专利名称：通过对结合合成底物和细胞底物的抗体同时检测而用于疾病诊断的方法和系统的制作方法
通过对结合合成底物和细胞底物的抗体同时检测而用于疾病诊断的方法和系统而用于疾病诊断的方法和系统本发明涉及用于疾病诊断的方法和系统，其同时检测与细胞底物和/或组织底物结合的抗体及与合成底物结合的抗体，诸如用特异性抗原包被的微粒或珠，从而提供“一步式”的方法以便以低特异性(细胞和/或组织)和高特异性(抗原)来同时检测和鉴定疾病相关的抗体。
背景技术：
在常规诊断中已经实现了使用不同的细胞和组织底物作为多个抗原来源而通过间接免疫荧光(HF)检测抗体。基于细胞的免疫荧光测试如使用HEp-2-细胞检 测抗核抗体已经作为产业标准广泛用于临床诊断和研究中(Tan EM, Adv. Immunology1982;33:167-240，Costes SV, et al. , Radiat Res.2006;165 (5):505-15, Sack U, etal. , Ann N Y Acad Sci 2009; 1173:166-73, Conrad K，，et al. , Ann N Y Acad Sci2009;1173:180-185)。使用间接基于免疫荧光方法诊断自身免疫疾病的方法为本领域已知。W097/06440揭示了一种方法，通过患者体液样品中抗微管组织中心或从其中延伸的微管的抗体的存在而诊断类风湿性关节炎。用作底物的细胞系优选是IT-I巨噬细胞系，其被用作患者样品中存在的自身抗体所结合的底物。对于自动化读取和解释荧光模式以获得改善的标准化以及成本效益的日渐增多的需求已经通过目前可获得的精密模式识别软件及完全自动化读取仪器来满足(HouYN, et al. , Radiat Res. 2009;171 (3):360-7，Hiemann R, et al.,Ann N Y Acad Sci2007;1109:358-71, Bocker ff, et al.,Radiat Res.2006;165(I):113-24. Hiemann R, etal. ,Autoimmun Rev. 2009; 9:17-22)。间接免疫荧光另外已经用于定量和半定量方法中以确定抗体效价，例如用于在特征在于自身抗体的存在和/或量的疾病诊断中(W02009/062479A2)。然而，测定开发和重组技术中的进展为检测自身抗体对于各个抗原性靶的特异性铺平了道路，从而改良了抗体测试的诊断能力。在不同疾病如感染性和风湿性疾病中发现的逐渐增多的抗体多样性需要创新的技术，以克服单一抗体检测的缺点及降低成本和报告结果的时间。因此，近来已经揭示了多元(multiplexed)平台以符合在一个样品中同时确定多个抗体特异性的需要。以基于荧光珠的流式细胞计量术和微阵列系统为基础的多重测定经证实是强有力的工具，支持更高通量分析及更广泛地检测患者样品(Avaniss-Aghajani E, et al. , Clin Vaccine Immunol. 2007;14:505-9, Lai G, et al. ,JImmunol Methods 2005;296:135-47)。计算机辅助的模式识别也已经用于分析抗原阵列，由此可以检测结合一组疾病相关的抗原的抗体并使其与特定疾病诊断相关联(Binder SRet al, Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology,Dec. 2005，1353-1357)。此夕卜，对于评估风湿性疾病的特异性抗体，可以使用通过固定的荧光编码的微珠使用多色荧光进行多重检测。这种使用模式检测算法的多色荧光分析提供了筛选ANA的一种通用平台技术(GroBmann K, et al. , Cytometry A. 201IFeb;79 (2):118-25)。
例如，疾病特异性自身抗体(AAB)是全身性风湿病和自身免疫性肝病的一种血清学现象。特别地，通过IIF检测ANA是在常规实验室中进行血清学诊断全身性风湿病的首选技术之一。尽管揭示了检测疾病特异性AAB的酶联免疫吸附测定(ELISA)和多重(multiplexing)技术,但是通过IIF测定筛选ANA仍旧是当前多级诊断方法中的标准方法。可以将重组或纯化的抗原在珠上提供，随后使用酶免疫测定分析与选择的抗原特异性结合的抗体。然而，这种方法由于不同抗原之间显然不同的灵敏性和特异性而呈现出明显的缺点(Hayashi N, et al, 2001, Clinical Chemistry,47:91649-1659)。已经公开了多种基于珠的荧光测定，其显示出与基于细胞的自身抗体诊断方法的适当相关性(Smith J, etal, 2005，Ann. N. Y. Acad. Sci. 1050:286-294)，但是对于鉴别IIF阳性对照样品的较低灵敏性表明 IIF 方法仍是有利的方法(Nifli AP, et al, Journal of Immunological methods311(2006)，189-197)。已经提出进行ANA IIF测定的一些底物，然而，在HEp-2细胞上筛选非器官特异性AAB是最成熟的方法。通常地，评估ANA随后是使用纯化的天然或重组抗原通过免疫测定 检测针对例如可提取的核抗原(ENA)及胞质抗原的特异性AAB。这种两阶段方法呈现出如下益处(i)高度灵敏性筛选最常见的、临床相关的非器官特异性AAB; (ii)最佳组合其它测定技术以基于所检测的IIF模式和所怀疑的诊断而在下游区分AAB反应性(例如SS-A/Ro和SS-B/La)，(iii)评估临床相关的AAB，而不需要进一步测试(例如抗着丝粒AAB)，及(iv)评估在未知自身抗原靶或不可获得的商业测定的情况中仅能通过IIF检测的AAB。另一实例是检测抗嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)以区分性诊断系统性脉管炎(Bosch X, et al. , Lancet 2006;368:404-18)。由于这些系统性自身免疫疾病中ANCA的发生，因此术语ANCA-相关脉管炎(AASV)已经为这些临床实际而创立。ANCA由IIF揭示，其仍是检测这些抗体反应性的推荐方法。ANCA在IIF中典型呈现出的固定的粒细胞的两种不同的染色模式斑点状胞质模式(cANCA)和核周模式(pANCA)。cANCA，通常在韦格纳肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis, WG)患者中发现,除了其它祀之外主要针对蛋白酶3 (PR3)，而pANCA主要在显微镜下多脉管炎(MPA)中发生，除了其它靶之外主要针对髓过氧化物酶(MPO) (Van der Woude FJ, et al. , Lancet 1985; 1:425-9; Csernok E, et al. , NatClin Pract Rheumatol. 2006Apr;2(4):174-5)。已经提出估计抗体浓度对于诊断和处理这些临床实际是有帮助的。抗体值通常与疾病的严重性相关(Cohen Tervaert Jff, et al. , Arch Intern Med 1989; 149:2461-5) 然而，在IIF中描述了 ANCA的其它靶抗原，其可见于非AASV患者中(Savige J, etal, Best. Pract. Res. Clin. Rheumatol. 19: 263-76, Savige J, et al. ,Am J Clin Path2003; 120:312-8) 0因此，根据最近确定的一致指导方针，推荐除了 IIF之外的检测ANCA的一种不同的技术如ELISA。然而，用于通过上述两阶段或多阶段确定某些抗体的技术包括单独标记的多个组分试验。为了成本效益血清学诊断，明确需要将一方面检测针对细胞和组织抗原性靶的抗体及另一方面检测针对其纯化的及特征性蛋白质的抗体组合单一方法中，使用一个标记。目前的通过微阵列技术鉴定蛋白质单独未提供满意的解决方案。随着单一微阵列上检测的抗原性靶的数目增加，对相关的制造设备、小型化及专门化的材料以及处理的需求使得这种微阵列的生产增加了复杂性和成本。其它技术，包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)、生色测定、高效液相层析(HPLC)、气相层析-质谱分析(GC-MS)以及薄层层析(TLC)，呈现出可以同时评估的抗原形式的分析物的数目受限的缺点。这些技术也是耗时及需要昂贵的设备。相反，应用进行ANA检测的HEp-2细胞底物提供了进行抗体鉴别的1200个以上的抗原性靶。发明概述鉴于现有技术领域中的技术难题，本发明提供了一种疾病诊断方法，这种方法使多步骤诊断缩减为一步式的诊断方法。这个问题通过独立权利要求书特征而解决。本发明优选的实施方案由所附权利要求书提供。本发明的目的因此是提供一种疾病诊断方法和系统，其检测与细胞和/或组织结合的抗体及同时检测与合成底物结合的抗体，如用特别纯化的天然和/或重组抗原包被的微粒，从而提供“一步式”的方法，以用于以较低(细胞或 组织特异性)和较高(抗原特异性)特异性同时检测与疾病相关的抗体。本发明还涉及实施本发明方法的装置和试剂盒。所述方法也适合于筛选方法，从而可以检测多个患者血清关于任何指定数目特异性抗原的的反应性。因此，本发明的一个目的是提供一种疾病诊断方法，包括同时检测与一或多种细胞底物结合的抗体及与一或多种合成底物结合的抗体，特征在于a)提供细胞底物与合成底物的混合物，b)将所述底物混合物与含有待检测的抗体的样品一起温育，c)使用荧光显微术检测和/或鉴别细胞底物和合成底物及与所述底物结合的抗体，及d)评估免疫荧光图像数据，优选使用自动化模式识别解释系统进行评估。细胞底物表示抗原结合的生物学底物，如哺乳动物细胞，从而可以应用不同组织类型或细胞的组合。组织底物，包括得自器官组织(organic tissue)的相似类型的多个细胞，在本发明方法中也可以用作“细胞底物”。在上述方法的一个优选实施方案中，所述细胞或组织底物可以是HEp-2细胞、人粒细胞和/或器官组织，优选胰腺组织。在一个优选实施方案中，合成底物是用纯化的天然抗原和/或重组抗原包被的微粒或珠。抗原可以是蛋白质、肽、核酸，如DNA，多分子细胞底物如着丝粒，蛋白质复合物或者蛋白质-膜结构，或者抗体可结合的任何其它细胞成分。所述合成底物是指作为特异性的或者特异性的纯化的和/或重组抗原的混合物的载体。各种物质和材料的微粒和珠载体为本领域已知，其适于本发明的方法，例如由天然或人工聚合物、琼脂糖、纤维素、玻璃或金属氧化物组成的微粒、颗粒或珠。在本发明的一个优选实施方案中，所述诊断方法特征在于包被合成底物的抗原由与疾病存在相关的抗体结合。包被合成底物的抗原根据其与已知疾病的关联性选择。与特异性抗原结合的抗体的鉴别因此使得除了 “低特异性”检测与细胞底物和/或组织底物结合的抗体之外，还可以“高特异性”诊断疾病。本发明的底物通过一或多个可区分的特征或参数而被检测和/或鉴别。在一个实施方案中，本发明的方法特征在于底物的光学、荧光和/或物理特征用于检测和/或鉴别所 述底物。例如，可以通过在显微镜分析期间的其大小、形状、荧光性质或者其它参数鉴别各种底物。对于不同底物也可以组合不同参数，由此来表示底物、抗原和/或抗体鉴别的一种编码。在本发明一个实施方案中，所述方法特征在于荧光团浓度如罗丹明浓度的荧光特征，和/或物理大小特征用于鉴别合成底物，其中所述珠或微粒的大小优选在1-100μπι之间，如 1、2、3、4、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、95 或者 100 μ m，或者任何相似值。可以组合不同大小的多个珠或微粒，其中每种大小的珠用不同抗原包被，由此多个抗原的阵列样方法可以与细胞底物同时使用。
在本发明优选的实施方案中，多色荧光显微术用于鉴别所述底物和/或结合的自身抗体，其中底物和/或结合的抗体呈现出不同的荧光颜色，优选蓝色、绿色和红色。在本发明的一个实施方案中，细胞底物用发蓝光(blue emission)的荧光染料例如DAPI染色，合成底物用发绿光(green emission)的荧光染料如罗丹明或FITC标记，和/或特异性结合的抗体通过用发红光(red emission)的突光染料标记的抗人免疫球蛋白特异性抗体如Cy5和/或别藻蓝蛋白(APC)检测。本发明的方法特别涉及其中抗体检测提供有效诊断的疾病或失调。在一个优选实施方案中，所述方法特征在于所述疾病是自身免疫或感染性疾病，优选系统性风湿病、自身免疫性肝病、I型糖尿病、莱姆病或者单纯疱疹病毒感染。尽管自身免疫疾病难以诊断，但是除了细胞底物上自身抗体的结合模式之外，鉴别自身抗体结合的一或多种特异性抗原使得可以在与之前已知的方法相比更短的时间内更精确地诊断。本发明使得诊断方法可以组合阵列与基于细胞的方法，这在目前从未认为是可能的。在本发明一个实施方案中，检测的抗体是抗核抗体(ANA)或者抗嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)。在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于HEp-2细胞用于分析抗核抗体(ANA)的染色。在本发明另外的实施方案中,所述方法特征在于表3、表4和/或表5所不ANA细胞染色模式、相应抗原及相关疾病用于疾病诊断。在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于人粒细胞用于分析抗嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的染色。在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于表I和/或表2中所示ANCA细胞染色模式、相应抗原及相关疾病用于疾病诊断。在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于抗嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)呈现出人粒细胞的核周染色(p-ANCA)或者斑点状胞质染色(cANCA)。在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于所述抗体靶向蛋白酶3 (PR3)或者髓过氧化物酶(MPO)蛋白或者其抗原。在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于所述抗体呈现出人粒细胞的斑点状胞质染色(cANCA)及结合蛋白酶3(PR3)，其中在合成底物上提供所述蛋白质或其抗原，由此提供韦格纳肉芽肿病(WG)的诊断。在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于所述抗体呈现出人粒细胞的核周染色(p-ANCA)并且结合髓过氧化物酶(MPO)，其中在合成底物上提供所述蛋白质或者其抗原，由此提供ANCA-相关脉管炎(AASV)的诊断。
在本发明另外的实施方案中，所述方法特征在于样品包括得自对象的血液、血清、脑脊液、滑液或唾液，其中所述对象被理解是怀疑具有使用本发明方法诊断的疾病或病症的患者。本发明还涵盖一种方法，其中解释系统由专门设计的软件控制，如已经揭示的特别用于本发明方法中的软件，其包含用于装置及自动聚焦控制、图像获取、图像分析和/或模式识别算法的模块。在一个实施方案中，本发明的方法特征在于所述解释系统被用于根据如下层级(hierarchy)来评估免疫突光图像i)阳性染色信号，ii)染色定位，优选通过将染色模式分为细胞底物或合成底物类别而进行，及
iii)确定细胞模式，优选对于粒细胞而言的核周和/或胞质模式；对于HEp-2细胞而言的有丝分裂细胞的核、胞质和/或染色质模式。这种层级便于快速及精确地分析获得的显微镜图像，因此可以基于免疫荧光数据内的多个参数进行诊断。在一个实施方案中，本发明的方法特征在于将染色模式分成细胞或合成底物类别以及细胞模式的确定是由对每个模式定义一组规则而通过免疫荧光图像的结构和纹理特征的组合而实现的。这种分类可以通过专门设计的软件进行，如已经开发特别用于本发明方法中的软件。本发明另一方面涉及根据权利要求任一项的方法同时检测与一或多种细胞底物及与一或多种合成底物结合的抗体的系统，其包含a)具有相机、机动扫描台和多通道发光二极管(LED)的荧光显微镜，及b)具有软件的计算机装置，所述软件包含用于装置和自动化聚焦控制、自动化图像获取、自动化图像分析及自动化模式识别算法的模块，其中分析三种颜色的通道，优选蓝色、绿色和红色。本发明的系统已经开发特别用于本发明的疾病诊断方法中。这种系统可包含与数据处理计算机如PC结合的荧光显微镜。本发明的一方面是根据权利要求1-21的方法同时检测和/或鉴别与一或多种细胞底物及一或多种合成底物结合的抗体的试剂盒，其包含a)具有与抗原包被的合成底物混合的固定的细胞底物的载玻片，其中所述细胞底物优选是HEp-2细胞和/或人粒细胞，并且所述合成底物根据其光学、荧光和/或物理特征而彼此不同，及b)具有与荧光标记(优选FITC、Cy5和/或APC)缀合的免疫球蛋白特异性抗体的缀合物，及任选存在的洗涤缓冲液、盖玻片、覆盖介质、未包被的合成底物(有或无荧光标记)，和/或合成底物的另外的荧光标记。本发明的试剂盒与本领域已知的标准相比是非常简便及经济的诊断方法。试剂盒玻片可含有具有多个表位的多个合成底物，尤其是组合基于阵列的方法及细胞底物方法，因此提供一种与本领域已知的任何诊断工具相比更完整及有效的诊断工具，其以经济上可行的简洁形式存在。发明详述本发明的方法使得可以诊断通常需要多个步骤进行诊断的疾病。评估在增加的特异性抗体结合的多个诊断步骤组合这个方法可以提供在一个诊断分析中更快速、更有效及更准确的诊断。这个方法特别涉及其中抗体检测提供有效诊断的疾病或失调，如感染性疾病和自身免疫疾病。所述方法使得可以不仅筛选与细胞或组织结合的抗体的存在和模式，也可以提供关于所述抗体针对的各个抗原的更明确的信息。这样便于在一个步骤的方法中诊断特定疾病。术语诊断是指通过评估患者的特征鉴别和/或确定疾病的性质和原因。本发明提供了一种诊断方法，当实施该方法时 提供了患者中也许存在某一特定疾病或一些疾病的指征。例如，多种自身免疫疾病可存在于一个对象体内，由此本发明的方法鉴别一种疾病而不除外其它疾病的存在，例如使用本发明的方法可以同时或单独检测或诊断多种疾病。本发明的方法特别适于诊断系统性风湿性炎症疾病，如自身免疫性系统性脉管炎。这种疾病与粒细胞(ANCA)内抗原的抗体相关，如显微镜下多脉管炎(MPA)，与髓过氧化物酶(MPO)及韦格纳肉芽肿病(WG)的抗体相关，与蛋白酶3 (PR3)的抗体相关，可以使用本发明的方法诊断。例如当与双链DNA的抗体相关联时，可以诊断系统性红斑狼疮。例如当与HEp-2细胞内的抗原如tRNA合成酶的抗体相关联时，使用本发明的方法也可以诊断多肌炎。例如当与HEp-2细胞内抗原的抗体相关联时，使用本发明的方法也可以诊断自身免疫性肝病。也可以诊断与原纤蛋白(fibrillic)肌动蛋白-无唾液酸糖蛋白受体或者肝细胞内其它抗原的抗体相关的病症。表I列出了相关抗嗜中性粒细胞胞质抗体的类型和在粒细胞中的相关细胞模式。表I提供了抗体、染色模式及其相关的临床相关性的实例。这个表不限制本发明的范围。表I
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权利要求
1.用于疾病诊断的方法，包括同时检测与一或多种细胞底物以及一或多种合成底物结合的抗体，特征在于 a)提供细胞底物与合成底物的混合物， b)将所述底物混合物与含有待检测抗体的样品一起温育， c)使用荧光显微术检测和/或鉴别细胞底物与合成底物以及与所述底物结合的抗体， d)评估免疫荧光图像数据，优选使用自动化模式识别解释系统来进行。
2.权利要求I的方法，特征在于所述细胞底物是HEp-2细胞、人粒细胞和/或器官组织，优选胰腺组织。
3.权利要求I或2的方法，特征在于所述合成底物是用纯化的天然抗原和/或重组抗原包被的微粒。
4.前述任一项权利要求的方法，特征在于所述合成底物的抗原包被跟与疾病存在相关的抗体结合。
5.前述任一项权利要求的方法，特征在于所述底物的光学、荧光和/或物理特性被用于鉴别所述底物。
6.前述权利要求的方法，特征在于荧光团浓度如罗丹明浓度的荧光特性和/或大小的物理特性被用于鉴别合成底物，其中所述微粒大小优选在1-100 μ m之间。
7.前述任一项权利要求的方法，特征在于多色荧光显微术被用于鉴别所述底物和/或结合的自身抗体，其中底物和/或结合的抗体呈现出不同的荧光颜色，优选蓝色、绿色和红色。
8.前述任一项权利要求的方法，特征在于所述细胞底物用发蓝光的荧光染料例如DAPI标记，合成底物用发绿光的荧光染料例如罗丹明或FITC标记，和/或通过用发红光的荧光染料例如Cy5和/或别藻蓝蛋白(APC)标记的抗人免疫球蛋白特异性抗体来检测特异性结合的抗体。
9.前述任一项权利要求的方法，特征在于所述疾病是自身免疫或感染性病症，优选全身风湿性病、自身免疫性肝病、I型糖尿病、莱姆病或者单纯疱疹病毒。
10.前述任一项权利要求的方法，特征在于待检测的抗体是抗核抗体(ANA)或者抗嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)。
11.前述任一项权利要求的方法，特征在于使用HEp-2细胞来分析抗核抗体(AM)的染色。
12.前述权利要求的方法，特征在于表3、表4和/或表5中示出的ANA细胞染色模式、相应抗原和相关疾病被用于疾病诊断。
13.权利要求10的方法，特征在于人粒细胞用于分析抗嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的染色。
14.前述权利要求的方法，特征在于表I和/或表2中示出的ANCA细胞染色模式、相应抗原及相关疾病被用于疾病诊断。
15.权利要求13或14任一项的方法，特征在于所述抗嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)呈现出人粒细胞的核周染色(PANCA)或者斑点状胞质染色(cANCA)。
16.前述权利要求的方法，特征在于所述抗体靶向于蛋白酶3(PR3)或髓过氧化物酶(MPO)蛋白，或者其抗原。
17.前述权利要求的方法，特征在于所述抗体呈现出人粒细胞的斑点状胞质染色(cANCA)并且结合蛋白酶3 (PR3)，其中蛋白酶3蛋白或其抗原在合成底物上提供，由此提供对韦格纳肉芽肿病(WG)的诊断。
18.权利要求13-16任一项的方法，特征在于所述抗体呈现出人粒细胞的核周染色(pANCA)并且结合髓过氧化物酶(MPO)，其中所述髓过氧化物酶或其抗原在合成底物上提供，由此提供对ANCA-相关脉管炎(AASV)的诊断。
19.前述任一项权利要求的方法，特征在于所述样品包含得自对象的血液、血清、脑脊液、滑液或唾液。
20.前述任一项权利要求的方法，特征在于所述解释系统由专门设计的软件控制，包括用于装置和自动聚焦控制、图像获取、图像分析和/或模式识别算法的模块。
21.前述任一项权利要求的方法，特征在于所述解释系统被用于根据如下层级来评估免疫荧光图像数据 i)阳性染色信号， )染色的定位，优选通过将染色模式分为细胞底物或合成底物的类别而进行，及 iii)确定细胞模式，优选对于粒细胞而言的核周和/或胞质模式；对于HEp-2细胞而言的有丝分裂细胞的核、胞质和/或染色质模式。
22.前述任一项权利要求的方法，特征在于将染色模式分成细胞或合成底物类别以及细胞模式的确定是由对每个模式定义一组规则而通过免疫荧光图像的结构和纹理特征的组合而实现的。
23.用于根据前述任一项权利要求的方法而同时检测与一或多种细胞底物以及一或多种合成底物结合的抗体的系统，其包含 a)具有相机、机动扫描台和多通道发光二极管(LED)的荧光显微镜，及 b)具有软件的计算装置，所述软件包含用于装置和自动化聚焦控制、自动化图像获取、自动化图像分析及自动化模式识别算法的模块，其中分析三种颜色的通道，优选蓝色、绿色和红色。
24.用于根据权利要求1-21的方法同时检测与一或多种细胞底物及一或多种合成底物结合的抗体的试剂盒，其包含 a)具有与抗原包被的合成底物混合的固定的细胞底物的载玻片，其中所述细胞底物优选是HEp-2细胞和/或人粒细胞，并且所述合成底物根据其光学、荧光和/或物理特性而彼此不同， b)具有与荧光标记缀合的免疫球蛋白特异性抗体的缀合物，其中所述荧光标记优选FITC、Cy5 和 / 或 APC, 以及任选存在的 c)洗涤缓冲液、盖玻片、覆盖介质、有或无荧光标记的未包被的合成底物，和/或用于合成底物的另外的荧光标记。
全文摘要
本发明涉及用于疾病诊断的方法和系统，其同时检测与细胞底物和/或组织底物结合的抗体及与合成底物结合的抗体，诸如用特异性抗原包被的微粒或珠，从而提供“一步式”的方法以便以低特异性(细胞和/或组织)和高特异性(抗原)来同时检测和鉴定疾病相关的抗体。
文档编号G01N33/564GK102667483SQ201180005049
公开日2012年9月12日 申请日期2011年2月22日 优先权日2010年2月22日
发明者B·拉道, D·罗根布克, I·克尼特 申请人:Medipan有限公司