专利名称：检测氮氧化物的方法
检测氮氧化物的方法相关专利申请的交叉引用本申请要求2009年8月4日提交的美国临时专利申请61/231，257、2010年8月 2日的美国临时专利申请61/369，933的优先权，两专利申请以引用方式并入本文。
背景技术：
硝酸盐化合物可存在于供水中。当其浓度水平较高时，可在成人中引起与亚硝胺有关的胃部问题，并可引起婴儿的高铁血红蛋白血症。饮用水标准通常包括硝酸盐化合物在公共饮用水中的最大容许浓度。硝酸盐化合物还可以低水平存在于生物组织中，特别是创伤组织中。一氧化氮合酶(N0Q在组织中产生一氧化氮(NO)。NO在生物组织中的半衰期为约5秒。NO通常代谢成稳定的NO相关化合物(如硝酸盐和亚硝酸盐化合物)，这可在患者的尿液、血浆、组织、创液或其他样本中得以测定。样本中硝酸盐和亚硝酸盐化合物的水平可用作患者体内NO合成水平的指标。患者体内的NO在阈值水平以下时，不能实现正常的创伤修复，从而导致不愈合的慢性创伤或溃疡。需要简单、灵敏的方法来测量样品中的NO相关化合物。
发明内容
本发明涉及对生物样品(如患者的尿液、血浆、组织、创液或其他样本)中的NOxK 合物进行检测和任选定量的方法。在某些优选实施例中，采自某个部位的生物样品可包含有限量的即刻可捕集的流体(如创伤部位)。可通过样品采集装置来捕集生物样品。本发明的方法提供用于检测生物样品中极低量的NOx化合物。在一个方面，本发明提供检测NOxK合物的方法。所述方法可包括提供可能含有 NOx化合物的样品和4，4’ -磺酰基双苯胺；形成包含样品和4，4’ -磺酰基双苯胺的混合物； 以及检测指示样品中存在NOx的有色沉淀。所述混合物还可包含N-(1-萘基)乙二胺和/ 或 VC13。在另一方面，本发明提供检测创伤中NOx化合物的方法。所述方法可包括提供来自创伤的样品和4，4’ -磺酰基双苯胺；形成包含样品和4，4’ -磺酰基双苯胺的混合物；以及检测指示样品中存在NOx的有色沉淀。所述混合物还可包含N-(1-萘基)乙二胺和/或
VCl3O在另一方面，本发明提供检测NOxK合物的方法。所述方法可包括提供可能包含 NOxK合物的样品、4，4’ -磺酰基双苯胺和芳香族二胺；形成包含样品、4，4’ -磺酰基双苯胺和芳香族二胺的混合物；和检测指示样品中存在NOx的有色沉淀。芳香族二胺可包括 N-(l-萘基)乙二胺。在另一方面，本发明提供检测创伤中NOx化合物的方法。所述方法可包括提供样品采集装置、来自创伤的样品、4，4’ -磺酰基双苯胺和芳香族二胺；形成包含样品和4，4’ -磺酰基双苯胺以及芳香族二胺的混合物；和检测指示样品中存在NOx的有色化合物。芳香族二胺可包括Ν-α-萘基)乙二胺。在上述任一实施例中，所述混合物还可包含强酸。在上述任一实施例中，所述有色沉淀可包括红色沉淀。在上述任一实施例中，所述方法还可包括加热混合物的步骤。在上述任一实施例中，所述方法还可包括过滤混合物的至少一部分的步骤。在一些实施例中，过滤混合物的至少一部分可包括捕集表面积为约1. 5mm2至约31mm2的过滤型保留介质中的滤液。在一些实施例中，过滤混合物的至少一部分可包括捕集表面积为约1. 5mm2至约20mm2的过滤型保留介质中的滤液。在一些实施例中，过滤混合物的至少一部分可包括捕集表面积为约1.5mm2 至约3. Imm2的过滤型保留介质中的滤液。在上述任一实施例中，检测有色沉淀可包括目视检测沉淀。在上述任一实施例中， 检测有色沉淀可包括定量检测有色沉淀。在上述任一实施例中，所述方法还可包括形成包含预定量的NOxK合物和4， 4’ -磺酰基双苯胺的混合物。在这些实施例中，所述方法还可包括检测有色沉淀。在这些实施例中，所述方法还可包括将包含可能含有NOx化合物的样品的混合物中的有色沉淀的量与包含预定量的NOx化合物的样品中的有色沉淀的量进行比较。在另一个方面，本发明提供试剂盒。该试剂盒可包含过滤型保留介质和选自4， 4’ -磺酰基双苯胺和Ν-α-萘基)乙二胺的化合物。在另一个方面，本发明提供试剂盒。该试剂盒可包含过滤型保留介质和选自4， 4’ -磺酰基双苯胺、N-(l-萘基)乙二胺和VCl3的两种或更多种化合物。在上述任一实施例中，所述试剂盒还可包含强酸。在上述任一实施例中，所述试剂盒还可包括样品采集装置。在一些实施例中，所述样品采集装置可用于从创伤中获得样品。 在上述任一实施例中，所述试剂盒还可包括过滤装置。在一个方面，本发明提供检测创伤中NOx化合物的方法。所述方法可包括提供来自创伤的样品和能与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物的显色试剂。所述方法还可包括形成包含样品和显色试剂的第一混合物。所述方法还可包括使第一混合物的至少一部分与被构造得适于保留有色化合物的第一保留介质接触。所述方法还可包括检测保留在第一保留介质上的有色化合物。在一些实施例中，所述方法还可包括提供能够将硝酸盐化合物还原成亚硝酸盐化合物的还原剂，其中所述第一混合物包括还原剂。在上述方法的任一实施例中，与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物的显色试剂可包含生色团或显色剂。在上述方法的任一实施例中，与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物的显色试剂可选自4，4'-双_(二甲基氨基)二苯甲硫酮；奧；番木鳖碱吲哚(brucine indol)；对苯基偶氮苯胺；对硝基苯胺；邻氨基苯甲酸；对氨基苯乙酮；对氨苯基砜；对苯基苯胺；对氨基苯磺酸；双-(4-氨基苯基)硫醚；(4-氨基苯基)三甲基氯化铵；1-萘胺； 氯-对苯二胺；间苯二酚；N，N-二甲基苯胺；对氨基苯乙酮；4-硝基-1-萘胺；对硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；对苯基偶氮苯胺；对苯基偶氮苯胺；对硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；对氨基苯乙酮；1-萘胺；1-苯胺基萘；1-萘酚；苯甲醛2-苯并噻唑腙；蒽酮；1-蒽酚；奧；二苯胺；1，2- 二羟基苯；芝麻酚；N，N- 二甲基-1-萘胺；甲醛；高氯酸铁(III)；和N，N- 二甲基-3-羟基苯胺。
在上述任一实施例中，所述方法还可包括加热混合物的步骤。在上述方法的任一实施例中，使混合物的至少一部分与第一保留介质接触可包括使所述部分与膜滤器接触。 在上述方法的任一实施例中，检测有色化合物可包括定量检测有色化合物。在上述任一实施例中，所述方法还可包括提供第二保留介质、显色试剂和包含预定量的NOxK合物的溶液。显色试剂与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物。第二保留介质被构造成用于保留有色化合物。所述方法还可包括形成包含溶液和显色试剂的第二混合物，使第二混合物的至少一部分与第二保留介质接触，检测保留在第二保留介质上的有色化合物，以及将保留在第一保留介质上的有色化合物的量与保留在第二保留介质上的有色化合物的量进行比较。在另一个方面，本发明提供试剂盒。所述试剂盒可包含被构造用于保留有色化合物的保留介质和可与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物的显色试剂。在一些实施例中，所述试剂盒还可包含将硝酸盐化合物还原成亚硝酸盐化合物的试剂。在上述任一实施例中，所述试剂盒还可包括样品采集装置。在上述任一实施例中，所述试剂盒还可包括含有保留介质的过滤装置。^JL如本文所用，“N0X”是指一氧化氮相关(NO相关)化合物。NO相关化合物包括一氧化氮及其衍生物。NO衍生物包括硝酸盐化合物和亚硝酸盐化合物。本文中所用的“包括”、“包含”或“具有”以及它们的变化形式意在涵盖其后所列举的项目及其等同项目以及附加项目。除非另有规定或限制，否则术语“偶联”、“附接”、“连接，，及其变化形式作广义使用并涵盖直接连接和间接连接两者。此外，术语“偶联”不限于物理或机械偶联。应当理解，可利用其他实施例并且在不脱离本发明的范围的情况下可以进行结构或逻辑上的改变。此外，诸如“顶部”、“底部”等术语仅用于描述其彼此关联的元件，但绝非意在描述装置的具体取向，用于表明或暗示装置的必需或要求的取向，或规定本文描述的发明在应用时应如何使用、安装、陈列或设置。词语“优选的”和“优选地”是指在某些情况下，可以提供某些有益效果的本发明实施例。然而，在相同的情况或其他情况下，其他实施例也可以是优选的。此外，对一个或多个优选实施例的表述并不暗示其他实施例是不可用的，且并非意图将其他实施例排除在本发明范围之外。本文所用的“一种(个)”、“所述(该)”、“至少一种(个)”以及“一种或多种(一个或多个)”可互换使用。因此，例如，包含“一个”样本收集区的制品可被解释为意指制品包括“一个或多个”样品收集区。相似地，用于检测“一种”被分析物的方法可被解释为意指该方法可涉及检测“一种或多种”被分析物。术语“和/或”意指所列要素的一个或全部，或所列要素的任何两个或更多个的组
I=I O本文所用的术语“或(或者)”通常按其意义应用，包括“和/或”，除非上下文清楚表明并非如此。还有，本文通过端点表述的数值范围包括该范围内的所有数值(比如，1-5包含1、 1. 5、2、2· 75,3,3. 80、4、5 等)。本发明的上述发明内容并非意图描述本发明的每一个公开的实施例或每种实施方式。以下具体实施方式
更具体地举例说明了示例性实施例。在本专利申请全文的几处， 通过实例列表提供指导，可以不同组合使用这些实例。在每一种情况下，被引用的列表均仅用作一个代表性的组，不应被理解为是排他性列表。
将参照下面列出的附图来进一步说明本发明，其中在这几个视图中类似的结构由类似的数字标注。图IA是根据本发明用于检测硝酸盐化合物或亚硝酸盐化合物的装置的一个实施例的俯视图。图IB是图IA装置的分解侧视图。图2A是根据本发明用于检测硝酸盐化合物或亚硝酸盐化合物装置的的一个实施例的俯视图。图2B是图2A装置的分解侧视图。图3是得自反射密度计的数据图。图4是得自分光光度计的数据图。图5是得自反射密度计的数据图。图6是得自分光光度计的数据图。图7是得自反射密度计的数据图。图8是得自分光光度计的数据图。图9是得自反射密度计的数据图。
具体实施例方式本发明整体涉及用于检测样品中的氮氧化物(如亚硝酸盐和/或硝酸盐化合物) 的制品和方法。本发明还涉及评估创伤状况的制品和方法。本发明的制品和方法提供了对样品中较低(如生理学中)水平的NOx进行测量的速测法。在一些实施例中，本发明的方法包括在过滤片中收集可溶性有色化合物或有色沉淀，该有色化合物或有色沉淀指示有亚硝酸盐化合物或硝酸盐化合物存在。在一些实施例中，可在具有较小横截面积的过滤片中收集沉淀。在有较小横截面积的过滤片中收集沉淀， 具有可允许对样品中极低水平的NOx化合物进行检测或定量的优点。样品和样品收集本发明的方法可用于检测多种样品中的NOx化合物，所述多种样品包括(但不限于)水(如地表水、池塘水、井水、工业用水、饮用水)、农业样品(如废水塘、牲畜饲料、农作物、土壤)、食物产品(如蔬菜、乳制品)、和患者样品(如血液、尿液、组织、血浆、创面、创面渗出物)。本发明的方法可联合多种样品采集装置使用。优选的样品采集装置(如吸移管、 拭子、海绵、伤口敷料等)基本上不含反应性亚硝酸盐或硝酸盐化合物。合适的样品采集装置的实例描述于2009年8月4日提交的名为“SAMPLING DEVICES AND METHODS OF USE” 的美国专利申请No. 61/231，236，该专利以引用方式全文并入本文。样品采集装置可处理得适于从创伤中获得样品。例如，在一些实施例中，使样品采
7集装置适于从创伤中获得样品的办法可包括处理所述装置以使其基本上去污、消毒、或灭菌。在一些实施例中，使样品采集装置适于从创伤中获得样品的办法可包括将样品采集装置封装在包装中，所述包装已经过处理以使其基本上去污、消毒、或灭菌。在一些实施例中， 使样品采集装置适于从创伤中获得样品的办法可包括由易于吸收或吸附创面渗出物的材料构造样品采集装置。在一些实施例中，使样品采集装置适于从创伤中获得样品的办法可包括提供具有选来抵抗与创伤组织粘附的面创层的吸收材料。用于收集样品的装置以可脱开的方式采集(如通过吸附和/或吸收)一定量的足以进行一个或多个测试工序的样品(如创面渗出物)。检测样品中硝酸盐或亚硝酸盐化合物的方法本发明的方法包括检测样品中的NOx化合物。本发明的方法还包括检测创面渗出物样品中的N0X。NO通常代谢成某些稳定的产物，诸如硝酸盐和亚硝酸盐化合物，这可在患者的尿液、血浆、组织、创液或其他样本中得以测定。样本中硝酸盐化合物、亚硝酸盐化合物或其他NO相关产物的水平可用作患者体内NO合成水平的指标。NO相关产物或氧化剂应激相关产物的“水平”通常是指样本中或样本的流体部分中相应产物的浓度(摩尔/升、微摩尔/升或其他合适的单位)。然而，还可使用其他度量单位来表示产物的水平。例如，可使用绝对量(以微克、毫克、纳摩尔、微摩尔、摩尔或其他合适的单位计)、特别是如果量是回指患者样本的恒定的量、质量或体积(如克、千克、毫升、 升或其他合适的单位)。在一个方面，本发明提供采用形成有色化合物(如与以下所示化合物I类似或相同的红色阳离子染料)的反应来检测样品中NOx化合物的方法化合物I在一些实施例中，所述方法包括提供样品、保留介质和显色试剂。所述显色试剂能够与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物。保留介质被构造得用于保留有色化合物。所述方法还包括在允许亚硝酸盐化合物与显色试剂反应以形成有色化合物的条件下形成包含样品和显色试剂的混合物，使混合物的至少一部分与保留介质接触，以及检测保留在保留介质上的有色化合物。样品可为可能包含硝酸盐化合物和/或亚硝酸盐化合物的任何样品。所述方法特别适合于较小体积的样品(如约2μ1至约10μ1)，所述样品包含较低累积浓度(如 ^ 50μΜ)的硝酸盐和/或亚硝酸盐化合物。样品可为生物样品(如患者的尿液、血浆、 组织、创液或其他样本)。所述方法的实施例特别适用于创伤液的样品，因为i)难以从从创伤部位即刻获得超过10微升的创伤液，和ii)生物材料的样品通常具有较低浓度(如彡50 μ M、彡40 μ M、彡30 μ M、彡20 μ Μ、或彡10 μ Μ)的吣3和/或NO2化合物存在于样品材料中。保留介质可为被构造用于捕集和保留有色化合物的任何介质。例如可通过吸收、吸附和/或过滤来捕集和保留有色化合物。吸附可藉疏水性和/或库仑(离子)相互作用来加以促进。过滤过程可包括将有色化合物捕集于过滤片的表面和/或过滤片的孔内。在一些实施例中，保留介质表现出对有色化合物的各向异性的捕集和保留(例如其将有色化合物捕集和保留在介质表面上或附近的场合)。合适的保留介质的实例包括片材介质(即，大致平坦的材料片，例如塑料薄膜、膜滤器和非织造材料)和粒子。在一些实施例中，粒子可为多孔粒子。在一些实施例中，粒子可嵌入实质上不会捕集或保留有色化合物的基质(如纤维、微纤维或水凝胶)。保留介质可包含与有色化合物中的离子基团相互作用离子基团， 从而将有色化合物捕集和保留在保留介质上和/或介质内。用于捕集和保留阳离子有色化合物的合适离子基团的非限定性实例包括磺酸盐基团、羧酸盐基团、磷酸盐基团、硫酸酯基团和磷酸酯基团。用于捕集和保留阴离子有色化合物的合适离子基团的非限定性实例包括各种季铵基团、膦基和锍基。所述方法包括使用能够与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物的显色试剂。显色试剂可包括本领域中已知的多种显色试剂中的至少一种，包括E. Sawicki等人(1963)的名禾尔为 “Comparison of fifty-two spectrophotometrie methods for the determination Of nitrite(用于测定亚硝酸盐的五十二种分光光度法的比较)”(Talanta，第10卷，第 641-655页；Pergamon Press Ltd.，Oxford, UK)的出版物中所描述的显色试剂，该出版物以引用方式全文并入本文中。显色试剂包含生色团和显色剂。生色团可与显色剂反应形成阴离子有色化合物。形成阳离子有色化合物的合适生色团包括例如二芳基甲烷阳离子(如 4,4'-双_( 二甲基氨基)二苯甲硫酮)、二芳基胺阳离子(如奧、番木鳖碱吲哚)、双偶氮染料双阳离子(如对苯基偶氮苯胺)、偶氮染料阳离子(如对硝基苯胺、邻氨基苯甲酸、 对氨基苯乙酮、对氨苯基砜、对苯基苯胺、对氨基苯磺酸、双-(4-氨基苯基)硫醚、氨基苯基)三甲基氯化铵和1-萘胺)、重氮阳离子(如氯-对苯二胺)和吩噁嗪双阳离子(如间苯二酚；N，N- 二甲基苯胺)。形成阴离子有色化合物的合适生色团包括例如偶氮染料阴离子(如对氨基苯乙酮、4-硝基-1-萘胺、对硝基苯胺、4-硝基-1-萘胺)、三氮烯阴离子 (如对苯基偶氮苯胺)和甲臜(formazan)阴离子(如对苯基偶氮苯胺、对硝基苯胺、4-硝基-1-萘胺、对氨基苯乙酮)。显色剂包括多种本领域中已知的显色剂。通常，将某些显色剂与某些生色团配合使用，以在生色团和显色剂与NO2-反应时得到特定的有色化合物(参见Sawicki等人，1963 年)。合适的显色剂包括例如1-萘胺；1-苯胺基萘；1-萘酚；苯甲醛2-苯并噻唑腙；蒽酮； 1-蒽酚；奧；二苯胺；1，2-二羟基苯；芝麻酚；N，N-二甲基-1-萘胺；甲醛；高氯酸铁(III)； 和N，N-二甲基-3-羟基苯胺)。在一些实施例中，所述方法包括形成包含可能含有NOx化合物的样品、显色试剂 (如4，4’_磺酰基双苯胺)、显色剂(例如，芳香族二胺如N-(l-萘基)-乙二胺)和酸(如 HCl)的混合物。所述方法还包括检测指示样品中存在NOx的有色化合物(如可溶性化合物或沉淀)。该混合物在允许亚硝酸盐化合物与显色试剂反应形成有色化合物的条件下形成。 合适的条件是已知的并且由例如Ε. Sawicki等人描述。如反应方案I所示，所述条件包括酸(如HC1、H3P04、H2S04、乙酸、甲酸)以有利于有色化合物的形成。在一些实施例中，所述条件可包括提高了的温度(如约70°C )以提高有色化合物的形成速率。
在所述方法的一些实施例中，所述混合物还可包含可促使硝酸盐化合物还原成亚硝酸盐化合物的还原剂(如VCl3)。在其中将VCl3用作还原剂的实施例中，HCl为优选的酸， 以i)使VCldI定，和ii)有利于有色化合物的形成。其他合适的还原剂包括例如活泼金属 (如Cd、Al、Si)、氨和硼氢化物。在某些可供选择的实施例中，混合物可经受促使硝酸盐化合物还原成亚硝酸盐化合物的处理(如电化学还原、光化学还原)。用于使硝酸盐化合物还原成亚硝酸盐化合物的方法描述于J. C. Fanning的论文中(“The chemical reduction of nitrate in aqueous solution";Coordination Chemistry Reviews,第 199 卷第 159-179 页；2000年；Elsevier, New York, NY)，其以引用方式全文并入本文中。在一个实施例中，所述方法包括形成包含可能含有NOxK合物的样品和4，4’ -磺酰基双苯胺的混合物。所述方法还包括检测指示样品中存在NOx的有色沉淀。在一些实施例中，所述混合物还可包含Ν-α-萘基)-乙二胺。在一些实施例中，所述混合物还可包含 VCl30在一些实施例中，所述混合物还可包含强酸(如HC1)。在一个实施例中，所述方法包括形成包含可能含有NOxK合物的样品、4，4’ -磺酰基双苯胺和芳香族二胺的混合物。所述方法还包括检测指示样品中存在NOx的有色化合物。 在一些实施例中，芳香族二胺包括Ν-α-萘基)-乙二胺。在一些实施例中，所述混合物还可包含VC13。在一些实施例中，所述混合物还可包含强酸(如HC1)。在一个实施例中，检测NOx化合物的方法包括形成包含可能含有NOx化合物的样品、VC13*4，4’ -磺酰基双苯胺的混合物。所述方法还包括检测指示样品中存在NOx的有色化合物。在一个实施例中，所述检测NOx化合物的方法包括形成包含可能含有NOx化合物的样品、N-(l-萘基)-乙二胺和4，4’_磺酰基双苯胺的混合物。所述方法还包括检测指示样品中存在NOxW有色化合物。在一个实施例中，检测NOx化合物的方法包括形成包含可能含有NOx化合物的样品、VCl3和N-(l-萘基)-乙二胺的混合物。所述方法还包括检测指示样品中存在NOx的有色化合物。不必受理论的约束，但可认为反应方案I给出了形成有色染料的示例性推测途径，以检测包含硝酸盐(或亚硝酸盐)化合物、VC13、HC1、对二氨基二苯砜(4，4’ -磺酰基双苯胺)和N-(l-萘基)-乙二胺的混合物中的NO3-(或Ν02_)反应方案I
权利要求
1.一种检测创伤中NOx化合物的方法，其包括提供来自创伤的样品、第一保留介质和显色试剂；其中所述显色试剂能够与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物；其中所述第一保留介质被构造用于保留所述有色化合物在允许亚硝酸盐化合物与所述显色试剂反应形成所述有色化合物的条件下形成包含所述样品和所述显色试剂的第一混合物；使所述第一混合物的至少一部分与所述第一保留介质接触；和检测保留在所述第一保留介质上的所述有色化合物。
2.根据权利要求1所述的方法，该方法还包括提供还原剂，其中所述第一混合物包括所述还原剂，其中所述条件同时允许硝酸盐化合物还原成亚硝酸盐化合物且允许亚硝酸盐化合物与所述显色试剂反应形成所述有色化合物。
3.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述显色试剂包含生色团或显色剂。
4.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述显色试剂选自、4，4'-双_(二甲基氨基)二苯甲硫酮；奧；番木鳖碱吲哚；对苯基偶氮苯胺；对硝基苯胺；邻氨基苯甲酸；对氨基苯乙酮；对氨苯基砜；对苯基苯胺；氨基苯磺酸；双-(4-氨基苯基)硫醚；(4-氨基苯基) 三甲基氯化铵；1-萘胺；氯-对苯二胺；间苯二酚；N，N 二甲基苯胺；对氨基苯乙酮；4-硝基-1-萘胺；对硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；对苯基偶氮苯胺；对苯基偶氮苯胺；对硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；对氨基苯乙酮；1-萘胺；1-苯胺基萘；1-萘酚；苯甲醛2-苯并噻唑腙；蒽酮；I-蒽酚；奧；二苯胺；1，2- 二羟基苯；芝麻酚；N，N- 二甲基-1-萘胺；甲醛；高氯酸铁(III)；和N，N-二甲基-3-羟基苯胺。
5.根据前述任一项权利要求所述的方法，该方法还包括加热所述混合物的步骤。
6.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中检测有色化合物包括目视检测所述有色化合物。
7.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中检测有色化合物包括定量检测所述有色化合物。
8.根据前述任一项权利要求所述的方法，该方法还包括形成第二混合物，其包含预定量的NOx化合物和与亚硝酸盐化合物反应形成有色化合物的显色试剂；使所述第二混合物的至少一部分与被构造用于保留所述有色化合物的第二保留介质接触；检测保留在所述第二保留介质上的所述有色化合物；和将保留在所述第一保留介质上的有色化合物的量与保留在所述第二保留介质上的有色化合物的量进行比较。
9.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述第一或第二保留介质包括具有离子官能团的介质。
10.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中使所述混合物的至少一部分与保留介质接触包括使所述部分与膜滤器接触。
11.根据权利要求10所述的方法，其中使所述部分与膜滤器接触包括使所述部分与接触表面积为约1. 5mm2至约31mm2的膜滤器接触。
12.根据权利要求11所述的方法，其中使所述部分与膜滤器接触包括使所述部分与接触表面积为约1. 5mm2至约20mm2的膜滤器接触。
13.根据权利要求12所述的方法，其中使所述部分与膜滤器接触包括使所述部分与接触表面积为约1. 5mm2至约3. Imm2的膜滤器接触。
14.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中检测所述有色化合物包括采用仪器检测所述有色化合物。
15.一种试剂盒，其包含被构造用于保留有色化合物的保留介质和与亚硝酸盐化合物反应形成所述有色化合物的显色试剂。
16.根据权利要求15所述的试剂盒，其还包含将硝酸盐化合物还原成亚硝酸盐化合物的试剂。
17.根据权利要求16所述的试剂盒，其中所述试剂包括VC13。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的试剂盒，其中所述显色试剂包括4，4’-磺酰基双苯胺或Ν-α-萘基)乙二胺。
19.根据权利要求15至18中任一项所述的试剂盒，其还包含强酸。
20.根据权利要求15至19中任一项所述的试剂盒，其还包括样品采集装置。
21.根据权利要求20所述的试剂盒，其中所述样品采集装置适于从创伤中获得样品。
22.根据权利要求15至21中任一项所述的试剂盒，其还包括含有所述保留介质的过滤直ο
全文摘要
本发明提供了对生物样品中的NOx化合物进行检测和定量的方法和试剂盒。所述方法包括使包含亚硝酸盐化合物的混合物与显色试剂反应形成有色化合物，使所述混合物与被构造用于保留所述有色化合物的保留介质接触，和检测保留在所述保留介质上的所述有色化合物。
文档编号G01N33/52GK102472746SQ201080034650
公开日2012年5月23日 申请日期2010年8月3日 优先权日2009年8月4日
发明者维诺德·P·梅农 申请人:3M创新有限公司