专利名称：健儿糖浆的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及由中药材爵床、萝蘑制成的健儿糖浆的质量控制方法。具体涉及高效液相色谱法同时测定该药物中 6' -hydroxy justicidin B(I) ,6' -hydroxy justicidin A(II),6' -hydroxy justicidin C(III),chinensinaphthol methyl ether(IV),taiwanin C(V)and neojusticin A(VI)六种主要活性成分的含量。并采用高效液相色谱质谱联用技术对供试品中六种成分进行确认。首次采用含量测定结合指纹图谱的方法控制健儿糖浆的质量。
背景技术：
健儿糖浆由爵床和萝蘑两味药材组成，具有消疳化积、行气活血、消肿解毒的功效，用于小儿疳积。《江西省药品标准》(1982年版)中收录健儿糖浆，并颁布了健儿糖浆质量控制标准，但只有爵床药材的薄层色谱鉴别且无含量测定方法，局限性很大，难于控制健儿糖浆的质量。中药材爵床中的主要活性成分为木脂素。本课题组杨美华等在中草药2006年6月第37卷第6期发表文章“RP-HPLC法测定健儿糖浆中6 ‘-羟基-爵床定 B”。在 Journal of Pharmacetical and Biomedical Analysis (2006，41)上发表 “A new lignanfrom the Jian-er syrup and its content determination by RP-HPLC，，一文。本发明在以往工作基础上，利用高效液相色谱法同时测定健儿糖浆中6' -hydroxy justicidin B(I)，6 ‘ -hydroxyjusticidin A(II)，6 ‘ -hydroxy justicidin C(III)， chinensinaphthol methyl ether (IV)，taiwanin C (V) and neojusticin A(VI)六禾中木月旨素的含量，结果准确，重现性好。并采用高效液相色谱质谱联用技术对供试品中六种成分进行确认。首次采用含量测定结合指纹图谱的方法控制健儿糖浆的质量，提高了健儿糖浆的质量控制标准，更好的保证了本复方制剂较高的质量研究水平。
发明内容
本发明的目的是制定新的健儿糖浆质量控制方法，利用高效液相色谱法同时测定该药物中 6 ‘ -hydroxyjusticidin B(I) ,6 ‘ -hydroxy justicidin A(II)， 6' -hydroxy justicidin C(III),chinensinaphthol methyl ether(IV),taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种主要活性成分的含量，经方法学考察试验，确认方法简便、结果准确，重现性好；采用高效液相色谱质谱联用技术对供试品中六种成分进行确认；首次采用含量测定结合指纹图谱的方法控制健儿糖浆的质量，保证了质量检测标准的准确性、 先进性和有效性。健儿糖浆由爵床和萝蘑两味药材组成，具有消疳化积、行气活血、消肿解毒的功效，用于小儿疳积。《江西省药品标准》(1982年版)中收录健儿糖浆，并颁布了健儿糖浆质量控制标准，但只有爵床药材的薄层色谱鉴别且无含量测定方法，局限性很大，难于控制健儿糖浆的质量。中药材爵床中的主要活性成分为木脂素。本发明利用高效液相色谱法同时测定健儿糖菜中 6' -hydroxyjusticidin B(I) ,6' -hydroxyjusticidin A(II),6' -hydroxy justicidin C(III),chinensinaphthol methyl ether(IV),taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种木脂素的含量，结果准确，重现性好。并采用高效液相色谱质谱联用技术对供试品中六种成分进行确认。首次采用含量测定结合指纹图谱的方法控制健儿糖浆的质量，提高了健儿糖浆的质量控制标准，更好的保证了本复方制剂较高的质量研究水平。完成本发明通过下述技术方案予以实现(1)用高效液相色谱法同时测定该药物中 6 ‘ -hydroxy justicidinB(I)，6 ‘ -hydroxy justicidin A(II)，6 ‘ -hydroxy justicidin C(III)，chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C (V)and neojusticin A(VI)六种成分的含量；( 用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行确认；C3)建立健儿糖浆指纹图谱具体的健儿糖浆新的质量控制检测方法，可通过以下步骤予以实现仪器、药品及材料仪器岛津液相色谱仪(LC-20AT)，岛津紫外检测器(SPD-M20A)，岛津色谱工作站 (Multi-PDA, Verl. 22)日本岛津公司Mettler AE-2精密分析天平Mettler仪器公司电热恒温水浴锅HH · SY21-Ni 北京市长风仪器仪表公司CX-250型超声波清洗机北京市天海双龙医疗设备有限责任公司旋转蒸发器RE-52A 上海亚荣生化仪器厂大孔树脂天津南开和成科技有限公司甲醇、乙醇为分析纯(北京化工厂)液相用乙腈为色谱纯(Burdick&Jackson公司)水为娃哈哈纯净水。对照品自制供试品健儿糖浆1.用高效液相色谱法测定该药物中 6' -hydroxy justicidin B (I), 6' -hydroxy justicidin A(II),6 ' -hydroxy justicidinC(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种成分的含量(1)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温 30 士 5 °C，检测波长 256nm;(2)对照品溶液的制备分别称取六种对照品适量，加甲醇制成溶液；(3)供试品溶液的制备取本品适量，加水稀释，上大孔树脂柱进行梯度洗脱。合并洗脱液，减压回收至干，残渣加甲醇稀释并定容。2.用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行了确认(1)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温 30 士 5°C，利用HPLC-DAD-ESI-MSn对六个成分进行确认。3.建立健儿糖浆的指纹图谱按照1项下的色谱条件建立健儿糖浆的指纹图谱。上述的健儿糖浆新的质量控制检测方法，优选以下具体步骤
1.用高效液相色谱法测定该药物中 6' -hydroxy justicidin B (I), 6' -hydroxy justicidin A(II),6 ' -hydroxy justicidinC(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种成分的含量(1)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相(二元梯度洗脱)，柱温 30 士 5°C，检测波长 250 士 5nm,流速 0. 8-1. 0ml/min ；(2)对照品溶液的制备分别精密称定六种对照品各0. 1-0. 3mg,定容至10_30ml 容量瓶中，作为对照品储备液。然后分别准确量取适量，混合均勻，定容至10-30ml ；(3)供试品溶液的制备精密量取本品5_15ml，加水稀释并定容至25ml。将所得溶液上大孔树脂柱。用0-50ml50%乙醇溶液冲柱，弃去洗脱液。再用100-200ml95%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至0-5ml ；(4)含量测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定六种成分的含量；(5)萝蘑药材水提物对照。2.用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行了确认(1)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相(二元梯度洗脱)，柱温 30 士 5°C，流速为 0. 8-1. 0ml/min ；(2)质谱条件正离子模式；毛细管温度为250-300°C ；电源电压为3_5kV ；毛细管电压为15-20V ；鞘气流量为30-80AU ；辅助气流量为5-15AU ；(3)测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱质谱联用系统，对样品中六种成分进行确认。3.建立健儿糖浆的指纹图谱按照1项下的色谱条件建立健儿糖浆的指纹图谱。本发明健儿糖浆新的质量控制检测方法，更优选的技术方案的技术方案可以按下列测定步骤进行1.用高效液相色谱法测定该药物中 6' -hydroxy justicidin B (I), 6' -hydroxy justicidin A(II),6 ' -hydroxy justicidinC(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种成分的含量(1)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈(A)-水(B)为流动相 (0-40min, 20-46% A ；40-60min, 46% -55% A ；60-70min, 55-60% A ；70-75min, 60-40% Α)， 柱温:35°C，检测波长256nm，流速0. 8ml/min ；(2)对照品溶液的制备分别精密称六种对照品各0. Img,甲醇定容至IOml容量瓶中，作为对照品储备液。然后，分别准确量取对照品储备液2. 5ml、l. Oml.O. 5ml、l. 25ml、 1. 25ml、1. 0ml混合均勻，定容至10ml,即得；(3)供试品溶液的制备精密量取本品10ml，加水稀释并定容至25ml。将所得溶液上大孔树脂柱。用25ml50%乙醇溶液冲柱，弃去洗脱液。再用160ml95%乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml ；(4)含量测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定六种成分的含量；(5)萝蘑药材水提物对照称取药材适量，加水煎煮二次，第一次池，第二次1. 5h。冷却后，按照上述“⑶供试品溶液的制备”、“⑷含量测定方法”操作，以此排除萝蘑药材的影响。2.用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行确认(1)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈(A)-水(B)为流动相 (0-40min, 20-46 % A ；40_60min，46-55 % ；60-70min, 55-40 % A ；70_75min，40 % A)，柱温 30°C，流速为 0. 8ml/min ；(2)质谱条件正离子模式；毛细管温度为300°C ；电源电压为4. 5kV ；毛细管电压为18V ；鞘气流量为50AU ；辅助气流量为15AU ；(3)测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱质谱联用系统，对样品中六种成分进行确认。3.建立健儿糖浆的指纹图谱按照1项下的色谱条件，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会，2004)进行数据处理，建立健儿糖浆的指纹图谱。以系统生成的对照图谱为基准，计算样本图谱与对照图谱的相似度。相似度大于0.9，说明样本所含成分较全面，质量较好；相似度介于0. 8到0. 9间，说明样本所含成分也较全面，但是部分成分的比例与对照图谱不完全一致；相似度低于0. 8，说明样本所含化学成分整体含量偏低，质量欠佳。本发明选择了六种木脂素为测定指标，并进行以下方法学考察试验1.线性范围精密称取对照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、l. Oml甲醇定容至lml。按上述色谱条件IOyL进样，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，对照品峰面积与浓度呈良好的线性关系。结果见表1。表1六种主要活性成分的回归方程与线性范围
成分
线性方程
线性范围
权利要求
1.一种由中药材爵床和萝蘑制成的健儿糖浆的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)用高效液相色谱法同时测定该药物中6‘ -hydroxy justicidin B⑴， 6' -hydroxy justicidin A(II),6 ‘ -hydroxyjusticidin C(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种主要活性成分的含量;(2)用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行了确认；(3)建立健儿糖浆指纹图谱。
2.根据权利要求1的健儿糖浆的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)用高效液相色谱法测定该药物中6'-hydroxy justicidin B(I),6' -hydroxy justicidin A(II),6 ' -hydroxyjusticidin C(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C (V) and neojusticinA (VI)六种成分的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温30士5°C，检测波长256nm ；b.对照品溶液的制备分别称取六种对照品适量，加甲醇制成溶液；c.供试品溶液的制备取本品适量，加水稀释，上大孔树脂柱进行梯度洗脱。合并洗脱液，减压回收至干，残渣加甲醇稀释并定容。(2)用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行了确认a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温30士5°C，利用HPLC-DAD-ESI-MSn对六个成分进行确认；(3)建立健儿糖浆指纹图谱。
3.根据权利要求2的健儿糖浆的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)用高效液相色谱法测定该药物中6'-hydroxy justicidin B(I),6' -hydroxy justicidin A (11),6 ' -hydroxyjusticidin C(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C (V) and neojusticin A(VI)六种成分的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相(二元梯度洗脱)，柱温 30 士 5°C，检测波长 250 士 5nm,流速 0. 8-1. 0ml/min ；b.对照品溶液的制备分别称取六种对照品适量，加甲醇制成溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品5-15ml，加水稀释并定容至25ml。静置吸附池。 将所得溶液上大孔树脂柱。用0-50ml50%乙醇溶液冲柱，弃去洗脱液。再用100-200ml95% 乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至0-5ml ；d.含量测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定六种成分的含量；e.萝蘑药材水提物对照。(2)用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行了确认a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相(二元梯度洗脱)，柱温 30士5°C，流速为 0. 8-1. 0ml/min ；b.质谱条件正离子模式；毛细管温度为250-300°C;电源电压为3-5kV；毛细管电压为 15-20V ；鞘气流量为30-80AU ；辅助气流量为5-15AU ；C.测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱质谱联用系统，对样品中六种成分进行确认。(3)建立健儿糖浆的指纹图谱
4.根据权利要求3的健儿糖浆的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)用高效液相色谱法测定该药物中6'-hydroxy justicidin B(I),6' -hydroxy justicidin A(II),6 ' -hydroxyjusticidin C(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C (V) and neojusticin A(VI)六种成分的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈(A)-水⑶为流动相 (0-40min, 20-46% A ；40-60min, 46% -55% A ；60-70min, 55-60% A ；70-75min, 60-40% Α)， 柱温:35°C，检测波长256nm，流速0. 8ml/min ；b.对照品溶液的制备分别称取六种对照品适量，加甲醇制成溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，加水稀释并定容至25ml。将所得溶液上大孔树脂柱。用25ml50%乙醇溶液冲柱，弃去洗脱液。再用160ml95%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml ；d.含量测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定六种成分的含量。e.萝蘑药材水提物对照称取药材适量，加水煎煮二次，第一次池，第二次1.证。冷却后，按照上述“(c)供试品溶液的制备”、“ (d)含量测定方法”操作，以此排除萝蘑药材的影响。(2)用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行确认a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈(A)-水⑶为流动相 (0-40min, 20-46 % A ；40_60min，46-55 % ；60-70min, 55-40 % A ；70_75min，40 % A)，柱温 30°C，流速为 0. 8ml/min ；b.质谱条件正离子模式；毛细管温度为300°C；电源电压为4. 5kV ；毛细管电压为 18V ；鞘气流量为50AU ；辅助气流量为15AU ；C.测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱质谱联用系统，对样品中六种成分进行确认。(3)建立健儿糖浆的指纹图谱按照1项下的色谱条件，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会， 2004)进行数据处理，建立健儿糖浆的指纹图谱。以系统生产的对照图谱为基准，计算样本图谱与对照图谱的相似度。相似度大于0. 9，说明样本所含成分较全面，质量较好；相似度介于0. 8到0. 9间，说明样本所含成分也较全面，但是部分成分的比例与对照图谱不完全一致；相似度低于0. 8，说明样本所含化学成分整体含量偏低，质量欠佳。
5.根据权利要求1-4任一所述的健儿糖浆的质量控制方法，其特征在于(1)用高效液相色谱法测定该药物中6' -hydroxy justicidin B(I),6' -hydroxy justicidin A(II),6 ' -hydroxyjusticidin C(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种成分的含量a.色谱条件选用乙腈-水二元梯度洗脱；b.同时测定供试品中六种成分的含量；c.供试品溶液制备供试品溶液加水稀释后，上大孔树脂柱；d.供试品溶液制备最后用甲醇溶解并定容；(2)用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行了确认a.色谱条件选用乙腈-水二元梯度洗脱；b.质谱条件离子模式；毛细管温度；电源电压；毛细管电压；鞘气流量；辅助气流量为。
6.根据权利要求5所述的健儿糖浆的质量控制方法，其特征在于(1)用高效液相色谱法测定该药物中6'-hydroxy justicidin B(I),6' -hydroxy justicidin A (II),6 ' -hydroxyjusticidin C(III), chinensinaphthol methyl ether (IV), taiwanin C(V) and neojusticin A(VI)六种成分的含量a.色谱条件选用乙腈(A)-水(B)为流动相(0-40min，20-46% A ；40-60min, 46% -55% A ；60-70min,55-60% A ；70-75min, 60-40% Α)；b.同时测定供试品中6' -hydroxy justicidin B (I), 6 ‘ -hydroxy justicidin A(II),6' -hydroxy justicidin C(III),chinensinaphthol methyl ether(IV),taiwanin C(V)and neojusticinA(VI)六种成分的含量；c.供试品溶液制备供试品溶液加水稀释后，上大孔树脂柱进行分离；d.供试品溶液制备最后用甲醇溶解并定容至5ml；(2)用高效液相色谱质谱联用对上述六种成分进行了确认a.色谱条件选用乙腈(A)-水(B)为流动相(0-40min,20-46% A ；40-60min,46-55%； 60-70min, 55-40% A ；70-75min, 40% A)，柱温 30°C，流速为 0. 8ml/min ；b.质谱条件正离子模式；毛细管温度为300°C；电源电压为4. 5kV ；毛细管电压为 18V ；鞘气流量为50AU ；辅助气流量为15AU ；(3)建立健儿糖浆的指纹图谱。
全文摘要
本发明的目的是制定新的健儿糖浆质量控制方法，利用高效液相色谱法同时测定该药物中6′-hydroxyjusticidin B(I)，6′-hydroxy justicidin A(II)，6′-hydroxy justicidin C(III)，chinensinaphthol methyl ether(IV)，taiwanin C(V)and neojusticin A(VI)六种主要活性成分的含量，经方法学考察试验，确认方法简便、结果准确，重现性好；采用高效液相色谱质谱联用技术对供试品中六种成分进行确认；首次采用含量测定结合指纹图谱的方法控制健儿糖浆的质量，保证了质量检测标准的准确性、先进性和有效性。
文档编号G01N30/72GK102293803SQ20101020920
公开日2011年12月28日 申请日期2010年6月25日 优先权日2010年6月25日
发明者杨美华, 王丽楠 申请人:中国医学科学院药用植物研究所