专利名称：六味木香制剂的检测方法
技术领域：
本发明涉及ー种药物组合物制剂的检测方法，尤其涉及一种六味木香制剂的检测方法，属于中药检测技术领域。
背景技术：
六味木香丸为藏药，收载于《卫生部药品标准》藏药分册中，标准编号为WS3-BC-0283-95。该标准记载内容主要包括处方木香200g、巴夏嘎360g、余甘子500g、豆蘧80g、石槽子400g、荜发100g。制法以上六味，粉碎成细粉，过筛，混匀，用水泛丸，干燥，即得。性状本品为棕褐色水丸；具木香特异香气，味酸苦。鉴别取本品2g，加こ酸こ酯20ml，于60 80°C水浴回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液；另取木香、石榴子对照药材各O. 5g，同法制成对照药材溶液；再取胡椒碱对照品，精密称定，加甲醇制成每ml含胡椒碱Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录57页)试验，吸取上述四种溶液各10 μ 1，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-こ酸こ酯(6 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同顔色的荧光斑点。喷以5%香草醛浓硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同顔色的斑点。检查应符合丸剂项下有关的各项規定。功能与主治止吐，止疼。用干“培根木布”引起的疼痛，嗳气，腹胀，呕吐等。用法与用量一次5 6丸,一日3次。规格每10丸重6. 5g。贮藏密闭，置阴凉干燥处。木香收载于《中国药典》2010年版一部，第57页，本品为菊科植物木香Aucklandia lappa decene.的干燥根。秋、冬ニ季采挖,除去泥沙和须根,切段,大的再中剖成瓣，干燥后撞去粗皮。巴夏嘎为S粟科植物小花黄堇Corydalis racemosa(Thunb. )Pers的干燥地上部分，盛花期米收地上部分，晾干或切段晾干备用。余甘子收载于《中国药典》2010年版一部，第167页，本品系藏族习用药材，为大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实。冬季至次春果实成熟时采收，除去杂质，干燥。豆蘧收载于《中国药典》2010年版一部,第156页,本品为姜科植物白豆蘧Amomumkravanh Pierre ex Gagnep.或爪睡 H丑蘧 Amomumcompactun Soland ex Maton 的十す栄成熟果实。按产地不同分为“原豆蓮”和“印尼豆蓮”。荜茇收载于《中国药典》2010年版一部，第219页，本品为胡椒科植物荜茇Piper longum L.的干燥近成熟或成熟果穗。果穗由绿变黑时采收，除去杂质，晒干。石榴子收载于中华人民共和国卫生部藏药部颁标准第一册第26页(标准编号WS3-BC-0026-95)。本品为安石槽科植物安石槽Punicagranatum L.的干燥种子。秋季果实成熟后除去果皮，晒干。由上述内容可见，原部颁标准中对木香、石榴子、荜茇的薄层鉴别均采用统ー的提取方法和展开剂条件进行，实践中经过多次的薄层鉴别试验发现，木香仍有阴性干扰、石榴子的Rf值偏高、荜茇供试品溶液无任何斑点，标准的重复性和专属性较差，无法实现对六味木香丸质量标准检测方法的可控性。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种六味木香制剂的检测方法，该检测方法改进了原部颁标准中木香、石榴子、荜茇的提取方法和展开剂，改进后的检测方法与原标准相比，重复性和专属性较强，符合简便、快速的原则；建立了六味木香制剂中余甘子的专属性薄层鉴别方法。 在本发明优选的实施方式中，进ー步建立了六味木香制剂中木香所含木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量測定方法，以便提供一种重现性好、专属性强，符合准确、简便、灵敏、快速的原则，可以有效的控制产品的质量，使其质量稳定、安全可控。针对上述目的，本发明的技术方案如下一种六味木香制剂的检测方法，所述六味木香制剂包含木香、巴夏嘎、余甘子、豆蓮、石榴子和荜茇六种药材成分；其特征在干，该方法通过薄层色谱法鉴别所述六味木香制剂中的木香、石榴子、余甘子和/或荜茇；其中(A)所述木香和石榴子的鉴别包括以下步骤(I)取所述六味木香制剂，加入こ酸こ酷，超声提取，将所得提取液浓缩后作为木香、石榴子供试品溶液；(2)将上步所得木香、石榴子供试品溶液点样于硅胶薄层板，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯为展开剂展开进行鉴别；和/或(B)所述余甘子和荜茇的鉴别包括以下步骤(I’ )取所述六味木香制剂，加入こ醇，超声提取，将所得提取液浓缩后作为余甘子、荜茇供试品溶液；(2’ )将上步所得余甘子、荜茇供试品溶液点样于硅胶薄层板，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸为展开剂展开进行鉴别。优选地，所述步骤(I)中还包括取木香、石榴子对照药材，按照所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法分别制成木香、石榴子对照药材溶液；步骤(2)中还包括将木香、石榴子对照药材溶液点样于硅胶薄层板，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯为展开剂展开；和/或所述步骤(Γ )中还包括取余甘子对照药材，加入こ醇，超声提取，将所得提取液浓缩后作为余甘子对照药材溶液；取胡椒碱对照品，加甲醇制成胡椒碱的甲醇溶液，作为胡椒碱对照品溶液；步骤(2’)中还包括将余甘子对照药材溶液、胡椒碱对照品溶液点样于硅胶薄层板，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸为展开剂展开。优选地，所述步骤⑴中还包括按处方比例及制备エ艺，分别配制不含木香、石榴子的阴性样品，并照所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法制成木香、石榴子阴性样品溶液；步骤(2)中还包括将木香、石榴子阴性样品溶液点样于硅胶薄层板，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯为展开剂展开；和/或所述步骤(Γ )中还包括按处方比例及制备エ艺，分别配制不含余甘子、荜茇的阴性样品，并照所述余甘子、荜茇供试品溶液的配制方法制成余甘子、荜茇阴性样品溶液；步骤(2’ )中还包括将余甘子、荜茇阴性样品溶液点样于硅胶薄层板，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸为展开剂展开。优选地，所述步骤⑴为取六味木香制剂O. 5 5重量份，研细后，加こ酸こ酯5 40体积份,超声处理10 60分钟,滤过,滤液浓缩至O. 5 5体积份,作为木香、石槽子供试品溶液；另取木香、石榴子对照药材各O. I 3重量份，按照所述木香、石榴子供试品溶液的制备方法分别制成木香、石榴子对照药材溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香、石榴子的阴性样品，并按所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法制成木香、石榴子阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计。优选地，所述步骤(I)为取六味木香制剂2重量份，研细后，加こ酸こ酯20体积 份，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2体积份，作为木香、石榴子供试品溶液；另取木香、石榴子对照药材各O. 5重量份，按照所述木香、石榴子供试品溶液的制备方法分别制成木香、石榴子对照药材溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香、石榴子的阴性样品，并按所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法制成木香、石榴子阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计。优选地，所述步骤(2)为照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取步骤(I)中制得的样品溶液，将其分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，风吹至斑点显色清晰。优选地，所述吸取的样品溶液中的供试品溶液和阴性样品溶液均为5 20 μ I、对照药材溶液为I 10 μ 1，优选所述吸取的样品溶液中的供试品溶液和阴性样品溶液均为10μ I、对照药材溶液为5μ I ;所述展开剂环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯的体积比为8 22 : 3 8 : O. I 1，优选体积比为15 5 O. 5 ;所述薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，优选饱和20分钟；所述香草醛硫酸溶液重量体积百分比为5% (称取5重量份香草醛，加100体积份硫酸，搅拌均匀即得。重量份/体积份=g/ml)，用热风吹至斑点显色清晰。优选地，所述步骤(I，)为:取六味木香制剂O. 5 5重量份，研细后，加こ醇5 40体积份，超声处理10 60分钟，滤过，滤液浓缩至O. 5 5体积份，作为余甘子、荜茇供试品溶液；另取余甘子对照药材O. I 3重量份，按照所述余甘子、荜茇供试品溶液的制备方法制成余甘子对照药材溶液；再取胡椒碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含胡椒碱O. 5 3mg的溶液，作为胡椒碱对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含余甘子、荜茇的阴性样品，并按所述余甘子、荜茇供试品溶液的配制方法制成余甘子、荜茇阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量吋，体积份以mL计。优选地，所述步骤(Γ )为取六味木香制剂2重量份，研细后，加こ醇20体积份，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2体积份，作为余甘子、荜茇供试品溶液；另取余甘子对照药材O. 5重量份，按照所述余甘子、荜茇供试品溶液的制备方法制成余甘子对照药材溶液；再取胡椒碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含胡椒碱Img的溶液，作为胡椒碱对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含余甘子、荜茇的阴性样品，并按所述余甘子、荜茇供试品溶液的配制方法制成余甘子、荜茇阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以HiL计。优选地，所述步骤(2’ )为照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取步骤(Γ)中制得的样品溶液，将其分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸为展开剂，薄层板置展开缸中饱和，展开，取出，晾干，于254nm紫外光灯下检视。 优选地，所述吸取的样品溶液均为5 20 μ 1，优选均为10 μ I ;所述石油醚_こ酸こ酷-甲酸的体积比为I 10 : 2 6 : O. 05 O. 5，优选体积比为6 4 O. 25，所述石油醚的沸程为60 90°C ;所述薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，优选饱和20分钟。优选地，所述检测方法进ー步包括用高效液相色谱法测定所述六味木香制剂中木香所含木香烃内酯和/或去氢木香内酯的含量，其中所述高效液相色谱法測定的步骤包括(I”)制备木香供试品溶液，以及木香烃内酯和/或去氢木香内酯对照品溶液；(2”)将上步所得木香供试品溶液，以及木香烃内酯和/或去氢木香内酯对照品溶液注入液相色谱仪进行測定。优选地，所述步骤(I”)中还包括制备木香阴性样品溶液；所述步骤(2”)中还包括将木香阴性样品溶液注入液相色谱仪进行測定。优选地，所述高效液相色谱法測定的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为60 70 30 40的こ腈-水为流动相；检测波长为225±2nm ;柱温20 40°C，理论板数按木香烃内酯峰计算不低于3000。优选地，所述高效液相色谱法測定的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为65 35的こ腈-水为流动相；检测波长为225nm ;柱温25°C，理论板数按木香烃内酯峰计算不低于3000。优选地，所述步骤(I”)为取六味木香制剂O. I 3重量份，研细后，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 50体积份，称定重量，在功率250W，频率40kHz下超声处理15 45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为木香供试品溶液；另外精密称取木香烃内酯对照品和去氢木香内酯对照品适量，加甲醇制成每Iml含木香烃内酯20 140 μ g和去氢木香内酯40 200 μ g的混合溶液，作为木香烃内酯和去氢木香内酯混合对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香的阴性样品，并按所述木香供试品溶液的配制方法制成木香阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计。优选地，所述步骤(I”)为取六味木香制剂I重量份，研细后，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25体积份，称定重量，在功率250W，频率40kHz下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为木香供试品溶液；另外精密称取木香烃内酯对照品与和去氢木香内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含木香烃内酯40 μ g和去氢木香内酯60 μ g的混合溶液，作为木香烃内酯和去氢木香内酯混合对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香的阴性样品，并按所述木香供试品溶液的配制方法制成木香阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量吋，体积份以mL计。优选地，所述步骤(2” )为分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各5 20 μ 1，优选各10 μ 1，注入液相色谱仪，測定，即得。优选地，所述六味木香制剂的原料药组成包括木香200重量份、巴夏嘎360重量份、余甘子500重量份、丑蘧80重量份、石槽子400重量份和荜发100重量份。优选地，所述六味木香制剂的制备方法为将所述原料药粉碎成细粉，过筛，混匀，加水适量制丸，即得丸剂；或将所述原料药粉碎成细粉，过筛，混匀，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的ロ服制剂颗粒剂、丸剤、胶囊剂、片剂或散剤。优选地，所述六味木香制剂为颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂或散剂。该藏药六味木香制剂具有和胃，止痛，止吐作用。用于治疗“培根木布”(相当于胃炎，消化道溃疡)引起的上腹部剧痛，恶心呕吐，嗳气等。本发明的检测方法对处方中木香、石榴子、余甘子和荜茇进行了薄层鉴别研究。本发明进ー步建立了木香所含木香烃内酯和去氢木香内酯高效液相色谱法含量测定方法。本发明的检测方法具有重现性、稳定性好、操作方法简便、精密度高、专属性强、斑点显色清晰、分离度好等优点；通过建立方法可靠，专属性强的质量检测方法，能够有效控制六味木香制剂的质量，使六味木香制剂的质量达到稳定、安全可控。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图I为部颁标准鉴别方法鉴别木香、石榴子、荜茇的薄层色谱图；图中1-3为供试品，4为木香对照药材，5为木香阴性样品，6石榴子对照药材，7为石榴子阴性样品，8为胡椒碱对照品，9为荜茇阴性样品。图2为本发明所述的木香、石榴子的薄层色谱图；图中1-3为供试品，4-5为木香对照药材，6为木香阴性样品，7-9为供试品，10-11为石榴子对照药材，12为石榴子阴性样
品O图3为本发明所述的余甘子、荜茇的薄层色谱图；图中1-4为供试品，5为余甘子对照药材，6为余甘子阴性样品，7-10为供试品，11为胡椒碱对照品，12为荜茇阴性样品。图4为本发明所述的木香所含木香烃内酯和去氢木香内酯的色谱图；其中色谱图A为木香烃内酯和去氢木香内酯对照品；色谱图B为木香供试品；色谱图C为木香阴性样
品O图5为本发明所述木香烃内酯的峰面积与对照品浓度的线性关系图。图6为本发明所述木香烃内酯的峰面积与对照品浓度的线性关系图。
具体实施例方式下述实验例和实施例只是用于说明本发明而不是限制本发明。除非另外说明，本发明实施例中所用的展开剂和流动相的比值均为体积比。
_5] 实验例I :木香、石榴子、荜茇的薄层鉴别I. I按照部颁标准鉴别方法鉴别木香、石榴子和荜茇供试品溶液的制备取所述六味木香制剂2g，加こ酸こ酯20ml，于60 80°C水浴回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液；对照药材溶液的制备取木香、石槽子对照药材各O. 5g,同法制成对照药材溶液；对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含胡椒碱Img的溶液，作为对照品溶液；木香阴性样品溶液的制备按处方比例，配制不含木香的阴性样品，并照上述供试品溶液的制备方法制成木香阴性样品溶液；石榴子阴性样品溶液的制备按处方比例，配制不含石榴子的阴性样品，并照上述供试品溶液的制备方法制成石榴子阴性样品溶液；荜茇阴性样品溶液的制备按处方比例，配制不含荜茇的阴性样品，并照上述供试 品溶液的制备方法制成荜茇阴性样品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述六种溶液各10 μ I,点于同一娃胶G薄层板上，以环己烧-こ酸こ酯(6 : 2)为展开剂,展开,取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同顔色的荧光斑点。喷以重量体积百分比为5% (称取5重量份香草醛，加100体积份硫酸，搅拌均匀即得。重量份/体积份=g/ml)香草醛浓硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同顔色的斑点。结果见附图I所示木香的阴性有干扰；石榴子的Rf值太大；荜茇供试品溶液中在与对照品色谱相应的位置上无斑点，重复几次结果仍然不理想，故在此检测方法中只将木香和石榴子采用了统一方法，并对提取方法和展开剂进行了改进和完善，荜茇另外进行了薄层鉴别。I. 2本发明鉴别木香、石榴子的薄层色谱筛选试验(I)仪器乳鉢、量筒、圆底烧瓶、回流装置、蒸发皿、点样器、层析缸、喷雾瓶、分析天平(梅特勒托利多、型号XS205)、超声波提取器(上海科导超声仪器有限公司、型号SK8200HP)、娃胶G薄层板(青岛海洋化工厂、规格200 X 200mm)。(2)对照药材木香对照药材(批号120921-200506)、石榴子对照药材(批号121431-200501)，均购自中国药品生物制品检定所。(3)试剂こ酸こ酷、ニ氯甲烷、こ醇、甲醇、浓硫酸、香草醛、苯、甲酸こ酷、甲酸、环己烷、蒸馏水。(4)检验方法提取溶剂的选择分别采用こ醇、こ酸こ酷、甲醇为提取溶剂；提取方法的选择分别采用超声提取和回流提取；展开剂的选择分别采用环己烷-こ酸こ酯(6 2)、苯-こ酸こ酯(19 I)、环己烷-甲酸こ酷-甲酸(15 5 I)、环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯(15 :5:0.5)为展开剂。分别选择以上提取溶剂、提取方法和展开剂进行试验，结果如下
权利要求
1.一种六味木香制剂的检测方法，所述六味木香制剂包含木香、巴夏嘎、余甘子、豆蓮、石榴子和荜茇六种药材成分；其特征在干，该方法通过薄层色谱法鉴别所述六味木香制剂中的木香、石榴子、余甘子和/或荜茇；其中 (A)所述木香和石榴子的鉴别包括以下步骤 (1)取所述六味木香制剂，加入こ酸こ酷，超声提取，将所得提取液浓缩后作为木香、石榴子供试品溶液； (2)将上步所得木香、石榴子供试品溶液点样于硅胶薄层板，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯为展开剂展开进行鉴别；和/或 (B)所述余甘子和荜茇的鉴别包括以下步骤 (Γ )取所述六味木香制剂，加入こ醇，超声提取，将所得提取液浓缩后作为余甘子、荜茇供试品溶液； (2’)将上步所得余甘子、荜茇供试品溶液点样于硅胶薄层板，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸为展开剂展开进行鉴别。
2.根据权利要求I所述的检测方法，其中 所述步骤(I)中还包括取木香、石榴子对照药材，按照所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法分别制成木香、石榴子对照药材溶液；步骤(2)中还包括将木香、石榴子对照药材溶液点样于硅胶薄层板，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯为展开剂展开；和/或 所述步骤(Γ )中还包括取余甘子对照药材，加入こ醇，超声提取，将所得提取液浓缩后作为余甘子对照药材溶液；取胡椒碱对照品，加甲醇制成胡椒碱的甲醇溶液，作为胡椒碱对照品溶液；步骤(2’)中还包括将余甘子对照药材溶液、胡椒碱对照品溶液点样于硅胶薄层板，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸为展开剂展开。
3.根据权利要求I或2所述的检测方法，其中 所述步骤(I)中还包括按处方比例及制备エ艺，分别配制不含木香、石榴子的阴性样品，并照所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法制成木香、石榴子阴性样品溶液；步骤(2)中还包括将木香、石榴子阴性样品溶液点样于硅胶薄层板，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酷为展开剂展开；和/或 所述步骤(Γ )中还包括按处方比例及制备エ艺，分别配制不含余甘子、荜茇的阴性样品，并照所述余甘子、荜茇供试品溶液的配制方法制成余甘子、荜茇阴性样品溶液；步骤(2’ )中还包括将余甘子、荜茇阴性样品溶液点样于硅胶薄层板，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸为展开剂展开。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其中 所述步骤(I)为取六味木香制剂0.5 5重量份，研细后，加こ酸こ酯5 40体积份，超声处理10 60分钟，滤过，滤液浓缩至O. 5 5体积份，作为木香、石榴子供试品溶液；另取木香、石榴子对照药材各O. I 3重量份，按照所述木香、石榴子供试品溶液的制备方法分别制成木香、石榴子对照药材溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香、石榴子的阴性样品，并按所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法制成木香、石榴子阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计； 优选地，所述步骤(I)为取六味木香制剂2重量份，研细后，加こ酸こ酯20体积份，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2体积份，作为木香、石榴子供试品溶液；另取木香、石榴子对照药材各O. 5重量份，按照所述木香、石榴子供试品溶液的制备方法分别制成木香、石榴子对照药材溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香、石榴子的阴性样品，并按所述木香、石榴子供试品溶液的配制方法制成木香、石榴子阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计。
5.根据权利要求I至4中任一项所述的检测方法，其中 所述步骤(2)为照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取步骤(I)中制得的样品溶液，将其分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，风吹至斑点显色清晰。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其中 所述吸取的样品溶液中的供试品溶液和阴性样品溶液均为5 20 μ I、对照药材溶液为I 10 μ 1，优选所述吸取的样品溶液中的供试品溶液和阴性样品溶液均为10μ I、对照药材溶液为5μ I;所述展开剂环己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯的体积比为8 22 3 8 O. I 1，优选体积比为15 : 5 : O. 5 ;所述薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，优选饱和20分钟；所述香草醛硫酸溶液重量体积百分比为5%，用热风吹至斑点显色清晰。
7.根据权利要求3所述的检测方法，其中 所述步骤(Γ )为取六味木香制剂O. 5 5重量份，研细后，加こ醇5 40体积份，超声处理10 60分钟，滤过，滤液浓缩至O. 5 5体积份，作为余甘子、荜茇供试品溶液；另取余甘子对照药材O. I 3重量份，按照所述余甘子、荜茇供试品溶液的制备方法制成余甘子对照药材溶液；再取胡椒碱对照品适量，加甲醇制成姆Iml含胡椒碱O. 5 3mg的溶液，作为胡椒碱对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含余甘子、荜茇的阴性样品，并按所述余甘子、荜茇供试品溶液的配制方法制成余甘子、荜茇阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量吋，体积份以mL计； 优选地，所述步骤(Γ)为取六味木香制剂2重量份，研细后，加こ醇20体积份，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2体积份，作为余甘子、荜茇供试品溶液；另取余甘子对照药材O. 5重量份，按照所述余甘子、荜茇供试品溶液的制备方法制成余甘子对照药材溶液；再取胡椒碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含胡椒碱Img的溶液，作为胡椒碱对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含余甘子、荜茇的阴性样品，并按所述余甘子、荜茇供试品溶液的配制方法制成余甘子、荜茇阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计。
8.根据权利要求I至7中任一项所述的检测方法，其中 所述步骤(2’)为照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取步骤(Γ)中制得的样品溶液，将其分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸为展开剂，薄层板置展开缸中饱和，展开，取出，晾干，于254nm紫外光灯下检视。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其中 所述吸取的样品溶液均为5 20 μ 1，优选均为10 μ I ;所述石油醚-こ酸こ酷-甲酸的体积比为I 10 : 2 6 : O. 05 O. 5，优选体积比为6 4 O. 25，所述石油醚的沸程为60 90°C ;所述薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，优选饱和20分钟。
10.根据权利要求I至9中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法进ー步包括用高效液相色谱法测定所述六味木香制剂中木香所含木香烃内酯和/或去氢木香内酯的含量，其中 所述高效液相色谱法測定的步骤包括 (I”)制备木香供试品溶液，以及木香烃内酯和/或去氢木香内酯对照品溶液； (2”)将上步所得木香供试品溶液，以及木香烃内酯和/或去氢木香内酯对照品溶液注入液相色谱仪进行測定； 优选地，所述步骤(I”)中还包括制备木香阴性样品溶液；所述步骤(2”)中还包括将木香阴性样品溶液注入液相色谱仪进行測定。
11.根据权利要求10所述的检测方法，其中 所述高效液相色谱法測定的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为60 70 30 40的こ腈-水为流动相；检测波长为225 ±2nm;柱温20 40°C，理论板数按木香烃内酯峰计算不低于3000 ； 优选地，所述高效液相色谱法測定的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为65 35的こ臆-水为流动相；检测波长为225nm;柱温25°C，理论板数按木香烃内酯峰计算不低于3000。
12.根据权利要求10或11所述的检测方法，其中 所述步骤(I”)为取六味木香制剂O. I 3重量份，研细后，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 50体积份，称定重量，在功率250W，频率40kHz下超声处理15 45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为木香供试品溶液；另外精密称取木香烃内酯对照品和去氢木香内酯对照品适量，加甲醇制成每Iml含木香烃内酯20 140 μ g和去氢木香内酯40 200 μ g的混合溶液，作为木香烃内酯和去氢木香内酯混合对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香的阴性样品，并按所述木香供试品溶液的配制方法制成木香阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计； 优选地，所述步骤(I”)为取六味木香制剂I重量份，研细后，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25体积份，称定重量，在功率250W，频率40kHz下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为木香供试品溶液；另外精密称取木香烃内酯对照品与和去氢木香内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含木香烃内酯40 μ g和去氢木香内酯60 μ g的混合溶液，作为木香烃内酯和去氢木香内酯混合对照品溶液；按处方比例及制备エ艺，配制不含木香的阴性样品，并按所述木香供试品溶液的配制方法制成木香阴性样品溶液；其中，上述重量份以g计量时，体积份以mL计； 优选地，所述步骤(2”)为分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各5 20 μ 1，优选各10 μ 1，注入液相色谱仪，測定，即得。
13.根据权利要求I至12中任一项所述的检测方法，其中 所述六味木香制剂的原料药组成包括木香200重量份、巴夏嘎360重量份、余甘子500重量份、丑蘧80重量份、石槽子400重量份和荜发100重量份。
14.根据权利要求13所述的检测方法，其中 所述六味木香制剂的制备方法为将所述原料药粉碎成细粉，过筛，混匀，加水适量制丸，即得丸剂；或将所述原料药粉碎成细粉，过筛，混匀，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的ロ服制剂颗粒剂、丸剤、胶囊剂、片剂或散剤。
15.根据权利要求I至14中任一项所述的检测方法，其中，所述六味木香制剂为颗粒齐U、丸剤、胶囊剂、片剂或散剤。
全文摘要
本发明提供一种六味木香制剂的检测方法，所述六味木香制剂包含木香、巴夏嘎、余甘子、豆蔻、石榴子和荜茇六种药材成分；该方法通过薄层色谱法鉴别所述六味木香制剂中的木香、石榴子、余甘子和/或荜茇。该检测方法重现性、稳定性好、操作简便、精密度高、专属性强、斑点显色清晰、分离度好；通过建立方法可靠，专属性强的质量检测方法，能够有效控制六味木香制剂的质量，使六味木香制剂的质量达到稳定、安全可控。
文档编号G01N30/02GK102645508SQ20121012192
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月24日 优先权日2012年4月24日
发明者张国霞, 续艳丽, 陈丽娟 申请人:西藏奇正藏药股份有限公司