专利名称：大麻使用的检测的制作方法
大麻使用的检测发明领域本发明提供了增强用于检测大麻使用的免疫测定的方法。特别地，本发明涉及结 合伴侣，尤其是能够结合四氢大麻酚(THC)和抗-THC-抗体之间的免疫复合物的抗体片段。 本发明还涉及包含该结合伴侣的测试试剂盒，以及所述结合伴侣用于检测大麻使用的用 途。此外，本发明涉及免疫测定，其中使用了所述结合伴侣。再进一步，本发明涉及编码所 述结合伴侣的多核苷酸，和能够表达该多核苷酸的宿主细胞。本发明的
背景技术：
药物滥用是个严重的威胁，尤其是对交通安全，并且因此已经研发了各种试验用 于方便地测试滥用的药物。这些测试中的许多是免疫测定，并且大部分是竞争性免疫测 定，其特异性通常低于非竞争性的免疫测定。Kerrigan和fillips已经例如比较了 12 个可购得的ELISA(酶联免疫吸附测定)，这些ELISA用于全血和尿液中的鸦片、脱氧麻黄 碱、古柯碱代谢产物、苯环己哌啶和大麻素(Kerrigan S.，&Phillips，W.，2001 Clinical Chemistry 47(3) :540-547)。测试形式是竞争性免疫测定，并且结果并不完全令人满意，产 生了一些假的结果和不利的交叉反应性。不仅可以从血液或尿液，而且可以从唾液测定药物滥用，这是选择用于路边测试 的测试基质。Lo Muzio等测试了用于检测尿液中药物的商业快速免疫筛选，并比较了两种 生物基质非常规的生物基质，唾液，和传统的生物基质，尿液。他们发现唾液样本在用于大 麻、THC、苯化重氮和三环抗抑郁药的免疫学试验中是阴性的，尽管气相色谱-质谱(GC-MS) 分析揭示了其的低浓度，并且推断在与唾液一起使用之前，必须改进测试试剂盒(Lo Muzio L.等，2005, Int J ImmunopatholPharmacol. 18(3) :567-573)。WO 2004/046733公开了用于测定小分析物，如滥用的药物的非竞争性免疫测定。 该测定使用了分析物特异性的一级抗体，一级抗体和分析物之间的免疫复合物(IC)特异 性的二级抗体和分析物，以提高测定的灵敏性和特异性。所用的抗-IC抗体通过下列方法 获自天然人抗体片段噬菌体展示文库用结合的一级抗体预培养展示噬菌体来挑选结合一 级抗体本身的那些，然后分离未结合的噬菌体并用分析物和固定的一级抗体的混合物培养 以选择结合固定的一级抗体和分析物之间形成的免疫复合物但不结合抗体本身的噬菌体。 对于确定唾液中的吗啡，获得了非常好的结果。Δ 9-四氢大麻酚(Δ 9-THC)是大麻的母体药物，并且其快速代谢成可以在尿液中 确定的ll-nor-A9-THC-C00H或11-0H-A9-THC。因此，优选通过测定唾液中的A9_THC来 检测大麻的使用，这是比当在尿液中检测该代谢产物时更好的最近使用的指示。然而，已经 发现对于这种分析物难以研发出快速测试，并且市场上的测试试剂盒还不够灵敏。US 6，326，159 和 Ullman 等，1993，Proc. Natl. Acad. Sci. 90 :1184-1189 描述了使 用用于增强一级抗体的亲和性和特异性的抗-IC-抗体的免疫测定。在这些论文中，已经研 发了第二种抗-IC抗体，其结合与分析物相结合的第一种抗分析物抗体，但是其不结合单 独的一级抗体或分析物。公开了识别抗体与四氢大麻酚(THC)的免疫复合物的抗体。通过 以下方法获得抗-IC抗体使用亲和性标记的抗-THC抗体作为免疫原并选择其结合通过Δ 9THC的存在而增强的抗-IC抗体。观察到与例如THC-代谢产物的一些交叉反应性，这在 法医药物分析中是不利的。通过常规杂交瘤技术制备了抗体，这使得它们太大，以致不能应 用于同源性免疫测定中。Kintz P.等测试了用于测试唾液中药物的商业药物装置，并将结果与GC-MC分 析结果相比较，并且发现该测试装置鉴定出只有一位暴露于THC的驾驶员，而18位驾驶 员使用GC-MC被测试为阳性的。他们推断目前使用这种样本用于路边测试的局限在于 缺少检测足够低浓度的母体化合物(THC)的合适免疫测定(Kintz P.等，2005. J. Anal. Toxicol. 29(7) :724-727)。目前用于确定大麻使用的免疫测定不令人满意，大概是由于低特异性和灵敏度。 因此，仍然需要容易、快速和可靠的用于大麻使用的药物测试，其可以用于，例如，路边测 试，并优选用于分析口腔流体样本，这是非入侵性的、易于进行，并可以在严密监督下进行。 本发明满足了这些需求中的至少一部分。发明概述本发明提供了一种新的试剂，其有助于快速而可靠地检测大麻使用。该试剂是能 够特异性识别大麻素和抗-大麻素之间形成的免疫复合物的蛋白质。更具体地，本发明提 供了包含抗体轻链和重链的互补决定区(CDR)的结合伴侣，其中所述轻链区具有SEQ ID NO 3的氨基酸23-35、51-57和93-100的氨基酸序列，并且所述重链区具有SEQ IDNO 4的 氨基酸四-35、50-60和99-109的氨基酸序列。本发明进一步提供了包含结合伴侣的测试试剂盒，以及结合伴侣用于检测获自待 测试已经使用大麻的人的身体样本中的大麻素的用途。由于高特异性和灵敏度，并且优选 小尺寸，结合伴侣尤其适于非竞争性同源性免疫测定，这可以例如在路边用于测试怀疑使 用大麻的驾驶员的唾液。再进一步，本发明提供了用于检测获自身体的样本中的分析物的免疫测定，由此 将样本与试剂对反应，该试剂对包含特异性结合分析物的第一结合伴侣和特异性结合分 析物和第一结合伴侣的复合物的第二结合伴侣，并且测定第二结合伴侣与所述复合物的结 合，由此表明样本中分析物的存在，其中所述分析物是大麻素，并且所述第二结合伴侣包含 抗体轻链和重链的互补决定区(⑶R)，其中所述轻链区具有SEQ ID NO :3的氨基酸23-35、 51-57和93-100的氨基酸序列，并且所述重链区具有SEQ ID NO 4的氨基酸四-35、50_60 和99-109的氨基酸序列。此外，本发明提供了编码结合伴侣的多核苷酸，和能够表达结合伴侣的宿主细胞。 该多核苷酸是DNA或RNA。在从属权利要求中列出了本发明的有利实施方案。本发明的其他目的、详细内容和优点将从以下的附图、详述和实施例中变得清楚。附图简述
图1显示了抗-THC T3Fab轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO :1)，和抗-THC T3 Fab VH-CHl重链的氨基酸序列(SEQ ID NO :2)。显示了所述免疫球蛋白链各自的三个互补决定 区 CDR1、CDR2 和 CDR3。图2显示了抗-T3+THC免疫复合物Fab 104轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO 3)， 和抗-T3+THC免疫复合物Fab 104重链的氨基酸序列(SEQ ID NO :2)。显示了所述免疫球蛋白链各自的三个互补决定区⑶R1、⑶R2和⑶R3。图3显示了抗-THC T3 Fab结合抗-T3+THC免疫复合物Fab 104用于各种药物和 药物代谢产物获得的THC TR-FRET测试结果。详述大麻素是在大麻植物Cannabis sativa中发现的萜烯酚分子的总称。更常见地， 其包括一组在结构上与四氢大麻酚(THC)相关并结合大麻素受体的分子。THC是大麻的主 要心理活性大麻素，并且与Δ 9-四氢大麻酚(Δ9-ΤΗΟ和D9-四氢大麻酚(D9-THC)同义， 在此这些全部可以互换使用。THC在体内代谢成ll-nor-D9-THC-C00H和11-0H-D9-THC，这 是其他大麻素的实例。本发明的结合伴侣特异性地识别THC和抗-THC之间的免疫复合物， 由此与代谢产物的反应明显较低。本发明的结合伴侣可以用于检测样本的THC的夹层试验中，由此将样本与试剂对 反应，该试剂对包含特异性结合THC的第一结合伴侣，和第二结合伴侣，其能够特异性识别 THC和抗-THC之间的免疫复合物，并且其是本发明的结合伴侣。第二结合伴侣与第一结合 伴侣和THC之间的免疫复合物的结合指示样本中存在THC。如在此所用的“结合伴侣”通常是蛋白质或多肽，如包括具有所需结合特性的抗体 片段的抗体。抗体是免疫球蛋白分子并且属于IgG、IgM、IgE、IgA或IgD中的任何一类；IgG 和IgM是最常用的。优选，结合伴侣是包含配体-结合位点的抗体片段，如Fab或scFv片 段。称为Fab片段的片段(抗原结合片段)由通过二硫化物桥键连接免疫球蛋白重链的可 变和第一个恒定结构域的免疫球蛋白轻链的可变和恒定结构域组成。Fv (可变结构域)意 思是负责配体结合的免疫球蛋白分子的可变区。ScFv (单链Fv)意思是其中抗体的重链和 轻链的可变结构域通过肽连接的分子，以从单链mRNA分子合成形成单个多肽链。免疫球蛋 白重链和轻链的可变区一起负责配体结合。配体是结合伴侣结合的物质，对于抗体，其是抗 原或半抗原。使用重组噬菌体展示文库可以方便地制备结合伴侣，例如，如WO 2004/046733中 所述的。当已经选择第一结合伴侣时，其与其配体复合，并将该复合物用于从推荐文库中选 择第二结合伴侣。将没有使用配体的第一结合伴侣用作反选择。第二结合伴侣应当只识别 复合物，而不是识别第一结合伴侣，也不是识别游离抗原，不管是任何显著的程度。可以通过将免疫球蛋白结构域编码cDNA克隆至合适的噬菌体展示载体中来构建 噬菌体展示抗体文库。将编码百万个抗体片段变体的DNA成批克隆至作为噬菌体外壳蛋白 一部分的载体中。通过在细菌中转化载体可以获得含有百万个具有不同特异性的抗体片段 的大文库。细菌的培养导致噬菌体展示抗体片段在其表面上的表达。在噬菌体基因组中 携带所展示抗体的基因，由此将基因型和表现型联系起来。所展示蛋白及其DNA之间的物 理联系使得可以通过称为淘选(panning)的简单体外选择程序来筛选大量蛋白质变体，各 自与其对应的DNA相关。以其最简单的形式，可以通过用已经固定于载体上的目标配体培 养噬菌体展示变体的集合来进行淘选，并通过破坏与配体的结合来洗脱特异性结合的噬菌 体。然后洗脱的噬菌体在体内扩增。将该过程重复几次，使得有利于最紧密集合序列的噬 菌体集合逐步富集。在约3至6轮选择和扩增后，将最好的克隆测序并转化至宿主细胞中， 用于进一步表达。宿主细胞可以是真核或原核细胞，例如，酵母、动物、植物或昆虫细胞或细 菌细胞。甚至可以是杂交瘤细胞，其在转化后产生重组单克隆抗体。重组结合伴侣或至少其一部分也可以合成产生。包含识别大麻素的第一结合伴侣和识别大麻素和所述第一结合伴侣之间的免疫 复合物的第二结合伴侣的试剂对使得用于大麻素的非竞争性夹层测定是可行的。可以通过 全部标准免疫测定来检测夹层。一种伴侣可以固定于载体上，如微滴定孔或珠子。在分析 物和另一种结合伴侣的存在下形成夹层。例如，通过使用二级抗体或通过标记至少一种结 合伴侣来检测夹层。标记可以是任何常规标记，如放射活性标记、酶或荧光化合物。该测定 可以是例如ELISA或FIA。包含本发明结合伴侣的试剂对很大的优点在于其能够进行同源性免疫测定，即， 在溶液中进行免疫测定。省去了固定和洗涤步骤使得试验非常简单。同源性试验给路边测 试提供了卓越且方便的工具，例如，由警察在抽查驾驶员等时使用。本发明提供的免疫测定 比目前市场上的竞争性测定灵敏高达10倍。待分析的样本可以是任何流体样本，如血液、 血清或尿液，但优选是口腔流体，如唾液。分析物优选是THC。优选的同源性免疫测定是基于荧光共振能量转移(FRET)的一种试验，对于综述， 参见Sz61Hisi J 等，1998，Communications inClinical Cytometry，34 159-179。在 FRET 中，通过分子间的偶极子-偶极子偶联，能量从荧光团分子(供体)激发至高能量状态并且 转移至另一个荧光团(受体)。这只有供体和受体之间的距离短(lo-iooAj以及供体的 荧光光谱和受体的吸收光谱部分重叠时才有可能。然后作为荧光变化来检测能量转移。通 常利用时间分辩荧光(Hemmila I.等，1988，Clin. Chem. 34 :2320-2322)。通过用形成FRET供体-受体对的荧光团来标记两种结合伴侣(其优选是抗体片 段)，可以将FRET应用于本发明。当结合伴侣和分析物是小的时候，荧光团变得非常近，并 且获得了可测量的FRET信号。或者，用于大麻使用的免疫测定可以是例如常规的在微滴定孔中的夹层测试或侧 流测试。本发明的结合伴侣可以包括在测试试剂盒中，其可以进一步含有试验需要的任何 其他试剂和使用说明书。优选，测试试剂盒还含有用于结合分析物的第一结合伴侣。更优 选，所述结合伴侣包含抗体轻链和重链的互补决定区(CDR)，其中所述轻链区具有SEQ ID NO 1的氨基酸M-35、51-57和90-98的氨基酸序列，所述重链区具有SEQID NO 2的氨基 酸27-36、51-66和99-107的氨基酸序列。优选，测试试剂盒包含用于进行非竞争性的同源 性试验的试剂，如例如，TR-FRET测试需要的试剂。试剂盒进一步包含反应溶液、缓冲剂、洗 涤溶液和检测工具，如标记物和任选的荧光团。测试的性能可以使得试剂在微滴定平板的孔中，并加入连续稀释的样本。在优选 的模式下，例如，用于警察领域使用，试剂是在容器中的干燥形式。加入唾液，其溶解了试剂 并且可以阅读结果，而不需要进一步处理。优选，测试试剂盒包含用于测定多重药物滥用的试剂，如用于测定，例如，吗啡、可 待因、海洛因、安非他明、甲基苯丙胺、古柯碱、巴比妥酸盐和苯并二氮。在这种情况下，测试 试剂盒可以包含物理上彼此分开的多重试剂对，例如，以微矩阵的形式，由此可以从单个唾 液样本中同时测试多重药物。本发明的结合伴侣包含具有SEQ ID NO 3的抗体轻链的三个⑶R和具有SEQ ID NO 4的抗体重链的三个CDR。根据本发明的一个实施方案，该结合伴侣包含完整的可变区，即，所述轻链(VL)和重链(VH)的配体-结合部分。因此，其可以含有SEQ ID NO 3的氨基 酸1-111和SEQ ID NO :4的氨基酸1-120。特别地，所述结合伴侣包含SEQ ID N0:3和NO: 4的氨基酸序列。相应地，第一结合伴侣包含SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2的完整可变区， 即，SEQ ID NO :1的氨基酸1-108 JPSEQ ID NO :2的氨基酸1-118。特别地，其包含SEQ ID NO :1和NO 2的氨基酸。在说明书和权利要求中列出的任一个序列或子序列的小变化或改 进仍然在本发明的范围内，只要它们没有影响蛋白质的结合活性。这样的变化和改进特别 包括保守性氨基酸取代。通过以下非限制性实施例说明了发明。实施例1抗-THCFab 的研发用弗氏佐剂中的THC缀合BSA(Fitzgerald)将小鼠免疫，并在第二次强化后测试 血清样本，并且将在直接ELISA中显示出最佳对抗抗原应答的小鼠选定为抗体噬菌体展示 文库的来源。如W02004/046733中所述的，构建抗体片段噬菌体展示文库，将THC-特异性 噬菌体富集，并将单个克隆的Fab基因片段分离、表达和表征。选择抗-THC T3 Fab，用于进一步测定。将抗-THC T3 Fab轻链的氨基酸序列列为SEQ ID N0:1，抗-THCT3 Fab VH-CH1链 的氨基酸序列列为SEQ ID NO :2。Fab轻链的⑶R1、⑶R2和⑶R3对应于SEQ ID NO 1的 氨基酸24-35、51-57和90-98。Fab重链的CDR1、CDR2和CDR3对应于SEQ ID NO 2的氨基 酸27-36、51-66和99-107。SEQ ID N0:1的第1-108号氨基酸表示轻链可变区，而SEQ ID NO 2的第1-118号氨基酸表示重链可变区。SEQ ID NO=I的第109-215号氨基酸表示小鼠 κ轻链的恒定区，和SEQ ID NO 2的第119-221号氨基酸表示小鼠重量的恒定CH1区。图 1中还显示了抗-THC T3 Fab的氨基酸序列。实施例2抗-THC Fab和THC的免疫复合物的抗-免疫复合物抗体的研发从天然人scFv噬菌体展示文库选择免疫复合物特异性抗体用ImmunoRire Sulfo-NHS-LC-生物素试剂盒(Pierce)将 T3Fab 片段生物素化。 将生物素化抗体纯化，并用Econo-Pac IODG柱(Bio-Rad，CA, USA)将缓冲剂换成PBS。用 10 μ 1抗生蛋白链菌素覆盖的磁性珠(Dynal，Μ-280)和0. 5 μ g生物素化T3 Fab将BSA/ PBS中的200 μ 1天然scFv噬菌体展示文库(κ或λ轻链)在+4 °C下预培养过夜。从集合 的50名健康个体的淋巴细胞构建天然人scFv噬菌体展示文库。估计文库的大小为IxlO8 克隆。天然人scFv噬菌体展示文库含有IgM特异性Vh-基因，结合κ或λ特异性基 因。从珠子分离出未结合的噬菌体，并用IOOng THC、500ng生物素化的T3 Fab和5 μ 1抗 生蛋白链菌素覆盖的磁珠将100 μ 1噬菌体在振荡器中在RT下培养1小时。以相似的方 式实施选择程序的背景，但从结合反应中省略了 THC。用0.5ml PBS将磁珠洗涤五次，并用 100 μ 1 HCl (ρΗ2. 2)将未结合的噬菌体洗脱30分钟。用IM Tris中和洗脱的噬菌体并感染 Ε. coliXLl-蓝细胞。按照WO 2004/046733所述的使细胞生长并将噬菌体纯化。三次淘选 轮后，将洗脱噬菌体的量与背景对照孔的洗脱噬菌体的量相比，看到了富集。当测试来自选 择轮的洗脱噬菌体集合并分析单个scFV噬菌体克隆时，在噬菌体ELISA中也清楚地看到了 通过T3Fab和THC形成的免疫复合物的特异性结合剂的富集。
单个克隆的表征挑选单个特异性结合T3+THC复合物的scFv噬菌体克隆、测序、表达和测试。选 择克隆104用于进一步检查。因为scFv倾向于在表达和纯化过程中聚集，通过克隆人 λ轻链的基因区以及基因各自的IgGl CHl恒定区，将免疫复合物特异性克隆 104转化成Fab片段。将含有六个组氨酸残基的C-末端标记物插入CHl的C-末端，用 于固定化金属亲和性色谱(IMAC)纯化。将104Fab片段克隆至表达载体pKKtac中，并证 实序列。将抗-T3+THC免疫复合物Fab 104轻链的氨基酸序列列为SEQ ID NO 3, Fab VH-CHl-6His-Tag区的氨基酸序列列为SEQ ID NO :4。SEQ ID NO 3的第1-111号氨基酸 表示轻链的可变区，而SEQ ID NO :4的第1-120号氨基酸表示重链的可变区。SEQ ID NO: 3的第112-216号氨基酸表示人λ轻链的恒定区，而SEQID NO 4的第121-223号氨基酸 表示人重链CH1区的恒定区。重链恒定区C-末端的六个组氨酸残基有助于通过固定化金 属亲和性色谱(IMAC)的Fab片段纯化。104Fab的表达和纯化将104 Fab片段的表达载体转化至大肠杆菌(E. coli)生产菌株RV308中。将细胞 接种于25ml含有100 μ g/ml氨苄青霉素和2%葡萄糖的TB培养基中(酵母提取物12g/l， 大豆蛋白胨 24g/l,KH2P042. 31g/l，K2HP04 12. 54g/l，甘油 5g/l，ρΗ7· 1)，并在振荡器上在 +37°C下培养过夜。从过夜培养物中，将6ml接种物加入两个含有300ml TB的锥形瓶中，TB 中含有100 μ g/ml氨苄青霉素。将细胞在振荡器上在+37°C下培养直至OD6tltl为4，此后将 0. 3ml IM IPTG和100 μ g/ml氨苄青霉素加入培养物中，然后将培养在振荡器上+30°C下持 续过夜。将培养物培养基的上清液用于104 Fab片段的纯化。将细胞在4000g和4°C下离 心20分钟，并将上清液倒入干净的烧瓶中。用ang/ml DNA酶I处理上清液以除去残余的 染色体DNA，在+37°C下持续一小时。因为表达的Fab 104在其C-末端具有6XHis_标记， 可以通过固定化金属亲和性色谱(IMAC)纯化。通过Ni2+螯合琼脂糖(AmershamPharmacia Biotech)纯化 Fab 104。用 SDS-PAGE 检查 Fab 104 的纯度。实施例3用于THC的同源性时间分辩荧光共振能量转移(TR-FRET)免疫测定通过LANCE Eu-ffl024 ITC螯合物试剂盒(Wallac)，用铕标记抗-THC Fab片段T3。 将标记的T3的缓冲液换成50mM Tris, ρΗ7· 8,0. 9% NaCl。通过Alexa Fluor蛋白质标记 试剂盒(MolecularProbes, Inc.)，用 Alexa Fluor 647 标记抗-T3+THC 免疫复合物 Fab 片 段 104。将1 μ g Eu标记的抗-THC T3Fab和1. 5 μ g Alexa Fluor 647标记的抗免疫复 合物Fab 104加入到微滴定孔的60 μ 1唾液中。将用0,3. 75,7. 5、15、30、60和120ng/ ml的药物刺激的40 μ 1唾液样本加入到孔中，这些药物为D9-THC、11-0H-D9-THC、 ll-nor-D9-THC-C00H、海洛因和安非他命。简短混合后，通过Victor V荧光计(Perkin Elmerffallac)测量时间分辩荧光共振能量转移(TR-FRET)。结果显示于图3中。用THC刺激的唾液样本产生了高荧光值，而THC代谢产物产生了明显较低的荧光 值，海洛因和吗啡产生了接近从对照(标记的T3和104片段，没有任何添加的药物)检测 到的背景荧光的荧光值。Fabl04结合T3和THC之间形成的免疫复合物，具有非常高的特异 性和灵敏度。该测试能够检测远低于目前市场上快速测试的截留水平(唾液中20ng/ml)的 THC。 尽管已经描述了用于提供本发明的试剂和测定的一种策略，但本领域技术人员将 清楚多种改变和改进。
权利要求
1.包含抗体轻链和重链的互补决定区(CDR)的结合伴侣，其中所述轻链区具有SEQID NO 3的氨基酸23-35、51-57和93-100的氨基酸序列，并且所述重链区具有SEQ ID NO 4 的氨基酸四-35、50-60和99-109的氨基酸序列。
2.根据权利要求1的结合伴侣，其是抗体片段，优选包含SEQIDNO :3的氨基酸1-111 和SEQ ID NO :4的氨基酸1-120，最优选该片段是包含SEQ ID NO :3和SEQ ID NO :4的Fab 104。
3.根据权利要求1的结合伴侣，其特异性识别四氢大麻酚(THC)和抗-THC之间的免疫 复合物。
4.包含权利要求1至3任一项的结合伴侣的测试试剂盒。
5.根据权利要求4的测试试剂盒，进一步包含另一种结合伴侣，其包含抗体轻链和重 链的互补决定区(CDR)，其中所述轻链区具有SEQ ID NO :1的氨基酸对-35、51-57和90-98 的氨基酸序列，而所述重链区具有SEQ ID NO :2的氨基酸27-36、51-66和99-107的氨基酸 序列。
6.根据权利要求4或5的测试试剂盒，包含用于非竞争性同源性免疫测定的试剂，优选 用于时间分辩荧光共振能量转移(TR-FRET)。
7.根据权利要求4至6任一项的测试试剂盒，包含用于测定多重滥用药物的试剂。
8.权利要求1至3任一项的结合伴侣用于检测取自待测试已经使用大麻的人的身体样 本中的大麻素的用途。
9.根据权利要求8的用途，其中大麻素是THC。
10.用于检测取自身体的样本中的分析物的免疫测定，由此将样本与试剂对反应，该试 剂对包含特异性结合分析物的第一结合伴侣，和特异性结合分析物和第一结合伴侣的复合 物的第二结合伴侣，并测定第二结合伴侣与所述复合物的结合，由此指示样本中分析物的 存在，其特征在于所述分析物是大麻素，并且所述第二结合伴侣包含抗体轻链和重链的互 补决定区(CDR)，其中所述轻链区具有SEQ ID NO 3的氨基酸23-35,51-57和93-100的氨 基酸序列，而所述重链区具有SEQ ID NO 4的氨基酸四-35、50-60和99-109的氨基酸序 列。
11.权利要求10的免疫测定，其是非竞争性的同源性免疫测定，优选TR-FRET。
12.权利要求10或11任一项的免疫测定，其中待分析的样本选自血液、尿液和口腔流体。
13.权利要求10的免疫测定，其中从唾液测定THC。
14.权利要求10至13任一项的免疫测定，其中第一结合伴侣包含抗体轻链和重链的互 补决定区(CDR)，其中所述轻链区具有SEQID NO 1的氨基酸M_35、51_57和90-98的氨基 酸序列，而所述重链区具有SEQ ID NO 2的氨基酸27-36、51-66和99-107的氨基酸序列。
15.编码权利要求1至3任一项的结合伴侣的多核苷酸。
16.能够表达权利要求1至3任一项的结合伴侣的宿主细胞。
全文摘要
公开了结合伴侣，尤其是特异性识别抗-THC和THC(四氢大麻酚)之间的抗原-抗体免疫复合物的抗体片段。结合伴侣有助于用于检测大麻使用的非竞争性同源性免疫测定。还描述了包含该结合伴侣的测试试剂盒。优选，将免疫测定应用于路边测试来自被怀疑驾驶员的唾液。
文档编号G01N33/542GK102057277SQ200980121568
公开日2011年5月11日 申请日期2009年6月5日 优先权日2008年6月12日
发明者H·索德伦德, K·塔金纳恩, T·普里 申请人:芬兰技术研究中心