 250 X 4. 6mm ；黄芩苷对照品批号 110715-200514由中国药品生物制品检验所生产；甲醇色谱纯，天津市康科德科技有限公 司生产；冰乙酸、磷酸分析纯；清热凉血丸样品天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂生产；批号D0810012.实验方法
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2. 1对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含 0. Img的溶液，即得。见图42. 2流动相的选择参考《中国药典》2005年版一部黄芩药材含量测定方法中流动 相甲醇-水-磷酸(50 50 0. 2)。色谱条件柱温30°C，检测波长280nm，流速0. 8ml/min2. 3提取方法的选择结果采用方法2黄芩苷提取充分，确定采用方法2为供试品溶液提取溶剂。2. 4提取时间的选择将本品研细，取细粉0.2g精密称定，置具塞锥型瓶中，精密量取70%乙醇100ml， 称重，加热回流提取不同的时间，放冷补重，滤过，注入高效液相色谱仪中测定。结果如表2结果采用方法1黄芩苷提取充分，确定采用方法1为供试品溶液提取时间。表1提取方法的选择
权利要求
1.一种中药制剂清热凉血丸的质量控制方法，其中所述的药物配方由中药材黄芩 500g 地黄500g组成，以上二味，粉碎成细粉，过筛，混勻，用水制丸，干燥，即得，其特征在 于其方法的步骤是(1)以黄芩苷、梓醇为对照品，薄层色谱法鉴别清热凉血丸处方中是否含有黄芩、地黄 成分；(2)以黄芩苷为对照品，高效液相色谱法检测清热凉血丸处方中黄芩苷的含量。
2.根据权利要求1所述的中药制剂清热凉血丸的质量控制方法，其特征在于所述的 薄层色谱法鉴别清热凉血丸处方中否含有黄芩的方法为取本品lg，研碎，加甲醇20ml，加 热回流2小时，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，醋酸乙酯丁酮甲酸水= 10 7 2 2，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；所述的薄层色谱法鉴别清热凉血丸处方中是否含有地黄成分的方法为取本品粉末 2g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯20ml超声处理30 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml，作为供试品溶液；另取梓醇对照品，加甲醇制成每 Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别 点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水为展开剂，氯仿甲醇水=14 6 1， 展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述的中药制剂清热凉血丸的质量控制方法，其特征在于以黄芩 苷为对照品，液相色谱法检测清热凉血丸处方中黄芩苷的含量的方法为(1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇水 磷酸=47 53 0.2为流动相；检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于 2000 ；(2)对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.Img 的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取样品2g，研细，取粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密量取70%乙醇IOOml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，称定重量，用70%乙醇补足减失 的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定，即 得；本品每克含黄芩苷不得少于2%ig。
全文摘要
本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的中药制剂清热凉血丸的质量控制方法，其由中药材黄芩、地黄组成，其方法是以黄芩苷、梓醇为对照品，薄层色谱法鉴别清热凉血丸处方中是否含有黄芩、地黄成分；高效液相色谱法检测清热凉血丸处方中黄芩苷的含量定量指标及检验方法，使质量标准较为完善，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。
文档编号G01N30/90GK102068549SQ200910228359
公开日2011年5月25日 申请日期2009年11月19日 优先权日2009年11月19日
发明者刘志宏, 律兆荣, 杨瑾, 王磊, 陈坚 申请人:天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂