专利名称：一种藤黄健骨丸的检测方法
技术领域：
本发明涉及药品检测技术领域，具体涉及一种抗骨质增生中药制剂藤黄健骨丸的检测方法。
背景技术：
藤黄健骨丸是由熟地黄750g、肉苁蓉500g、淫羊藿500g、鹿衔草500g、烫骨碎补 500g、鸡血藤500g、炒莱菔子250g七味药物组成，其主要功效为补肾、活血、止痛。主要用于肥大性脊椎炎、颈椎病、跟骨刺、增生性关节炎、大骨节病，临床疗效显著。方中重用熟地取其补肾中之阳，为君药；配以淫羊藿兴肾中之阳，肉苁蓉的入肾充髓，骨碎补、鹿衔草的补骨镇痛，四味药均为臣药；佐以鸡血藤在补肾益精填髓的基础上，再通畅经路，行气活血，不仅可增强健骨舒筋的作用，而且可收到“通则不痛”的功效，本方中还用菜菔子健骨消食理气， 以防补而滋赋之憋。配伍严密合理，以补肾为本，治肾为标，标本兼治。其制备工艺为将鹿衔草、淫羊藿粉碎成细粉，其余熟地黄等五味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次I小时， 合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，与上述粉末混匀，干燥，粉碎，过筛，每IOOg粉末加炼蜜 80 IOOg制成浓缩蜜丸，即得。
藤黄健骨丸现行检测方法收载于部颁标准中药成方制剂第二十册，标准中仅对熟地黄、淫羊藿及鹿衔草作了定性鉴别，不能充分体现该产品的内在质量。
发明内容
本发明提供一种藤黄健骨丸的检测方法，根据本制剂的组分特点，增加了肉丛蓉、 骨碎补的薄层色谱鉴别，同时对原熟地黄、淫羊藿以及鹿衔草薄层色谱鉴别进行了方法的改进，又增加了主药淫羊藿及贵重药材肉丛蓉有效成分的检测方法，以达到快速、准确、全面适应于工业化生产的藤黄健骨丸检测方法。本发明采取的技术方案包括
I)鉴别
(1)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流 30 60分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯I : I或石油醚60 90°C-乙酸乙酯I : I 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4_ 二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；
(2)淫羊藿的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理30 60分钟，3000 转/分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2 5 y 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水5 8 : 2 3 : 0.25为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105°C烘8 10分钟，置365nm紫外光灯下检视， 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)鹿衔草的薄层鉴别取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷 40ml,回流提取30 60分钟,放冷,滤过,分取三氯甲烧液蒸干,残洛加甲醇ImL使溶解,作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2 5iU，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5 : 2 4 : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；
(4)骨碎补的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流I小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2 5 iil，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水6 10 4 0. I或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水7 :3 :1 : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)肉苁蓉的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取30 60分钟，离心10 分钟，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各I 2 yl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水3 5 :0. 5 :8 4为展开剂,展开,取出，晾干,置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
2)含量测定
(I)肉丛蓉的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1% 醋酸8 10:10 8:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000 ；
照品溶液的制备取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取5. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W， 频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液 10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、151111，合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到IOml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即
得;
(2)淫羊藿的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 05%磷酸25 30:75 70为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于 3000 ；
对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含40 y g的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取2. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷， 再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明的优点在于专属性强，无论是薄层色谱定性鉴别还是高效液相色谱含量限定，都具有较强的专属性，熟地黄与淫羊藿的薄层鉴别分别在原检测方法的基础上，对其鉴别方法进行了改进.，经方法学验证，具备专属性特性，鹿衔草原有的色谱鉴别由于对照药材出现的斑点多且杂乱不清，不能正确判定结果。所以对该项鉴别进行了全面改进，改进后的薄层色谱鉴别，斑点清晰，易于结果判断，且经方法学验证具备其专属性。肉丛蓉、骨碎补为新增薄层鉴别，经方法学验证，都具备其独有的专属性。新增两项含量测定方法均采用高效液相色谱法，此方法精密度和准确度高于重量法、紫外分光光法和比色法，经含量方法学验证，专属性较强，同时为工业化生产产品质量监控提供了一种科学、准确的检测方法。
具体实施例方式
实施例I藤黄健骨丸制备
将熟地黄750g、鹿衔草500g、烫骨碎补500g、肉苁蓉500g、淫羊藿500g、鸡血藤 500g、炒莱菔子250g七味药材，鹿衔草、淫羊藿粉碎成细粉，其余熟地黄等五味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次I小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，与上述粉末混匀，干燥， 粉碎，过筛，每IOOg粉末加炼蜜80 IOOg制成大蜜丸，即得，每丸重3. 5g。 实施例2
I)鉴别
(1)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流30 分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯I : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；
(2)淫羊藿的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理30分钟，3000转/ 分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂 30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典 2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水5 3 0.25为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以三氯化铝乙醇试液，于105°C烘8分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)鹿衔草的薄层鉴别取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷 40ml，回流提取30分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典 2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2 u 1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5 2 I为展开齐[|，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；
(4)骨碎补的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流I小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2 u 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水6 4 0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)肉苁蓉的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取30分钟，离心10分钟， 水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml， 合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各I yl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水3 :0.5 :8为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
2)含量测定
(I)肉丛蓉的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1% 醋酸8:10:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000 ；
照品溶液的制备取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取5. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W， 频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液 10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、151111，合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到IOml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即
得;
本品每丸含肉丛蓉以松果菊苷(C35H46O2tl)计,不得少于I. Omg ；
(2)淫羊藿的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 05%磷酸25:75为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000 ；
对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含40 yg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取2. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷， 再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每丸含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4tlO15)计，不得少于2. Omg0实施例3
I)鉴别
(1)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流45 分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯I : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；
(2)淫羊藿的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理45分钟，3000转/ 分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂 30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典 2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各3.5 yl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水7 2.5 0.25为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105°C烘9分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)鹿衔草的薄层鉴别取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷 40ml，回流提取30分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典 2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各3.5 yl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5 3 I为展开齐[|，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；
(4)骨碎补的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流I小时，放冷， 滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液 ’另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、 中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各3. 5 yl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水8 4 0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)肉苁蓉的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取45分钟，离心10分钟， 水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml， 合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各I. 5 yl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水4 :0. 5 6为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
2)含量测定
(1)肉丛蓉的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1% 醋酸9:9:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000 ； 照品溶液的制备取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取5. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W， 频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液 10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、151111，合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到IOml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即
得;
本品每丸含肉丛蓉以松果菊苷(C35H46O2tl)计,不得少于I. Omg ；
(2)淫羊藿的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 05%磷酸27:73为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000 ；
对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含40 yg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取2. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷， 再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每丸含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4tlO15)计，不得少于2. Omgo
实施例4
1)鉴别
(1)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流60 分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯I : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；
(2)淫羊藿的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理60分钟，3000转/ 分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂 30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典 2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各5iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水8 2 0.25为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以三氯化铝乙醇试液，于105°C烘10分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)鹿衔草的薄层鉴别取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷 40ml，回流提取60分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典 2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各5 u 1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5 4 I为展开齐[|，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；
(4)骨碎补的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流I小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各5 u 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水10 4 0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液， 热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的突光斑点；
(5)肉苁蓉的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取60分钟，离心10分钟， 水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml， 合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各2 u 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水5 :0.5 :4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
2)含量测定(1)肉丛蓉的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1% 醋酸10: 8:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于 3000 ；
照品溶液的制备取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取5. Og,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W， 频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液 10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、151111，合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到IOml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即
得;
本品每丸含肉丛蓉以松果菊苷(C35H46O2tl)计,不得少于I. Omg ；
(2)淫羊藿的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 05%磷酸30: 70为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含40 yg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取2. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷， 再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每丸含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4tlO15)计，不得少于2. Omg0实施例5 I)鉴别
(I)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流30 分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚60°C-乙酸乙酯I : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2， 4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑占.
其余同实施例I。实施例6
I)鉴别
(I)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流45分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚75°C-乙酸乙酯I : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2， 4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑占.
其余同实施例2。实施例7
I)鉴别
(I)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流60 分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚90°C-乙酸乙酯I : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2， 4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑
其余同实施例3。实施例8
骨碎补的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流I小时，放冷，滤过， 滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2 5 y 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水7 :3 1 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点；
其余同实施例I。
权利要求
1.一种藤黄健骨丸的检测方法，其中所述的药物配方是由熟地黄750g、鹿衔草500g、 骨碎补(烫)500g、肉苁蓉500g、淫羊藿500g、鸡血藤500g、莱菔子(炒)250g，制成的浓缩蜜丸，其特征在于包括下列步骤I)鉴别(1)熟地黄的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml，加热回流 30 60分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯I : I或石油醚60 90°C-乙酸乙酯I : I 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4_ 二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；(2)淫羊藿的薄层鉴别取本品I丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理30 60分钟，3000 转/分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2 5 y 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水5 8 : 2 3 : 0.25为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105°C烘8 10分钟，置365nm紫外光灯下检视， 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(3)鹿衔草的薄层鉴别取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷 40ml,回流提取30 60分钟,放冷,滤过,分取三氯甲烧液蒸干,残洛加甲醇ImL使溶解,作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2 5iU，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5 : 2 4 : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；(4)骨碎补的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流I小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2 5 ii 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水6 10 4 0. I或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水7 :3 :1 : I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(5)肉苁蓉的薄层鉴别取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取30 60分钟，离心10 分钟，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010 年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各I 2 yl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水3 5 :0. 5 :8 4为展开剂,展开,取出，晾干,置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；2)含量测定(1)肉丛蓉的含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1% 醋酸8 10:10 8:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000 ；照品溶液的制备取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得；供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取5. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W， 频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液 10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、151111，合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到IOml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得;(2)淫羊藿的含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 05%磷酸25 30:75 70为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于 3000 ；对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含40 yg的溶液，即得；供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取2. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷， 再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得。
全文摘要
本发明涉及一种藤黄健骨丸的检测方法，属于药品检测领域。包括熟地黄、淫羊藿、鹿衔草、肉丛蓉和烫骨碎补的鉴别方法，并且用高效液相色谱法测定所述药物的肉丛蓉和淫羊藿的含量；所述藤黄健骨丸是由熟地黄750g、肉苁蓉500g、淫羊藿500g、鹿衔草500g、烫骨碎补500g、鸡血藤500g、炒莱菔子250g七味药物制成的丸剂。本发明的优点无论是薄层色谱定性鉴别还是高效液相色谱含量限定，都具有较强的专属性，同时为工业化生产产品质量监控提供了一种科学、准确的检测方法。
文档编号G01N30/02GK102608249SQ201210056338
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月6日 优先权日2012年3月6日
发明者曹晓平, 王士青, 王春红 申请人:长春人民药业集团有限公司