专利名称：一种检测液相色谱柱稳定性的方法
技术领域：
本发明涉及色谱柱技术领域，具体涉及一种检测液相色谱柱稳定性的方法。
背景技术：
液相色谱技术是一种高效分离纯化技术，在许多领域得到了广泛应用，如化工、 生物、食品、医药等。其中，色谱柱是液相色谱的核心部分，是实现物质分离的主要场所，能直接影响分离纯化的绩效，一直以来都是液相色谱技术研究领域的核心和前沿。色谱柱柱效与稳定性是色谱柱质量考察中的重要参数。其中，色谱柱柱效越高，表明色谱柱对物质的分离能力越强；色谱柱稳定性越好，表明色谱柱对于物质的分析分离重现性与稳定性越好。因此，对色谱柱柱效及其稳定性进行考察具有重要意义。在色谱柱研究领域，除了购买商业色谱柱直接对物质进行分析或者分离以外，液相色谱法都会涉及色谱柱的装填，即将固定相(又称填料)装入色谱柱管内。装填方法分为干法装填与湿法装填。前者适用于粒径较大的填料，借助于漏斗等器械进行灌装；后者适用于粒径小(如20μπι)的填料，使用相关溶剂进行勻浆，借助于高压泵进行灌装。色谱柱装填过程中，通常根据所用色谱柱类型选择适当的装填方法。根据样品处理量的不同，液相色谱柱可以分为分析柱、半制备柱、制备柱，在不同色谱柱中，填料粒径有所不同。一般而言， 适用于分析型色谱柱的填充方法有平衡密度法、平衡粘度法、动态搅拌法和勻浆法；对于半制备柱的装填方法研究较少，研究表明勻浆装填所获得的柱效及其重现性都比干法装填效果好；装填手段对于制备性色谱柱柱效的重要性仍存在争议，但总体而言，常用的装柱方法有干装柱法、勻浆装柱法、径向加压技术、轴向加压技术。对于色谱柱稳定性的考察，通常采用低流速连续进样，考察不同进样之间的色谱图参数，从而确定色谱柱的稳定性。但是，由于装填过程会影响到填料的紧密度、均一度等装填质量，影响色谱柱柱效与稳定性，进而影响下一步的分析与分离。因此，低流速连续进样的方法不能满足测定填充型液相色谱柱稳定性的需要，进一步建立相应的稳定性考察方法对色谱柱稳定性考察具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于建立一种测定色谱柱稳定性的方法，有效评价色谱柱的稳定性。该方法主要是通过两次脉冲进样的方式，首先将液相色谱柱按照常规连接方向接通，进行第一次脉冲进样测试，计算理论板数N1 ；然后，将色谱柱上下颠倒进行重新连接，在相同条件下，进行第二次脉冲进样，计算理论板数队，通过分析前后色谱行为，并比较理论板数&和队，根据其偏差程度评价液相色谱柱稳定性或均勻性的状况一般偏差在2%以内的视为色谱柱柱效稳定；偏差在2 5%的范围时，表明色谱柱稳定性一般；偏差大于5% 时，表明色谱柱稳定性较差。同时，两次脉冲色谱图的重合性是评价液相色谱柱稳定性的依据之一，重合性好，表明液相色谱柱装填均勻，稳定，反之，则装填不均勻，稳定性差。
本发明以色谱柱倒置为核心手段，通过测定色谱柱倒置前后的柱效，比较色谱行为的差异，从而确定色谱柱本身的稳定性。本方法容易操作，可以有效评价液相色谱柱的稳定性，具有很高的使用价值。
图1 本发明应用于装填稳定性较好的色谱柱所得色谱图比较实线为正向接通时测得的色谱图，虚线为色谱柱倒置后测得的色谱图。图2 本发明应用于稳定性较差的色谱柱所得色谱图比较实线为正向接通时测得的色谱图，虚线为色谱柱倒置后测得的色谱图。
具体实施例方式本发明设计了一种用于检测液相色谱柱稳定性的方法，通过比较色谱柱倒置前后的色谱柱柱效，有效评价色谱柱的稳定性。以下就本发明环型筛板及所产生的功效，配合具体实例详细说明如下实例11、将内径为25mm，长度为150mm的传统色谱柱的上端柱头拧开，用乙醇洗涤300 目无孔玻璃珠粉末，再用超纯水搅拌成勻浆，采用勻浆填充法将无孔玻璃珠均勻地填充在色谱柱管内；为了获得较好的填充效果，填充过程中对色谱柱进行超声，可以使得填料沉降更为均勻；填满后拧紧色谱柱头。之后，连接色谱分析装置，将色谱柱前端与色谱进液管路连接，本试验所用为岛津LC-20AT系统。分析检测条件流动相为超纯水，设置两个流速分别为5mm · Hiin-1UOmm · mirT1 ；样品为0. 002mol · mL"1丙酮水溶液，进样量为20 μ L ；紫外检测器，检测波长为250nm。在不同流速下分别进样，记录色谱图并计算理论板数N1 ；然后， 重新连接色谱柱管路将色谱柱倒置，即原色谱柱的底端作为现在的前端，与色谱进样管相连；原色谱柱前端成为现在的底端，与出样管路相连，在相同条件下，进行第二次脉冲进样， 记录色谱图，计算理论板数N2。实验结果如表1所示。表1装填效果较好的色谱柱颠倒前后理论塔板数变化及偏差
权利要求
1.一种能有效检测液相色谱柱稳定性的方法。该方法主要是通过两次脉冲进样的方式，首先将液相色谱柱按照常规连接方向接通，进行第一次脉冲进样测试，计算理论板数 N1 ；然后，将色谱柱上下颠倒进行重新连接，在相同条件下，进行第二次脉冲进样，计算理论板数N2,通过分析前后色谱行为，并比较理论板数N1和队，根据其偏差程度就可以有效地评价液相色谱柱稳定性或均勻性的状况。
2.根据权利要求1所述的检测液相色谱柱稳定性的方法，其特征在于，色谱柱上下颠倒进行重新连接是该方法的特点。
3.根据权利要求1所述的检测液相色谱柱稳定性的方法，其特征在于，两次脉冲色谱图的重合性是评价液相色谱柱稳定性的依据之一，重合性好，液相色谱柱装填均勻和稳定， 反之，则装填不均勻和稳定性差。
4.根据权利要求1所述的检测液相色谱柱稳定性的方法，其特征在于，理论板数N1和 N2是评价液相色谱柱稳定性的依据之二，偏差大于5%，色谱柱稳定性差，装填不好；偏差在 2 5%之间，稳定性和装填效果都一般；偏差小于2%之间，稳定性好，装填均勻。
全文摘要
本发明涉及一种能有效检测液相色谱柱稳定性的方法。该方法主要是通过两次脉冲进样的方式，首先将液相色谱柱按照常规连接方向接通，进行第一次脉冲进样测试，计算理论板数N1；然后，将色谱柱上下颠倒进行重新连接，即原色谱柱的底端作为现在的前端，原色谱柱前端成为现在的底端，在相同条件下，进行第二次脉冲进样，计算理论板数N2，通过分析倒置前后色谱图重合度，比较理论板数N1和N2，根据其偏差程度就可以有效地检测液相色谱柱稳定性或均匀性的状况。如说明书摘要附图所示为应用本发明测定装填较为稳定的色谱柱所得的色谱图，色谱图重合度很高，有效证实了柱效的稳定性。
文档编号G01N30/02GK102323339SQ201110129820
公开日2012年1月18日 申请日期2011年5月19日 优先权日2011年5月19日
发明者周鑫, 赵艳霞 申请人:周鑫