专利名称：十八味党参制剂的检测方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药制剂的检测方法。
背景技术：
十八味党参丸是藏医传统验方，处方由藏党参、榜那、决明子、东日丝巴、渣驯膏、 藏菖蒲、宽筋藤、诃子、手参、毛诃子、麝香、乳香、黄葵子、苦奎那布、松生等膏、巴夏嘎、余甘子和木香十八味药材组成，具有消炎止痛，愈疮疡，除黄水的功效。用于痹病，“网巴”病，四肢关节红肿疼痛，伸屈不利，湿疹，牛皮癣，陷蚀癣，疠痛，亚玛虫病及麻风病。目前使用的十八味党参丸的质量检测标准记载于卫生部藏药标准第一册十八味党参丸，拼音名ShibaweiDangsheng Wan书页号C1-189标准编号WS3-BC-0186-9处方藏党参150g、川贝300g、决明子80g、高山紫堇10g、渣驯膏10g、藏菖蒲40g、 宽筋藤70g、诃子50g、手参7. 5g、毛诃子8. 5g、麝香5g、乳香70g、黄葵子70g、安息香50g、 儿茶70g、巴夏嘎70g、余甘子70g、木香75g。制法以上十八味，除麝香、渣驯膏另研细粉外，其余共研成细粉，过筛，加入麝香细粉，混勻，用渣驯膏加适量水泛丸，阴干，即得。性状本品为黄色水丸；气微香，味苦。鉴别取本品置显微镜下观察有节联结乳汁管，直径12 15μπι，乳汁管内及周围细胞中充满油滴状物及细颗粒。淀粉粒、单粒圆三角形、类圆形，脐点明显，人字状、马蹄状、十字状，直径4 35 μ m ；种皮栅状细胞多成片，无色或淡黄色，表面观呈类多角形，壁微皱缩；花粉粒类圆球形，表面可见稀疏的圆形疣突，直径约35 μ m,萌发沟3条；纤维常成束， 少数散在，单根呈长梭形，直径6 20 μ m，末端渐尖，木化。中柱鞘纤维稍厚，纹孔明显，直径10 13μπι，周围薄壁细胞中常含草酸钙方晶，形成晶纤维。石细胞成群，有的略分枝或一端稍尖突，壁厚8 20 μ m，孔沟细密而清晰。草酸钙针晶易见，在薄壁细胞中成束散在， 长8 65 μ m ；内果皮为延长的厚壁细胞，长25 180 μ m,直径18 观μ m,壁厚，木化；淡黄色团块由含方形、柱形结晶的颗粒状物聚集而成；导管为具缘纹孔，直径40 110 μ m;树脂结晶不定形，红棕色，半透明，棱角明显。针晶束及黄棕色的块状物众多；中果皮薄壁细胞类圆形，内含草酸钙簇晶，直径48 60 μ m。叶上表皮细胞垂周壁平直，有非腺毛痕，气孔不定式，副卫细胞4 5个。菊糖多见，扇形，表面现放射状纹理。检查应符合丸剂项下有关的各项规定(附录8页)。功能与主治消炎止痛，愈疮荡，除黄水。用于痹病，“冈巴”病，四肢关节红肿疼痛，伸屈不利，湿疹，牛皮癣，陷蚀癣，疠痛，亚玛虫病及麻风病。用法与用量一次3丸，一日3次。规格每丸重lg。贮藏密闭，置阴凉干燥处。目前的质量检测标准仅使用显微镜进行鉴别，该检测方法的专属性和重现性有待进一步改进，此外该检测方法没有包括对处方中的毒性成分进行限量检查。
发明内容
本发明的目的在于提供一种十八味党参制剂的检测方法。为实现上述目的，本发明的技术方案为一种十八味党参制剂的检测方法，该制剂原料药组成为藏党参120-240重量份、 川贝/榜那80-320重量份、决明子50-120重量份、高山紫堇/东日丝巴5-120重量份、渣驯膏5-80重量份、藏菖蒲20-180重量份、宽筋藤50-120重量份、去核的诃子25-180重量份、手参1-120重量份、毛诃子1-120重量份、麝香/人工麝香0. 1-10重量份、乳香50-120 重量份、黄葵子50-100重量份、安息香/苦奎那布30-120重量份、儿茶/松生等膏30-100 重量份、巴夏嘎50-120重量份、余甘子50-120重量份、木香50-120重量份；该方法包括下述鉴别和/或检查方法的一种或几种通过显微镜鉴别制剂中药材藏党参、榜那、决明子、藏菖蒲、宽筋藤、诃子、手参、毛诃子、乳香、苦奎那布、巴夏嘎的形态特征；通过薄层层析对制剂中的木香、藏菖蒲、乳香进行定性鉴别，以及检查制剂中乌头
碱含量。具体地，所述的显微镜鉴别包括下述步骤取所述十八味党参制剂置显微镜下观察，鉴别以下各味药材的形态特征，其中藏党参的主要形态特征有节联结乳汁管，直径12 15 μ m，乳汁管内及周围细胞中充满油滴状物及细颗粒；菊糖扇形，表面现放射状纹理；榜那的主要形态特征淀粉粒众多，单粒呈类球形、多角形或盔帽形，直径4 11 μ m，脐点明显，呈点状、星状或裂隙状，复粒2 5粒组成；决明子的主要形态特征种皮栅状细胞多成片，无色或淡黄色，表面观呈类多角形，壁微皱缩；藏菖蒲的主要形态特征纤维常成束，少数散在，单根呈长梭形，末端渐尖；宽筋藤的主要形态特征中柱鞘纤维稍厚，周围薄壁细胞中常含草酸钙方晶，形成晶纤维；诃子的主要形态特征石细胞成群，呈类圆形、长卵形、长方形或长条形，孔沟细密而清晰，中果皮薄壁细胞类圆形，内含草酸钙簇晶；手参的主要形态特征草酸钙针晶易见，在薄壁细胞中成束散在；毛诃子的主要形态特征非腺毛1-2细胞，有的含黄色或黄棕色物；乳香的主要形态特征不规则团块无色或淡黄色，表面及周围扩散出众多细小颗粒，久置溶化；苦奎那布的主要形态特征树脂结晶不定形，红棕色，半透明，棱角明显；巴夏嘎的主要形态特征叶上表皮细胞垂周壁平直，有非腺毛痕，气孔不定式，副卫细胞4 5个；木香的定性鉴别包括la)制备木香定供试品溶液、木香对照药材溶液、不含木香的阴性样品溶液；2a)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤la)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3a)以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以香草醛硫酸溶液，风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中， 在与木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；藏菖蒲的定性鉴别包括lb)制备藏菖蒲的供试品溶液、藏菖蒲对照药材溶液、不含藏菖蒲的阴性样品溶液；2b)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤lb)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3b)以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2b)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出，、晾干，置紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点。乳香的定性鉴别包括Ic)制备乳香的供试品溶液、乳香对照药材溶液、不含乳香的阴性样品溶液；2c)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ic)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3c)以环己烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2c)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；乌头碱含量检查包括Id)制备乌头碱的供试品溶液、乌头碱对照药材溶液；2d)照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Id)所获得的供试品溶液、乌头碱对照药材溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3d)以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，将步骤2d)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以稀碘化铋钾试液；薄层色谱中，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照药材的斑点或不出现斑点。所述木香、藏菖蒲、乳香以及乌头碱的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液的制备方法包括(1)木香的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十八味党参制剂，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为木香的供试品溶液；另取去氢木香内酯对照药材，同法制成木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含木香的阴性样品溶液；(2)藏菖蒲的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十八味党参制剂，研细，加乙醚，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚使溶解，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；(3)乳香的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液
取所述十八味党参制剂，研细，加丙酮，超声处理，滤过，滤液浓缩至，作为乳香的供试品溶液；另取乳香对照药材，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含乳香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含乳香的阴性样品溶液。(4)乌头碱的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十八味党参制剂，置具塞锥形瓶中，加乙醚，氨试液，密塞，摇勻，放置，滤过，药渣加乙醚，振摇，滤过，药渣再用乙醚洗涤，滤过，合并上述滤液与洗液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用 0. 05mol/L硫酸溶液提取，合并酸液，加氨试液调节PH值至，再用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；另取乌头碱对照药材，加无水乙醇制成对照药材溶液。优选地，所述方法包括以下步骤a)木香的定性鉴别取所述十八味党参制剂0. 5 2重量份，研细，加甲醇5 20体积份，超声处理 20 45分钟，滤过，滤液浓缩至1 3体积份，作为木香的供试品溶液；另取去氢木香内酯对照药材，加甲醇制成每体积份含0. 0005重量份的对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含木香的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 0. 003 0. 007体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯， 体积比为10 20 2 8 0.5 2为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；b)藏菖蒲的定性鉴别取所述十八味党参制剂1 5重量份，研细，加乙醚5 20体积份，密塞，摇勻，超声处理20 45分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1 3体积份使溶解，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 1 0. 8重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0. 005 0. 02体积份，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以沸点为60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开剂的体积比为石油醚乙酸乙酯=2 8 0.5 2，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；薄层色谱中， 在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；c)乳香的定性鉴别取所述十八味党参制剂0. 5 3重量份，研细，加丙酮5 20体积份，超声处理 20 45分钟，滤过，滤液浓缩至1 3体积份，作为乳香的供试品溶液；另取乳香对照药材 0. 1 0. 8重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含乳香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含乳香的阴性样品溶液。照《中国药典》2010 年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取供试品溶液0. 003 0. 007体积份、阴性样品溶液0. 003 0. 007体积份、对照药材溶液0. 001 0. 003体积份，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以体积比为5 15 0.5 2的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰； 薄层色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；d)乌头碱的含量检查取所述十八味党参制剂2 8重量份，置具塞锥形瓶中，加乙醚15 40体积份， 氨试液1 5体积份，密塞，摇勻，放置18 30小时，滤过，药渣加乙醚30 70体积份，振摇0. 5 2小时，滤过，药渣再用乙醚洗涤1 3次，每次5 25体积份，滤过，合并上述滤液与洗液，蒸干，残渣加三氯甲烷5 20体积份使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷 5 20体积份分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用0. 05mol/L硫酸溶液提取2 6次， 合并酸液，加氨试液调节PH值至7 11，再用三氯甲烷提取2 5次，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇1 3体积份使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；精密称取乌头碱对照药材适量，加无水乙醇制成每体积份含0. 0005 0. 002重量份的溶液，作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液 0. 003 0. 007体积份、对照药材溶液0. 003 0. 007体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 20 2 6 0.5 2的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照药材的斑点或不出现斑点。更优选地，所述方法包括以下步骤i)木香的定性鉴别取所述十八味党参制剂lg，研细，加甲醇10mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL，作为木香的供试品溶液；另取去氢木香内酯对照药材，加甲醇制成每ImL含0. 5mg 的对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含木香的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯，体积比为15 5 1为展开剂，薄层板置展开缸中饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；ii)藏菖蒲的定性鉴别取所述十八味党参制剂3g，研细，加乙醚10mL，密塞，摇勻，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚2mL使溶解，作为供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 4g，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B 所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以沸点为60°C 90°C的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开剂的体积比为石油醚乙酸乙酯= 5 1，薄层板置展开缸中饱和30分钟，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。薄层色谱中，在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点。iii)乳香的定性鉴别取所述十八味党参制剂lg，研细，加丙酮10mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取乳香对照药材0. 5g，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含乳香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含乳香的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5 μ L、阴性样品溶液5 μ、对照药材溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，体积比为 9 1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。薄层色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；iv)乌头碱的含量检查取所述十八味党参制剂5g，置具塞锥形瓶中，加乙醚25mL，氨试液3mL，密塞，摇勻，放置M小时，滤过，药渣加乙醚50mL，振摇1小时，滤过，药渣再用乙醚洗涤2次，每次 15mL,滤过，合并上述滤液与洗液，蒸干，残渣加三氯甲烷IOmL使溶解，转移至分液漏斗中， 用三氯甲烷IOmL分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用0. 05mol/L硫酸溶液提取4次，合并酸液，加氨试液调节PH值至9，再用三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；精密称取乌头碱对照药材适量，加无水乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为14 4 1的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和 30分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照药材的斑点或不出现斑点。上述十八味党参制剂的剂型可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。制备方法为取所述十八味党参制剂，粉碎成细粉，过筛，混勻，加适量水制丸，阴干即得；或取所述十八味党参制剂，粉碎成细粉，过筛，混勻，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的口服制剂。本发明针对十八味党参制剂的组成成分，对指标性成分木香、乳香、藏菖蒲的存在进行检测，并检测制剂中的毒性成分乌头碱的含量，以达到对制剂的质量进行控制的目的。 本发明的检测方法根据实际检测需要，对现有的检测方法的检测条件进行了筛选，确定了较佳的十八味党参制剂的检测方法，该检测方法具有灵敏、重现性好和专属性强的特点。
图1为十八味党参制剂显微鉴别图；图2为十八味党参制剂中木香薄层层析鉴别图；其中从左至右样品顺序为供试品溶液1、供试品溶液2、供试品溶液3、去氢木香内酯对照药材溶液、去氢木香内酯对照药材溶液、木香阴性对照液；其中展开剂为环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯(15 5 1)。图3为十八味党参制剂中藏菖蒲薄层层析鉴别图；其中从左至右样品顺序为供试品溶液1、供试品溶液2、供试品溶液3、藏菖蒲对照药材溶液、藏菖蒲对照药材溶液、藏菖蒲阴性对照液；其中展开剂为石油醚(60°C 90°C )-乙酸乙酯(5 1)。图4为十八味党参制剂中乳香薄层层析鉴别图；其中从左至右样品顺序为供试品溶液1、供试品溶液2、供试品溶液3、乳香对照药材溶液、乳香对照药材溶液、乳香阴性对照液；
其中展开剂为环己烷-乙酸乙酯(9 1)。图5为十八味党参制剂中乌头碱含量检查的薄层层析图；其中从左至右样品顺序为供试品溶液1、供试品溶液2、供试品溶液3、乌头碱对照药材溶液、乌头碱对照药材溶液、榜那阴性对照液；其中展开剂为甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14 4 1)。
具体实施例方式下述实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。下述用于各成分鉴别的制剂在各鉴别方法下均简称为“供试品”，应理解为其指按照各鉴别方法要求制备的供试品，例如在木香定性鉴别方法中所述的供试品为“木香定性鉴别的供试品”。实验例1 显微鉴别取所述十八味党参蜜丸，研细，加水合氯醛透化1-3次，制片，置显微镜下观察，鉴别各味药材的形态特征有节联结乳汁管，直径12 15 μ m,乳汁管内及周围细胞中充满油滴状物及细颗粒。菊糖扇形，表面现放射状纹理(藏党参)。淀粉粒众多，单粒呈类球形、多角形或盔帽形，直径4 11 μ m，脐点明显，呈点状、星状或裂隙状，复粒2 5粒组成(榜那)。种皮栅状细胞多成片，无色或淡黄色，表面观呈类多角形，壁微皱缩(决明子)。纤维常成束，少数散在，单根呈长梭形，末端渐尖(藏菖蒲)。中柱鞘纤维稍厚，周围薄壁细胞中常含草酸钙方晶，形成晶纤维(宽筋藤)。石细胞成群，呈类圆形、长卵形、长方形或长条形，孔沟细密而清晰，中果皮薄壁细胞类圆形，内含草酸钙簇晶(诃子)。草酸钙针晶易见，在薄壁细胞中成束散在(手参)。非腺毛1-2细胞，有的含黄色或黄棕色物(毛诃子)。不规则团块无色或淡黄色，表面及周围扩散出众多细小颗粒，久置溶化(乳香)。树脂结晶不定形，红棕色，半透明，棱角明显(苦奎那布)。叶上表皮细胞垂周壁平直，有非腺毛痕，气孔不定式，副卫细胞 4 5个(巴夏嘎)。结果见图1。实验例2 木香的薄层鉴别(1)仪器乳钵、电子秤、具塞锥形瓶、移液管、超声波提取仪、漏斗、滤纸、蒸发皿、点样器、硅胶G薄层板、双槽层析缸、喷雾瓶、电吹风。(2)对照药材去氢木香内酯对照药材(批号111525-200907)，购自中国药品生物制品检定所。(3)试剂甲醇、丙酮、环己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、5%香草醛硫酸溶液。(4)检验方法提取溶剂的选择分别采用甲醇和丙酮为提取溶剂；提取方法的选择分别采用超声处理和加热回流；展开剂的选择分别环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯(15 5 1)、环己烷-乙酸乙酯(9 1)为展开剂。(5)分别选择以上不同提取溶剂、提取方法和展开剂进行试验，结果如下
权利要求
1.一种十八味党参制剂的检测方法，该制剂原料药组成为藏党参120-240重量份、川贝/榜那80-320重量份、决明子50-120重量份、高山紫堇/东日丝巴5-120重量份、渣驯膏5-80重量份、藏菖蒲20-180重量份、宽筋藤50-120重量份、去核的诃子25-180重量份、 手参1-120重量份、毛诃子1-120重量份、麝香/人工麝香0. 1-10重量份、乳香50-120重量份、黄葵子50-100重量份、安息香/苦奎那布30-120重量份、儿茶/松生等膏30-100重量份、巴夏嘎50-120重量份、余甘子50-120重量份、木香50-120重量份；该方法包括下述鉴别和/或检查方法的一种或几种通过显微镜鉴别制剂中药材藏党参、榜那、决明子、藏菖蒲、宽筋藤、诃子、手参、毛诃子、乳香、苦奎那布、巴夏嘎的形态特征；通过薄层层析对制剂中的木香、藏菖蒲、乳香进行定性鉴别，以及检查制剂中乌头碱含量。
2.如权利要求1所述的检测方法，其中，所述的显微镜鉴别包括取所述十八味党参制剂置显微镜下观察，鉴别以下各味药材的形态特征，其中 藏党参的主要形态特征有节联结乳汁管，直径12 15 μ m，乳汁管内及周围细胞中充满油滴状物及细颗粒；菊糖扇形，表面现放射状纹理；榜那的主要形态特征淀粉粒众多，单粒呈类球形、多角形或盔帽形，直径4 11 μ m， 脐点明显，呈点状、星状或裂隙状，复粒2 5粒组成；决明子的主要形态特征种皮栅状细胞多成片，无色或淡黄色，表面观呈类多角形，壁微皱缩；藏菖蒲的主要形态特征纤维常成束，少数散在，单根呈长梭形，末端渐尖； 宽筋藤的主要形态特征中柱鞘纤维稍厚，周围薄壁细胞中常含草酸钙方晶，形成晶纤维；诃子的主要形态特征石细胞成群，呈类圆形、长卵形、长方形或长条形，孔沟细密而清晰，中果皮薄壁细胞类圆形，内含草酸钙簇晶；手参的主要形态特征草酸钙针晶易见，在薄壁细胞中成束散在； 毛诃子的主要形态特征非腺毛1-2细胞，有的含黄色或黄棕色物； 乳香的主要形态特征不规则团块无色或淡黄色，表面及周围扩散出众多细小颗粒，久置溶化；苦奎那布的主要形态特征树脂结晶不定形，红棕色，半透明，棱角明显； 巴夏嘎的主要形态特征叶上表皮细胞垂周壁平直，有非腺毛痕，气孔不定式，副卫细胞4 5个；木香的定性鉴别包括la)制备木香定供试品溶液、木香对照药材溶液、不含木香的阴性样品溶液； 2a)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤la)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3a)以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以香草醛硫酸溶液，风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点； 藏菖蒲的定性鉴别包括lb)制备藏菖蒲的供试品溶液、藏菖蒲对照药材溶液、不含藏菖蒲的阴性样品溶液； 2b)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤lb)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3b)以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2b)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、 展开、取出，、晾干，置紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点。 乳香的定性鉴别包括Ic)制备乳香的供试品溶液、乳香对照药材溶液、不含乳香的阴性样品溶液； 2c)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ic)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3c)以环己烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2c)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、 展开、取出、晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点； 乌头碱含量检查包括Id)制备乌头碱的供试品溶液、乌头碱对照药材溶液；2d)照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Id)所获得的供试品溶液、乌头碱对照药材溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3d)以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，将步骤2d)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以稀碘化铋钾试液；薄层色谱中，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照药材的斑点或不出现斑点。
3.如权利要求2所述的检测方法，其中所述木香、藏菖蒲、乳香以及乌头碱的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液的制备方法包括(1)木香的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十八味党参制剂，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为木香的供试品溶液；另取去氢木香内酯对照药材，同法制成木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺， 配置不含木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含木香的阴性样品溶液；(2)藏菖蒲的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十八味党参制剂，研细，加乙醚，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚使溶解， 作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；(3)乳香的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十八味党参制剂，研细，加丙酮，超声处理，滤过，滤液浓缩至，作为乳香的供试品溶液；另取乳香对照药材，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含乳香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含乳香的阴性样品溶液。(4)乌头碱的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十八味党参制剂，置具塞锥形瓶中，加乙醚，氨试液，密塞，摇勻，放置，滤过， 药渣加乙醚，振摇，滤过，药渣再用乙醚洗涤，滤过，合并上述滤液与洗液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用 0. 05mol/L硫酸溶液提取，合并酸液，加氨试液调节PH值至，再用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；另取乌头碱对照药材，加无水乙醇制成对照药材溶液。
4.如权利要求1至3任一项所述的检测方法，包括下述步骤a)木香的定性鉴别取所述十八味党参制剂0. 5 2重量份，研细，加甲醇5 20体积份，超声处理20 45 分钟，滤过，滤液浓缩至1 3体积份，作为木香的供试品溶液；另取去氢木香内酯对照药材，加甲醇制成每体积份含0. 0005重量份的对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含木香的阴性样品溶液。照 《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0. 003 0. 007体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯，体积比为10 20 2 8 0.5 2为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；b)藏菖蒲的定性鉴别取所述十八味党参制剂1 5重量份，研细，加乙醚5 20体积份，密塞，摇勻，超声处理20 45分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1 3体积份使溶解，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 1 0. 8重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0. 005 0. 02体积份，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以沸点为60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开剂的体积比为石油醚乙酸乙酯=2 8 0.5 2，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；c)乳香的定性鉴别取所述十八味党参制剂0. 5 3重量份，研细，加丙酮5 20体积份，超声处理20 45分钟，滤过，滤液浓缩至1 3体积份，作为乳香的供试品溶液；另取乳香对照药材0. 1 0. 8重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含乳香的阴性样品， 并按所述供试品溶液的制备方法制成不含乳香的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取供试品溶液0. 003 0. 007体积份、阴性样品溶液0. 003 0. 007体积份、对照药材溶液0. 001 0. 003体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5 15 0.5 2的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；d)乌头碱的含量检查取所述十八味党参制剂2 8重量份，置具塞锥形瓶中，加乙醚15 40体积份，氨试液1 5体积份，密塞，摇勻，放置18 30小时，滤过，药渣加乙醚30 70体积份，振摇 0. 5 2小时，滤过，药渣再用乙醚洗涤1 3次，每次5 25体积份，滤过，合并上述滤液与洗液，蒸干，残渣加三氯甲烷5 20体积份使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷5 20体积份分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用0. 05mol/L硫酸溶液提取2 6次，合并酸液，加氨试液调节PH值至7 11，再用三氯甲烷提取2 5次，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇1 3体积份使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；精密称取乌头碱对照药材适量，加无水乙醇制成每体积份含0. 0005 0. 002重量份的溶液，作为对照药材溶液； 照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0. 003 0. 007体积份、对照药材溶液0. 003 0. 007体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 20 2 6 0.5 2的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照药材的斑点或不出现斑点。
5.如权利要求4所述的检测方法，包括以下步骤 i)木香的定性鉴别取所述十八味党参制剂lg，研细，加甲醇10mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至 2mL，作为木香的供试品溶液；另取去氢木香内酯对照药材，加甲醇制成每ImL含0. 5mg的对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含木香的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯，体积比为15 5 1为展开剂，薄层板置展开缸中饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点； )藏菖蒲的定性鉴别取所述十八味党参制剂3g，研细，加乙醚10mL，密塞，摇勻，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚2mL使溶解，作为供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 4g，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以沸点为 60°C 90°C的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开剂的体积比为石油醚乙酸乙酯=5 1， 薄层板置展开缸中饱和30分钟，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。薄层色谱中， 在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点。iii)乳香的定性鉴别取所述十八味党参制剂lg，研细，加丙酮10mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至 2mL,作为供试品溶液；另取乳香对照药材0. 5g，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含乳香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含乳香的阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5 μ L、阴性样品溶液5 μ L、对照药材溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，体积比为 9 1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。薄层色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；iv)乌头碱的含量检查取所述十八味党参制剂5g，置具塞锥形瓶中，加乙醚25mL，氨试液3mL，密塞，摇勻，放置M小时，滤过，药渣加乙醚50mL，振摇1小时，滤过，药渣再用乙醚洗涤2次，每次15mL， 滤过，合并上述滤液与洗液，蒸干，残渣加三氯甲烷IOmL使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷IOmL分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用0. 05mol/L硫酸溶液提取4次，合并酸液，加氨试液调节PH值至9，再用三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；精密称取乌头碱对照药材适量，加无水乙醇制成每 ImL含Img的溶液，作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B所述薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以体积比为14 4 1的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和30 分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照药材的斑点或不出现斑点。
6.如权利要求1 5任一项所述的检测方法，其特征在于，所述制剂原料药组成为藏党参150重量份、川贝300重量份、决明子80重量份、高山紫堇10重量份、渣驯膏10重量份、藏菖蒲40重量份、宽筋藤70重量份、去核的诃子50重量份、手参7. 5重量份、毛诃子 8. 5重量份、麝香5重量份、乳香70重量份、黄葵子70重量份、安息香50重量份、儿茶70重量份、巴夏嘎70重量份、余甘子70重量份、木香75重量份。
7.如权利要求1 5任一项所述的检测方法，其特征在于，所述制剂原料药组成为藏党参200重量份、榜那100重量份、决明子80重量份、东日丝巴100重量份、渣驯膏50重量份、藏菖蒲150重量份、宽筋藤100重量份、去核的诃子150重量份、手参100重量份、毛诃子100重量份、人工麝香1. 5重量份、乳香100重量份、黄葵子80重量份、苦奎那布100重量份、松生等膏50重量份、巴夏嘎100重量份、余甘子100重量份、木香100重量份。
8.如权利要求1 7任一项所述的检测方法，其特征在于，所述十八味党参制剂的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。
9.如权利要求1 8任一项所述的检测方法，其特征在于，取所述十八味党参制剂，粉碎成细粉，过筛，混勻，加适量水制丸，阴干即得；或取所述十八味党参制剂，粉碎成细粉，过筛，混勻，混勻，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的口服制剂。
全文摘要
本发明涉及十八味党参制剂的检测方法，包括下述鉴别和/或检查方法的一种或几种通过显微镜鉴别制剂中药材藏党参、榜那、决明子、藏菖蒲、宽筋藤、去核的诃子、手参、毛诃子、乳香、苦奎那布、巴夏嘎的形态特征；通过薄层层析对制剂中木香、藏菖蒲、乳香进行定性鉴别；以及检查制剂中乌头碱含量。通过该检测方法，可以对十八味党参制剂进行有效的检测。
文档编号G01N30/90GK102419357SQ20111044389
公开日2012年4月18日 申请日期2011年12月26日 优先权日2011年12月26日
发明者张国霞, 陈丽娟 申请人:西藏奇正藏药股份有限公司