专利名称：一种桂枝茯苓胶囊的检测方法
技术领域：
本发明属于中药检测技术领域，尤其涉及一种桂枝茯苓胶囊的检测方法。
背景技术：
桂枝茯苓胶囊是古方桂枝茯苓丸的现代剂型，来源于汉代张仲景《金匮要略》，主要由桂枝、茯苓、丹皮、芍药、桃仁等中药材组成，具有活血化瘀、祛痰利水、消癥化积的功效，可用于治疗妇科疾病，如痛经、闭经、恶露不尽、盆腔炎、盆腔包块、子宫肌瘤、子宫腺肌症、卵巢囊肿、乳腺增生、不孕症、药物流产后阴道出血、子宫内膜异位等多种病症。
桂枝茯苓胶囊一般按照以下步骤制备提取桂枝、茯苓、丹皮、芍药、桃仁等中药材的有效成分，经浓缩、干燥等工艺后制备得到胶囊。在桂枝茯苓胶囊中，桂枝的有效成分主要为桂皮醛；丹皮的有效成分主要为丹皮酚和芍药苷；桃仁的有效成分主要为苦杏仁苷；芍药的有效成分主要为芍药苷和苯甲酰芍药苷；茯苓的有效成分主要为没食子酸。上述有效成分既含有挥发性成分，又含有脂溶性成分，还含有水溶性成分，各有效成分性质差异较大，在桂枝茯苓胶囊的制备过程中其含量较难控制，因此，对桂枝茯苓胶囊的主要有效成分进行检测是保证桂枝茯苓胶囊质量稳定、一致性好的重要手段之目前一般采用高效液相色谱法对桂枝茯苓胶囊的主要有效成分进行检测，采用高效液相色谱法进行检测时，需要首先分别制备挥发性成分、脂溶性成分和水溶性成分的试样，才能进行检测，三种试样的制备方法如下向除去胶囊外壳的粉末中加水和乙醚，于75°C水浴中回流90min，冷却后取乙醚层，于35°C水浴中挥干后加乙醚溶解，得到挥发性成分的试样；向除去胶囊外壳的粉末中加水，沸腾的情况下回流30min，冷却后离心，将离心后的上清液经滤膜过滤后得到水溶性成分的试样，将离心后的沉淀在甲醇中沸腾回流30min，冷却后离心，将得到的甲醇液于75°C水浴中挥干后加甲醇溶解，经滤膜过滤后得到脂溶性成分的试样。采用高效液相色谱法对桂枝茯苓胶囊的有效成分进行检测虽然具有分离效能高、灵敏度高等优点，但是前处理较为繁琐，检测时间较长，不利于大批量生产时对桂枝茯苓胶囊的质量控制。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种桂枝茯苓胶囊的检测方法，本发明提供的检测方法无需进行复杂的样品前处理，检测时间短、检测结果准确。本发明提供了一种桂枝茯苓胶囊的检测方法，包括以下步骤以桂枝茯苓胶囊中的固体粉末为待测样品，利用近红外光谱仪检测所述待测样品，获取所述待测样品的近红外光谱数据；根据没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近红外光谱数据，得到所述待测样品中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。优选的，利用近红外光谱仪检测所述待测样品时，所述待测样品的厚度为Imm 3mm,扫描次数为500次 700次。优选的，所述没食子酸的校正模型按照以下方法建立all)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；al2)利用高效液相色谱仪检测所述样品中没食子酸的含量，得到所述样品中没食子酸的化验值；al3)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；al4)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述没食子酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立没食子酸的定量校正模型。优选的，所述步骤al4)中，所述预处理的波段为1300nm 2300nm。 优选的，所述芍药苷的校正模型按照以下方法建立a21)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a22)利用高效液相色谱仪检测所述样品中芍药苷的含量，得到所述样品中芍药苷的化验值；a23)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a24)采用多元散射校正法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述芍药苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立芍药苷的定量校正模型。优选的,所述步骤a24)中，所述预处理的波段为IlOOnm 2100nm。优选的，所述苯甲酸的校正模型按照以下方法建立a31)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a32)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苯甲酸的含量，得到所述样品中苯甲酸的化验值；a33)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a34)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苯甲酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苯甲酸的定量校正模型。优选的,所述步骤a34)中，所述预处理的波段为IIOOnm 2300nm。优选的，所述苯甲酰芍药苷的校正模型按照以下方法建立a41)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a42)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苯甲酰芍药苷的含量，得到所述样品中苯甲酰芍药苷的化验值；a43)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a44)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苯甲酰芍药苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苯甲酰芍药苷的定量校正模型。优选的，所述步骤a44)中，所述预处理的波段为IlOOnm 1900nm。优选的，所述桂皮醛的校正模型按照以下方法建立a51)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；
a52)利用高效液相色谱仪检测所述样品中桂皮醛的含量，得到所述样品中桂皮醛的化验值；a53)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a54)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述桂皮醛的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立桂皮醛的定量校正模型。优选的,所述步骤a54)中，所述预处理的波段为IlOOnm 1900nm。优选的，所述丹皮酚的校正模型按照以下方法建立a61)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； a62)利用高效液相色谱仪检测所述样品中丹皮酚的含量，得到所述样品中丹皮酚的化验值；a63)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a64)采用多元散射校正法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述丹皮酚的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立丹皮酚的定量校正模型。优选的,所述步骤a64)中，所述预处理的波段为1300nm 2300nm。优选的，所述苦杏仁苷的校正模型按照以下方法建立all)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a72)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苦杏仁苷的含量，得到所述样品中苦杏仁苷的化验值；a73)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a74)采用标准归一化法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苦杏仁苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苦杏仁苷的定量校正模型。优选的，所述步骤a74)中，所述预处理的波段为IlOOnm 2300nm。与现有技术相比，本发明采用近红外分析技术，结合化学计量学和计算机软件技术，通过建立桂枝茯苓胶囊中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型实现对桂枝茯苓胶囊主要成分含量的检测，从而为桂枝茯苓胶囊的质量控制提供依据。本发明提供的检测方法无需对待测样品进行分离、提取等复杂的前处理，缩短了检测时间，提高了检测效率，减少了工作量。此外，本发明提供的检测方法对大批量样品进行检测时，结果准确、重现性好。实验表明，采用本发明提供的方法对桂枝茯苓胶囊的检测结果与采用高效液相色谱法的检测结果相比，没食子酸的相对平均偏差为I. 627%，芍药苷的相对平均偏差为I. 550%、苯甲酸的相对平均偏差为I. 012%、苯甲酰芍药苷的相对平均偏差为2. 600%、桂皮醛的相对平均偏差为2. 398%、丹皮酚的相对平均偏差为2. 109%、苦杏仁苷的相对平均偏差为I. 089%，检测结果准确、精密度良好。
图I为本发明实施例建立的没食子酸定量校正模型；
图2为本发明实施例建立的芍药苷定量校正模型；图3为本发明实施例建立的苯甲酸定量校正模型；图4为本发明实施例建立的苯甲酰芍药苷定量校正模型；图5为本发明实施例建立的桂皮醛定量校正模型；图6为本发明实施例建立的丹皮酚定量校正模型；图7为本发明实施例建立的苦杏仁苷定量校正模型。
具体实施例方式本发明提供了一种桂枝茯苓胶囊的检测方法，包括以下步骤以桂枝茯苓胶囊中的固体粉末为待测样品，利用近红外光谱仪检测所述待测样·品，获取所述待测样品的近红外光谱数据；根据没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近红外光谱数据，得到所述待测样品中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。本发明采用近红外分析技术，结合化学计量学和计算机软件技术，通过建立桂枝茯苓胶囊中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型实现对桂枝茯苓胶囊主要成分含量的检测，从而为桂枝茯苓胶囊的质量控制提供依据。在本发明中，所述桂枝茯苓胶囊为由桂枝、茯苓、丹皮、芍药和桃仁五味中药经过提取、浓缩、干燥后制得的胶囊，优选为由桂枝、白芍、茯苓、桃仁和丹皮经提取、浓缩和干燥后制得的胶囊，其有效成分主要包括没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷等。在对桂枝茯苓胶囊进行检测前，首先建立桂枝茯苓胶囊中各主要成分，如没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷等的校正模型，然后根据待测样品的近红外光谱数据分析得到待测样品中各主要成分的含量。在本发明中，所述没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷校正模型优选按照以下步骤建立a)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；b)利用高效液相色谱仪检测所述样品中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量；c)采集所述样品的近红外光谱数据；d)对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理的结果和步骤b)得到的含量分别建立没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的定量校正模型。为了清楚的说明本发明，以下分别对没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型的建立过程进行详细描述，但是，本领域技术人员可以获知，没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型的建立过程并不是完全独立进行的，如提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品、利用高效液相色谱仪检测等步骤是可以同时完成的。按照本发明，所述没食子酸的校正模型优选按照以下方法建立
all)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；al2)利用高效液相色谱仪检测所述样品中没食子酸的含量，得到所述样品中没食子酸的化验值；al3)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；al4)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述没食子酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立没食子酸的定量校正模型。首先提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品(下文简称样品)。按照本发明，所述样品数量优选为40个以上，更优选为50个以上，最优选为60个以上。得到样品后，随机将所述样品分为校正集和验证集，其中，校正集中的样品用于建立校正模型，验证集中的样品用于验证校正模型。 按照本发明，需要对所述样品进行高效液相色谱分析和近红外分析，以便获得所述样品中没食子酸的化验值和近红外光谱数据，从而建立校正模型。本发明利用高效液相色谱仪检测所述样品中没食子酸的含量，得到所述样品中没食子酸的化验值。本发明优选按照《中国药典》2010年版一部附录VI D中规定的高效液相色谱条件对所述桂枝茯苓胶囊中没食子酸的含量进行检测。对所述样品进行近红外分析时，首先利用近红外光谱仪采集所述样品的近红外光谱数据。本发明优选在比率模式下、采用静态测样方式和漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据。进行近红外光谱数据采集时，所述样品的厚度优选为Icm以上，更优选为Icm 3cm，实验表明，样品厚度小于Icm时，采集得到的光谱重复性较差。进行近红外光谱数据采集时，近红外光谱仪的扫描次数优选为300次 700次，更优选为500次 700次。得到所述样品的近红外光谱数据后，建立样品中没食子酸的定量校正模型。本发明优选采用以下方法建立没食子酸的定量校正模型对所述近红外光谱数据进行预处理；根据所述预处理获得的结果和所述没食子酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立没食子酸的定量校正模型。在建立没食子酸的定量校正模型前，本发明优选将所述样品的近红外光谱数据中的化学异常值(outlier)通过光谱影响值(Leverage)和化学值误差(Residual)检验剔除。在建立没食子酸的定量校正模型时，首先对所述样品的近红外光谱数据进行预处理，所述预处理的方法可以为多元散射校正法、标准归一法或一阶微分9点平滑法，优选为一阶微分9点平滑法。采用一阶微分9点平滑法进行预处理后，对得到的没食子酸定量校正模型进行验证时，其内部交叉决定系数(R2)最接近于1，内部交叉验证均方差(RMSEC)和验证均方根偏差(RMSEP)最小。对所述近红外光谱数据进行预处理后，根据所述预处理获得的结果和所述没食子酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立没食子酸的定量校正模型。在采用偏最小二乘法建立没食子酸的定量校正模型过程中，偏最小二乘法虽然能够处理全谱信息，但是波段过宽时会包含大量冗余信息，降低校正模型的预测精度。为了提高效正模型的预测精度，本发明中的波段优选为1300nm 2300nm，当波段处于该范围时，对得到的没食子酸定量校正模型进行验证时，其内部交叉决定系数(R2)最接近于1，内部交叉验证均方差(RMSEC)和验证均方根偏差(RMSEP)最小。在采用偏最小二乘法建立没食子酸的定量校正模型过程中，最佳主成分数为5。采用偏最小二乘法将所述经过预处理后的近红外光谱数据和所述没食子酸的化验值相关联，建立没食子酸的定量校正模型，并采用交叉验证法对所述没食子酸的定量校正模型的各项参数进行优化后，得到没食子酸的定量校正模型。按照本发明，所述芍药苷的校正模型优选按照以下方法建立a21)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a22)利用高效液相色谱仪检测所述样品中芍药苷的含量，得到所述样品中芍药苷 的化验值；a23)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a24)采用多元散射校正法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述芍药苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立芍药苷的定量校正模型。按照本发明，所述苯甲酸的校正模型优选按照以下方法建立a31)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a32)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苯甲酸的含量，得到所述样品中苯甲酸的化验值；a33)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a34)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苯甲酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苯甲酸的定量校正模型。按照本发明，所述苯甲酰芍药苷的校正模型优选按照以下方法建立a41)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a42)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苯甲酰芍药苷的含量，得到所述样品中苯甲酰芍药苷的化验值；a43)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a44)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苯甲酰芍药苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苯甲酰芍药苷的定量校正模型。按照本发明，所述桂皮醛的校正模型优选按照以下方法建立a51)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a52)利用高效液相色谱仪检测所述样品中桂皮醛的含量，得到所述样品中桂皮醛的化验值；a53)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a54)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述桂皮醛的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立桂皮醛的定量校正模型。按照本发明，所述丹皮酚的校正模型优选按照以下方法建立
a61)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a62)利用高效液相色谱仪检测所述样品中丹皮酚的含量，得到所述样品中丹皮酚的化验值；a63)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a64)采用多元散射校正法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述丹皮酚的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立丹皮酚的定量校正模型。按照本发明，所述苦杏仁苷的校正模型优选按照以下方法建立a71)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品；a72)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苦杏仁苷的含量，得到所述样品中苦杏仁苷的化验值； a73)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据；a74)采用标准归一化法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苦杏仁苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苦杏仁苷的定量校正模型。在上述芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型的建立过程中，除定量模型的建立过程之外，其他过程与没食子酸校正模型的建立过程相同。在建立芍药苷的定量校正模型时，优选采用多元散射校正法对所述样品的近红外光谱数据进行预处理；建立模型时的波段优选为IlOOnm 2100nm ;最佳主成分数为9。在建立苯甲酸的定量校正模型时，优选采用一阶微分9点平滑法对所述样品的近红外光谱数据进行预处理；建立模型时的波段优选为IlOOnm 2300nm ;最佳主成分数为10。在建立苯甲酰芍药苷的定量校正模型时，优选采用一阶微分9点平滑法对所述样品的近红外光谱数据进行预处理；建立模型时的波段优选为IlOOnm 1900nm ;最佳主成分数为5。在建立桂皮醛的定量校正模型时，优选采用一阶微分9点平滑法对所述样品的近红外光谱数据进行预处理；建立模型时的波段优选为IlOOnm 1900nm ;最佳主成分数为
U O在建立丹皮酚的定量校正模型时，优选采用多元散射校正法对所述样品的近红外光谱数据进行预处理；建立模型时的波段优选为1300nm 2300nm ;最佳主成分数为11。在建立苦杏仁苷的定量校正模型时，优选采用标准归一化法对所述样品的近红外光谱数据进行预处理；建立模型时的波段优选为IlOOnm 2300nm ;最佳主成分数为6。分别建立没食子酸校正模型、芍药苷校正模型、苯甲酸校正模型、苯甲酰芍药苷校正模型、桂皮醛校正模型、丹皮酚校正模型和苦杏仁苷校正模型后，将各校正模型装入近红外分析仪，即可实现对桂枝茯苓胶囊的快速检测，具体包括以下步骤利用装有上述各校正模型的近红外光谱仪检测待测桂枝茯苓胶囊样品，获取所述待测样品的近红外光谱数据；上述各校正模型根据所述近红外光谱数据进行分析，得到所述待测桂枝茯苓胶囊样品中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。
在进行检测时，所述待测桂枝茯苓胶囊样品的厚度优选为Icm以上，更优选为Icm 3cm ;所述近红外光谱仪的扫描次数为300次 700次，更优选为500次 700次。与现有技术相比，本发明提供的检测方法无需对待测样品进行分离、提取等复杂的前处理，缩短了检测时间，提高了检测效率，减少了工作量。此外，本发明提供的检测方法不受其他因素影响，对大批量样品进行检测时，结果准确、重现性好。实验表明，采用本发明提供的方法对桂枝茯苓胶囊的检测结果与采用高效液相色谱法的检测结果相比，没食子酸的相对平均偏差为I. 627%，芍药苷的相对平均偏差为I. 550%、苯甲酸的相对平均偏差为I. 012%、苯甲酰芍药苷的相对平均偏差为2. 600%、桂皮醛的相对平均偏差为2. 398%、丹皮酚的相对平均偏差为2. 109%、苦杏仁苷的相对平均偏差为I. 089%，检测结果准确、精密度良好。为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的桂枝茯苓胶囊的检测方法进行详细描述。实施例I·以江苏康缘药业股份有限公司质量标准研究中心提供的59个桂枝茯苓胶囊成品为样品，随机分为53个校正集和6个验证集，分别记为校正样品I 53，验证样品I 6 ;采用美国BRMR0SE公司生产的Luminar5030便携式AOTF近红外光谱仪进行检测，检测器为InGaAs ;光谱采集处理软件为Snap !;定量分析软件为TheUnscrambler ;检测条件如下波长范围IlOOnm 2300nm ;波长增量2. Onm ;比率模式Ratio Mode。I. I高效液相色谱法测定桂枝茯苓胶囊样品分别按照《中国药典》2010年版一部附录VI D中规定的高效液相色谱条件对所述桂枝茯苓胶囊样品中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量进行检测，分别得到其化验值；其中，没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛和丹皮酚的检测条件如下色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱Waters Symmetry C18,4. 6 X 250mm, 5 u m);以含0. 02%三氟乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B，梯度洗脱程序如表I所示表I梯度洗脱程序
时间(min)流动相八％流动相6%
0—5 955
5—20 95—835—1720—30 83—8117—19
30—40 81—7419—26
40—60 74—1226—88
_60—70_12_88流速lmL/min;没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷和丹皮酚的检测波长为230nm ；桂皮醛的检测波长为275nm ;
理论板数按芍药苷峰计算，应不低于4000。混合对照品溶液的制备精密称定没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛和丹皮酚对照品，加50%甲醇分别制成每ImL含IOOii g、250ii g、15ii g、10ii g、30ii g、20 u g、150 u g的溶液，即得混合对照品溶液。供试品溶液的制备取约0. 25g桂枝茯苓胶囊粉末，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞。称定重量，超声(功率为250W，频率为40KHz)处理30min,放冷，称重，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。测定法分别精密吸取混合对照品液与供试品液各IOy L，注入液相色谱仪，测定，即可得到没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛和丹皮酚的含量。苦杏仁苷的检测条件如下
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水(20 80)为流动相；流速lmL/min;检测波长218nm;理论板数按苦杏仁苷峰计算，应不低于2500。对照品溶液的制备取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每ImL含90 u g的溶液，即得对照品溶液。供试品溶液的制备取约0. 2g桂枝茯苓胶囊粉末，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入50 %乙醇25mL，称定重量，超声(功率为250W，频率为40KHz)处理30min，放冷，称重，以50%乙醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各IOy L，注入液相色谱仪，测定，即可得到苦杏仁苷的含量。I. 2采集样品的近红外光谱数据将所述样品装于样品杯中，利用近红外光谱仪，在比率模式下，采用漫反射方式采集样品的近红外光谱，每个样品重复装样扫描三次取平均值，采集样品的近红外光谱数据。I. 2. I样品厚度的确定使样品厚度分别为0. 5cm、lcm、I. 5cm和2. 0cm，扫描600次，分别得到原始光谱，并对所述原始光谱进行一阶导数处理，结果表明，样品厚度为0. 5cm时，原始光谱及一阶导数光谱的重复性不好；样品厚度为Imm以上时，原始光谱及一阶导数光谱的重复性较好，且其一阶导数光谱的移动块标准偏差值(MBSD值)差异性不大。1.2. 2扫描次数的确定使样品厚度为1cm，分别扫描300次和600次，分别得到原始光谱，并对所述原始光谱进行一阶导数处理，结果表明，扫描次数为300次和600次时得到的光谱的重复性均较好，但是，扫描次数为600次时，一阶导数光谱的MBSD值差异性更小。本实施例中，使样品厚度为lcm、扫描600次的情况下对所述样品进行分析，得到各样品的近红外光谱数据。I. 3定量校正模型的建立I. 3. I没食子酸定量校正模型的建立使用TheUnscrambler定量分析软件，对I. 2中得到的样品的近红外光谱数据进行预处理，根据该预处理得到的结果和1.1中得到的没食子酸的化验值，使用TheUnscrambler定量分析软件用偏最小二乘法和交叉验证法建立没食子酸定量校正模型。I. 3. I. I预处理方法的确定使用TheUnscrambler定量分析软件,分别采用多元散射校正法、标准归一化法和一阶微分9点平滑法对I. 2中得到的校正样品和验证样品的近红外光谱数据进行预处理，以内部交叉决定系数(R2)、内部交叉验证均方差(RMSEC)和验证均方根偏差(RMSEP)为评价指标，确定最佳预处理方法，结果参见表2，表2为预处理方法对建立没食子酸定量校正模型的影响结果。表2预处理方法对建立没食子酸定量校正模型的影响结果
权利要求
1.一种桂枝茯苓胶囊的检测方法，包括以下步骤 以桂枝茯苓胶囊中的固体粉末为待测样品，利用近红外光谱仪检测所述待测样品，获取所述待测样品的近红外光谱数据； 根据没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近红外光谱数据，得到所述待测样品中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。
2.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，利用近红外光谱仪检测所述待测样品时，所述待测样品的厚度为1_ 3_，扫描次数为500次 700次。
3.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，所述没食子酸的校正模型按照以下方法建立 all)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； al2)利用高效液相色谱仪检测所述样品中没食子酸的含量，得到所述样品中没食子酸的化验值； al3)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据； al4)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述没食子酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立没食子酸的定量校正模型。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤al4)中，所述预处理的波段为 1300nm 2300nm。
5.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，所述芍药苷的校正模型按照以下方法建立 a21)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； a22)利用高效液相色谱仪检测所述样品中芍药苷的含量，得到所述样品中芍药苷的化验值； a23)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据； a24)采用多元散射校正法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述芍药苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立芍药苷的定量校正模型。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a24)中，所述预处理的波段为 IlOOnm 2100nm。
7.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，所述苯甲酸的校正模型按照以下方法建立 a31)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； a32)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苯甲酸的含量，得到所述样品中苯甲酸的化验值； a33)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据； a34)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苯甲酸的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苯甲酸的定量校正模型。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a34)中，所述预处理的波段为 IlOOnm 2300nm。
9.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，所述苯甲酰芍药苷的校正模型按照以下方法建立 a41)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； a42)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苯甲酰芍药苷的含量，得到所述样品中苯甲酰芍药苷的化验值； a43)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据； a44)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苯甲酰芍药苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苯甲酰芍药苷的定量校正模型。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a44)中，所述预处理的波段为 IlOOnm 1900nm。
11.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，所述桂皮醛的校正模型按照以下方法建立 a51)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； a52)利用高效液相色谱仪检测所述样品中桂皮醛的含量，得到所述样品中桂皮醛的化验值； a53)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据； a54)采用一阶微分9点平滑法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述桂皮醛的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立桂皮醛的定量校正模型。
12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a54)中，所述预处理的波段为 IlOOnm 1900nm。
13.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，所述丹皮酚的校正模型按照以下方法建立 a61)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； a62)利用高效液相色谱仪检测所述样品中丹皮酚的含量，得到所述样品中丹皮酚的化验值； a63)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据； a64)采用多元散射校正法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述丹皮酚的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立丹皮酚的定量校正模型。
14.根据权利要求13所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a64)中，所述预处理的波段为 1300nm 2300nm。
15.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，所述苦杏仁苷的校正模型按照以下方法建立 a71)提供桂枝茯苓胶囊固体粉末样品； a72)利用高效液相色谱仪检测所述样品中苦杏仁苷的含量，得到所述样品中苦杏仁苷的化验值； a73)采用漫反射方式采集所述样品的近红外光谱数据； a74)采用标准归一化法对所述近红外光谱数据进行预处理，根据所述预处理获得的结果和所述苦杏仁苷的化验值，采用偏最小二乘法和交叉验证法建立苦杏仁苷的定量校正模型。
16.根据权利要求15所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a74)中，所述预处理的波段为 IlOOnm 2300nm。
全文摘要
本发明提供了一种桂枝茯苓胶囊的检测方法，包括以下步骤以桂枝茯苓胶囊中的固体粉末为待测样品，利用近红外光谱仪检测所述待测样品，获取所述待测样品的近红外光谱数据；根据没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近红外光谱数据，得到所述待测样品中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。本发明提供的检测方法无需对待测样品进行分离、提取等复杂的前处理，缩短了检测时间，提高了检测效率，减少了工作量。此外，本发明提供的检测方法对大批量样品进行检测时，结果准确、重现性好。
文档编号G01N30/02GK102759509SQ201110104100
公开日2012年10月31日 申请日期2011年4月25日 优先权日2011年4月25日
发明者宫凯敏, 朱克近, 李家春, 毕宇安, 王振中, 王正宽, 章晨峰, 萧伟, 郑伟然 申请人:江苏康缘药业股份有限公司