专利名称：菜豆象标准样品及其制备方法
技术领域：
本发明涉及植物检疫领域，特别是菜豆象标准样品，另外还涉及标准样品的制备方法。
背景技术：
菜 S·象(Acan thoscelides ob tec tus Gay))，豆象科Bruchidae，三齿豆象属 A^Z7A0lSCWiife1S,是我国检疫性有害生物名录中的重要害虫。主要分布于美国、墨西哥、巴西、智利、缅甸、朝鲜、日本、阿富汗、土耳其、尼日利亚、肯尼亚、埃塞俄比亚、阿根廷、秘鲁、 英国、奥地利、比利时、意大利、葡萄牙、法国、瑞士、南斯拉夫、匈牙利、德国、希腊、荷兰、西班牙、罗马尼亚、阿尔巴尼亚、波兰、前苏联；澳大利亚、新西兰等多个国家和地区。菜豆象是多种菜豆和其他豆类的重要害虫，幼虫在豆粒内蛀食，对储藏的食用豆类造成严重危害。菜豆象在田间豆荚上，在仓内干豆上都能产卵为害，但在野外，只在成熟的干豆荚的裂缝内产卵。被害豆粒可有数条幼虫危害，而无食用价值。在墨西哥和中美，豆类储藏期造成的重量损失为35%。菜豆象一旦传入，将对我国豆类生产带来重大损失，也给我国豆类出口产生严重影响。标准样品是具有一种或多种性能特征，经过技术鉴定和标准化主管部门批准的实物标准。标准样品是科学地制定技术标准(文字)和有效地实施技术标准，控制和提高工农业产品质量，保证食品安全，保障人身健康和环境质量等的重要技术手段。标准样品是整个标准化工作的一个有机组成部分，它是那些需要用标准样品来定量或定性说明文字标准内容要求的物质体现，对标准的实施起着重要的保证作用。它一般被用于分析测试物质的质量评定与控制、校准分析仪器、评定确认分析方法、分析数据对比、产品质量评价、检验人员技能水平评定和进行技术仲裁等。由于其特有的均勻性、稳定性、直观性和准确性等优点， 标准样品研究工作越来越得到各个相关领域专家的关注。但是，在目前，标准样品只是在冶金、有色金属、化学、食品添加剂等方面应用比较广泛，开展的研究也比较深入，技术也已经成熟，但在植物检疫领域尚属空白，更没有从事和昆虫标准样品的研究，很多实验室在进行昆虫形态鉴定时仍然沿用传统手段，对照图片或实验室保存的标本进行鉴定，而这些标本的来源各异，不同的实验室保存的标本在形态上有时存在很大差异，甚至会出现错误的标本。这样，由于参照物的差异从而导致了不同实验室间鉴定结果存在很大的差异性和不可比性，鉴定结果也无法进行溯源。因此，研制一批形态典型一致、具有代表性的昆虫标准样品作为实验室进行昆虫鉴定时的参照物，可以消除各实验室由于使用不同参照物而造成的结果差异，同时可以保证鉴定结果的溯源性，对确保昆虫形态鉴定结果的准确性和可靠性具有重要作用，对填补国内外植物检疫标准样品研制的空白，规范我国昆虫形态鉴定工作具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供菜豆象标准样品，及菜豆象标准样品的制备方法，促进植物检疫实验室质量控制工作、发现实验室自身存在的问题、改进和提高实验室检测水平。本发明为实现上述目的所采用的技术方案是菜豆象标准样品，树脂中镶嵌确认的菜豆象虫体，每块树脂中1头菜豆象。所述菜豆象个体性状符合下述要求成虫体长2 4. 5mm，近长椭圆形；头、胸黑色，被灰黄色茸毛；头部长而宽，密布刻点，额中线光滑无刻点；触角11节，基部4节及第11 节为桔红色，其余为黑色，基部4节为丝状，第5—10节为锯齿状，末节呈桃形，端部尖细；前胸背板圆锥形；鞘翅黑色，端缘红褐色，被灰黄或金黄色毛，其亚基部、中部及端部散生呈方形和无毛的黑斑；后足腿节腹面近端有3个齿，1个为长而尖的大齿，其后为2个小齿，大齿长度约为2个小齿的两倍；雄虫外生殖器阳基侧突基1/5愈合，内阳茎骨化刺由端部至基部方向逐渐增大变稀；雌虫第八背板呈狭梯形，基缘深凹，端部疏生少量刚毛，从背板基部两侧角向端缘方向有两条近平行的骨化条纹，第八腹板呈“Y”形。本发明菜豆象标准样品的制备方法，包括以下步骤
第一步、菜豆象标准样品的来源菜豆象标准样品的来源是从进境货物中截获的，并经专家确认；
第二步、菜豆象标准样品扩繁将已经过挑选的菜豆象放入昆虫饲养缸，用菜豆作为饲料饲养，当有大量成虫出现时，留一部分昆虫作为种子资源继续饲养，其余昆虫全部进行灭活处理，准备用于标准样品的筛选和制作；
第三步、菜豆象标准样品筛选将扩繁得到的菜豆象进行初步筛选和仔细筛选，挑选出典型特征明显、形态鉴定特征差别小的虫体制作标准样品； 第四步、标准样品制作
(1).制作模具，将亮漆均勻喷涂在模具表面；
(2).清洁模具后装好外模；
(3).将树脂加入填充料，可根据要求填入有色浆及其它填充料；
(4).加入配料并搅均勻
(5).将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均勻，均勻后将模具放正， 防止树脂凝固过程中变形；
(6).将菜豆象标本放入树脂内；
(7).树脂须完全凝固后，方可脱去模具。所述制备标准样品后，再进行第五步、菜豆象标准样品均勻性和稳定性检验 5. 1均勻性检验
均勻性检验分两步完成，一是“瓶内”均勻性检验，二是“瓶间”均勻性检验 “瓶内”均勻性检验，主要考虑尽可能减小昆虫个体间存在的差异，从标准样品菜豆象中随机选取100头进行均勻性检验；
“瓶间”均勻性检验主要是考虑包装后每个标准样品个体间的差异，验证菜豆象被镶嵌到树脂中后，这些外部包装材料对菜豆象的外部形态是否产生影响，是否影响菜豆象的形态鉴定随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的菜豆象标准样品，通过对20个包装好的菜豆象标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上，镶嵌在树脂中的菜豆象与正常裸露菜豆象几乎没有差异； 5. 2稳定性检验在进行稳定性试验时，因为标本的生物学外部形态特征不会随着时间的推移进行很大的变化，而且又是被镶嵌在树脂中，避免了氧化、发霉、变质及外部机械力量损伤而导致的形态变化，所以保存条件的变化对标准样品外部形态没有影响，不同“瓶间”的标准样品也没有差异，菜豆象标准样品的鉴定指标在很长时间内都是稳定的。所述制备标准样品均勻性和稳定性检验后，再进行第六步、菜豆象标准样品定值
菜豆象标准样品形态特征确定原则是菜豆象标准样品由专家进行确认，确认给出的菜豆象标准样品是否是菜豆象， 菜豆象个体符合下列要求
成虫体长2 4. 5mm，近长椭圆形；头、胸黑色，被灰黄色茸毛；头部长而宽，密布刻点， 额中线光滑无刻点；触角11节，基部4节及第11节为桔红色，其余为黑色，基部4节为丝状，第5—10节为锯齿状，末节呈桃形，端部尖细；前胸背板圆锥形；鞘翅黑色，端缘红褐色， 被灰黄或金黄色毛，其亚基部、中部及端部散生呈方形和无毛的黑斑；后足腿节腹面近端有 3个齿，1个为长而尖的大齿，其后为2个小齿，大齿长度约为2个小齿的两倍；雄虫外生殖器阳基侧突基1/5愈合，内阳茎骨化刺由端部至基部方向逐渐增大变稀；雌虫第八背板呈狭梯形，基缘深凹，端部疏生少量刚毛，从背板基部两侧角向端缘方向有两条近平行的骨化条纹，第八腹板呈“Y”形。本发明的有益效果针对植物检疫实验室工作的需要，本发明提供的样品为菜豆象标准样品，菜豆象标准样品镶嵌在树脂中，树脂原料是呈液体状的，它具有非常好的流动性，能够充分充斥样品表面，干固成膜后不能再溶于水。树脂透明度极高，便于观察里面标准样品的细微结构。此外，树脂还具有阻燃、耐老化、无毒、抗氧化、耐热、绝缘等优良性能， 所以将菜豆象标本镶嵌在树脂中可以延长标准样品的有效期，降低了标准样品成本。本发明标准样品可以消除各实验室由于使用不同参照物而造成的结果差异，同时可以保证鉴定结果的溯源性，对确保菜豆象形态鉴定结果的准确性和可靠性具有重要作用，对填补国内外植物检疫标准样品研制的空白，规范我国昆虫形态鉴定工作具有重要意义。具体实施例方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的描述，但本发明并不局限于具体实施例。
实施例第一步、菜豆象标准样品的来源
将进境货物中截获的菜豆象经专家鉴定后，作为亲代饲养。针对进境截获的菜豆象，无论来自哪个国家和地区，都应进行隔离饲养，经过一代后，观察子代虫体的性状是否分离，然后选择作为标准样品的亲代虫体。对于截获的昆虫要重点关注其是否为活体，以便准备下一步扩繁。把截获的昆虫做好记录，特别是要清楚地标明该昆虫来自的国家。根据不同昆虫生长相应的条件选择好饲养的温湿度等生长条件， 同时还要选择好相应的寄主作为昆虫生长需要的饲料。整个饲养过程中都要采取好防护措施，防止其向外传播扩散。特别是饲养昆虫使用的器皿和废弃的饲料残渣等，在更换新的以后，使用过的要注意做严格的灭活处理，防止卵、幼虫等随剩余物向外传播扩散。
第二步、菜豆象标准样品扩繁
在对昆虫进行扩繁前，要做好一切准备工作，例如饲养器皿、饲养环境、防护设施等，同时还要设有专人负责日常管理。菜豆象饲料采用健康无虫的菜豆，具体做法如下
将已经过挑选的菜豆象放入昆虫饲养缸，用菜豆作为饲料，放入饲养缸中。饲养缸用5 层细密的纱布将口密封，防止昆虫逃逸。将饲养缸放入22°C恒温培养箱中饲养，每日观察记录昆虫生长情况。当有大量成虫出现时，留一部分昆虫作为种子资源继续饲养，其余昆虫全部进行灭活处理。在饲养缸中放入少量溴甲烷进行熏蒸，将死亡昆虫标本放入70%的酒精溶液中保存，准备用于标准样品的筛选和制作。同时所有在饲养过程中使用过的剩余饲料残渣、饲养缸等器具均需做灭活处理，防止昆虫向外逃逸。第三步、菜豆象标准样品筛选
将扩繁得到的菜豆象倒在培养皿中进行初步筛选，该过程习惯上叫做初筛。标准样品的筛选是一项非常耗时的工作，考虑到工作量的原因，初筛工作一般由普通工作人员完成。 初筛过程主要挑选虫体完整无损、各鉴定特征明显的菜豆象(雌雄均可)，将挑选出的昆虫标本准备用于标准样品研制下一个环节的均勻性和稳定性试验。将经过初筛的菜豆象进一步仔细筛选，该过程通常叫做细筛。细筛工作一般要由专业技术人员完成。细筛过程主要是结合样品均勻性试验来完成。细筛过程要关注虫体间形态鉴定特征的细微差别。将经过细筛挑选出的菜豆象分别放到装有70%酒精溶液的白色磨口瓶内，准备做均勻性和稳定性试验。第四步、标准样品制备，具体加工流程如下
(1)制作模具，将亮漆天然树脂合成清漆均勻喷涂在模具表面；
(2)清洁模具后装好外模；
(3)将水晶树脂聚丙烯树脂加入纳米无尘填充料聚苯乙烯；
(4)加入固化剂环氧树脂固化剂、促进剂N-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡剂有机硅氧烷、透明母料聚丙烯透明母料等配料并搅均勻，树脂加入配料时，注意比例避免导致开裂或粘手，因树脂凝固时间短，一定要将加入配料的树脂一次性用完，否则无法再次使用；
(5).将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均勻，均勻后将模具放正， 防止树脂凝固过程中变形。在树脂凝固过程中请勿移动模具；
(6).将菜豆象标本放入树脂内；
(7).树脂须完全凝固后，方可脱去模具，如模具脱去过早，将导致产品上留下手印或产品表面无光泽；
(8).将产品打磨，抛光，如有需要可上色。第五步、菜豆象标准样品均勻性和稳定性检验 5. 1均勻性检验
均勻性检验分两步完成，一是“瓶内”均勻性检验，二是“瓶间”均勻性检验。在设计“瓶内”均勻性检验方案时，主要考虑尽可能减小昆虫个体间存在的差异。 由于生物的多样性，同种昆虫每一个个体间存在一定的差异是不可避免的，两个菜豆象个体不可能在形态上完全一致，但如果能够确保个体间存在的差异相对较小，这些差异对形态鉴定不会产生影响，那么也就证明了该批菜豆象个体间是均勻的。通常情况下，“瓶内”均勻性检验通常结合专家定性判定来完成。从标准样品菜豆象中随机选取100头进行均勻性检验。将100头菜豆象分成5组， 每组20头，把5组菜豆象分别寄给5位专家进行鉴定。要求专家首先对20头菜豆象进行形态鉴定，判定其是否是菜豆象，然后给出菜豆象鉴定特征；其次根据这些鉴定特征，比较菜豆象每一个个体间是否存在差异，存在的差异是否会对鉴定结果产生影响，给出菜豆象个体间均勻性结论。最后，专家对100头菜豆象的鉴定结果没有疑义，鉴定结论均为菜豆象。 每一位专家均认定菜豆象个体间存在的细微差异对菜豆象形态鉴定结果不会产生影响，菜豆象个体间在形态上是均勻的。“瓶间”均勻性检验主要是考虑包装后每个标准样品个体间的差异，验证菜豆象被镶嵌到树脂中后，这些外部包装材料对菜豆象的外部形态是否产生影响，是否影响菜豆象的形态鉴定。随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的菜豆象标准样品，首先肉眼观察菜豆象的外部形态，并将其与正常的没有进行包装处理的菜豆象进行比对，确定镶嵌在树脂中的菜豆象与正常没有进行包装处理的菜豆象在外部形态上是否存在差异，是否会影响菜豆象的形态鉴定。其次通过解剖镜进行观察，确定被镶嵌在树脂中的菜豆象与正常裸露的菜豆象在解剖镜下外部形态是否存在差异，如存在差异确定这些差异对菜豆象的鉴定结果是否会产生影响。通过对20个包装好的菜豆象标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上， 镶嵌在树脂中的菜豆象与正常裸露菜豆象几乎没有差异。说明外部包装材料对菜豆象的形态鉴定结果没有影响，菜豆象“瓶间，，个体也是均勻的。5. 2稳定性检验
标准样品的稳定性是指“标准样品在规定的条件下贮存，在规定的时间间隔内，样品的物理化学性质和特性保持在规定范围内的能力。根据其固有的生物学特性和加工工艺，昆虫标准样品具有长周期稳定性。根据标准样品稳定性确定的原则，充分考虑稳定性研究过程中检测方法的稳定性、取样方法的一致性(也就是“瓶间” 一致性)、保存条件的设计和实施等多方面问题。验证昆虫标准样品稳定性的方法非常简单，只需要肉眼观察或使用放大镜、解剖镜进行观察即可，观察不同保存条件、不同“瓶间”菜豆象的形态特征是否发生变化，发生的变化是否影响结果鉴定。保存条件的设计充分考虑到标准样品在储存、运输和使用过程中可能遇到的各种情况，如设计出光照、温度、潮湿度、振动等不同条件下，经过一定的时间间隔，确定这些保存环境的改变是否对这四种标本的形态产生影响。在进行稳定性试验时，因为标本的生物学外部形态特征不会随着时间的推移进行很大的变化，而且又是被镶嵌在树脂中，避免了氧化、发霉、变质及外部机械力量损伤而导致的形态变化，所以保存条件的变化对标准样品外部形态没有影响，不同“瓶间”的标准样品也没有差异，菜豆象标准样品的鉴定指标在很长时间内都是稳定的，因此，菜豆象标准样品的有效期暂定为5 年，最后要根据实际情况，对有效期进行最终确定。第六步、菜豆象标准样品定值
1菜豆象标准样品形态特征确定原则
菜豆象标准样品由昆虫领域5位专家进行确认，确认给出的菜豆象标准样品是否是菜豆象。
专家根据实际工作和实践经验分别对给出的菜豆象形态鉴定特征描述进行确认。2菜豆象标准样品形态鉴定特征
成虫体长2 4. 5mm，近长椭圆形。头、胸黑色，被灰黄色茸毛。头部长而宽，密布刻点， 额中线光滑无刻点。触角11节，基部4节及第11节为桔红色，其余为黑色，基部4节为丝状，第5 —10节为锯齿状，末节呈桃形，端部尖细。前胸背板圆锥形。鞘翅黑色，端缘红褐色，被灰黄或金黄色毛，其亚基部、中部及端部散生呈方形和无毛的黑斑。后足腿节腹面近端有3个齿，1个为长而尖的大齿，其后为2个小齿，大齿长度约为2个小齿的两倍。雄虫外生殖器阳基侧突基1/5愈合，内阳茎骨化刺由端部至基部方向逐渐增大变稀。雌虫第八背板呈狭梯形，基缘深凹，端部疏生少量刚毛，从背板基部两侧角向端缘方向有两条近平行的骨化条纹，第八腹板呈“Y”形。菜豆象标准样品包装和储存
菜豆象标准样品的包装采用可以长期保存并耐磨损、透光性好的树脂材料，并经过特殊加工工艺制作，菜豆象标准样品保存条件常温下保存，防潮，避免阳光直射。
权利要求
1.菜豆象标准样品，其特征是树脂中镶嵌确认的菜豆象虫体，每块树脂中1头菜豆象。
2.根据权利要求1所述的菜豆象标准样品，其特征是菜豆象个体性状符合下述要求成虫体长2 4. 5mm，近长椭圆形；头、胸黑色，被灰黄色茸毛；头部长而宽，密布刻点， 额中线光滑无刻点；触角11节，基部4节及第11节为桔红色，其余为黑色，基部4节为丝状，第5—10节为锯齿状，末节呈桃形，端部尖细；前胸背板圆锥形；鞘翅黑色，端缘红褐色， 被灰黄或金黄色毛，其亚基部、中部及端部散生呈方形和无毛的黑斑；后足腿节腹面近端有 3个齿，1个为长而尖的大齿，其后为2个小齿，大齿长度约为2个小齿的两倍；雄虫外生殖器阳基侧突基1/5愈合，内阳茎骨化刺由端部至基部方向逐渐增大变稀；雌虫第八背板呈狭梯形，基缘深凹，端部疏生少量刚毛，从背板基部两侧角向端缘方向有两条近平行的骨化条纹，第八腹板呈“Y”形。
3.菜豆象标准样品的制备方法，其特征是 包括以下步骤第一步、菜豆象标准样品的来源菜豆象标准样品的来源是从进境货物中截获的，并经专家确认；第二步、菜豆象标准样品扩繁将已经过挑选的菜豆象放入昆虫饲养缸，用菜豆作为饲料饲养，当有大量成虫出现时，留一部分昆虫作为种子资源继续饲养，其余昆虫全部进行灭活处理，准备用于标准样品的筛选和制作；第三步、菜豆象标准样品筛选将扩繁得到的菜豆象进行初步筛选和仔细筛选，挑选出典型特征明显、形态鉴定特征差别小的虫体制作标准样品； 第四步、标准样品制作(1).制作模具，将亮漆均勻喷涂在模具表面；(2).清洁模具后装好外模；(3).将树脂加入填充料，可根据要求填入有色浆及其它填充料；(4).加入配料并搅均勻(5).将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均勻，均勻后将模具放正， 防止树脂凝固过程中变形；(6).将菜豆象标本放入树脂内；(7).树脂须完全凝固后，方可脱去模具。
4.根据权利要求3所述的菜豆象标准样品的制备方法，其特征是制备标准样品后，再进行第五步、菜豆象标准样品均勻性和稳定性检验·5.1均勻性检验均勻性检验分两步完成，一是“瓶内”均勻性检验，二是“瓶间”均勻性检验 “瓶内”均勻性检验，主要考虑尽可能减小昆虫个体间存在的差异，从标准样品中随机选取100头进行均勻性检验；“瓶间”均勻性检验主要是考虑包装后每个标准样品个体间的差异，验证菜豆象被镶嵌到树脂中后，这些外部包装材料对菜豆象的外部形态是否产生影响，是否影响菜豆象的形态鉴定随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的菜豆象标准样品，通过对20个包装好的菜豆象标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上，镶嵌在树脂中的菜豆象与正常裸露菜豆象几乎没有差异； 5. 2稳定性检验在进行稳定性试验时，因为标本的生物学外部形态特征不会随着时间的推移进行很大的变化，而且又是被镶嵌在树脂中，避免了氧化、发霉、变质及外部机械力量损伤而导致的形态变化，所以保存条件的变化对标准样品外部形态没有影响，不同“瓶间”的标准样品也没有差异，菜豆象标准样品的鉴定指标在很长时间内都是稳定的。
5.根据权利要求4所述的菜豆象标准样品的制备方法，其特征是制备标准样品均勻性和稳定性检验后，再进行第六步、菜豆象标准样品定值菜豆象标准样品形态特征确定原则是菜豆象标准样品由专家进行确认，确认给出的菜豆象标准样品是否是菜豆象， 菜豆象个体符合下列要求成虫体长2 4. 5mm，近长椭圆形；头、胸黑色，被灰黄色茸毛；头部长而宽，密布刻点， 额中线光滑无刻点；触角11节，基部4节及第11节为桔红色，其余为黑色，基部4节为丝状，第5—10节为锯齿状，末节呈桃形，端部尖细；前胸背板圆锥形；鞘翅黑色，端缘红褐色， 被灰黄或金黄色毛，其亚基部、中部及端部散生呈方形和无毛的黑斑；后足腿节腹面近端有 3个齿，1个为长而尖的大齿，其后为2个小齿，大齿长度约为2个小齿的两倍；雄虫外生殖器阳基侧突基1/5愈合，内阳茎骨化刺由端部至基部方向逐渐增大变稀；雌虫第八背板呈狭梯形，基缘深凹，端部疏生少量刚毛，从背板基部两侧角向端缘方向有两条近平行的骨化条纹，第八腹板呈“Y”形。
全文摘要
本发明涉及植物检疫领域，特别是菜豆象标准样品，另外还涉及标准样品的制备方法。菜豆象标准样品，树脂中镶嵌确认的菜豆象虫体，每块树脂中1头菜豆象。本发明标准样品可以消除各实验室由于使用不同参照物而造成的结果差异，同时可以保证鉴定结果的溯源性，对确保菜豆象形态鉴定结果的准确性和可靠性具有重要作用，对填补国内外植物检疫标准样品研制的空白，规范我国昆虫形态鉴定工作具有重要意义。
文档编号G01N1/28GK102323126SQ201110220790
公开日2012年1月18日 申请日期2011年8月3日 优先权日2011年8月3日
发明者姜丽, 曹冬梅, 李鑫, 王有福, 胡强 申请人:姜丽, 曹冬梅, 王有福, 胡强