一种剑叶龙血树总黄酮的质量检测方法
【专利摘要】本发明涉及一剑叶龙血树的质量检测方法，所述检测方法包括采用变换波长HPLC法检测剑叶龙血树提取物——剑叶龙血树总黄酮中7-羟基-4'-甲氧基黄烷和/或紫檀茋的含量的步骤，所述剑叶龙血树总黄酮中含7-羟基-4'-甲氧基黄烷不少于0.10wt%，和/或含紫檀茋不少于0.20wt%。本发明通过色谱条件优化，应用变换波长HPLC法同步测定其中两个低极性药效成分，对实现药材及提取物全面质量控制有重要意义。
【专利说明】一种剑叶龙血树总黄酮的质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中药的检测方法，具体讲，涉及一种剑叶龙血树总黄酮的质量检测方法。
【背景技术】
[0002]剑叶龙血树收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》第一卷，壮药名为榧勒垄，具有活血散瘀、定痛止血、敛疮生肌等功效，用于跌打损伤、淤血作痛、妇女气血凝滞、外伤出血和脓疮久不收口。常用作提取龙血竭的原料，本发明人从中提取精制得到有效部位一剑叶龙血树总黄酮，用于治疗冠心病心绞痛。现代研究表明其中主要含有黄酮类、二苯乙烯类、留醇类、皂苷类等化合物，具有抗菌、抗炎、抗氧化活性，镇痛、止血、活血化瘀等多种药理作用。目前，针对原药材剑叶龙血树及提取物的质量控制标准研究，大多集中在测定其中二氢查耳酮类的代表性成分龙血素A、龙血素B，而对其他类别的主要活性成分，如黄烷类、二苯乙烯类的主要成分高纯度化学对照品纯化制备和含量测定研究，尚未见报道。
[0003]为此，特提出本发明。
【发明内容】
[0004]本发明的首要发明目的在于提出了一种剑叶龙血树的质量检测方法。
[0005]为了实现本发明的目的，采用的技术方案为:
[0006]本发明涉及一种剑叶龙血树的质量检测方法，所述检测方法包括采用变换波长HPLC法检测剑叶龙提取物——剑叶龙血素总黄酮中7-羟基-4’ -甲氧基黄烷和/或紫檀芪的含量的步骤。
[0007]本发明的第一优选技术方案为:所述剑叶龙血树总黄酮中含7-羟基-4’ -甲氧基黄烷不少于0.05wt%，和/或含紫檀芪不少于0.10wt%。
[0008]本发明的第二优选技术方案为:所述剑叶龙血树总黄酮中含7-羟基-4’ -甲氧基黄烷不少于0.10wt%jP /或含紫檀芪不少于0.20wt%。
[0009]本发明的第三优选技术方案为:剑叶龙血树的检测方法包括以下步骤:
[0010](1)取剑叶龙血树总黄酮加有机溶剂提取，回流提取0.5~2小时；
[0011](2)选用色谱柱，色谱柱填料为以硅胶为载体的ODS柱，规格为4.6X 150mm，粒径5μπι;流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(36:64);柱温:35°C ;流速:1.0ml IirT1J-羟基-4’-甲氧基黄烷的保留时间为35.8min，紫檀芪的保留时间为41.7min，通过变换波长法，测定7-羟基-4’-甲氧基黄烷的检测波长为:280nm，测定紫檀芪的检测波长为:306nm。
[0012]本发明的第四优选技术方案为:步骤(1)中的有机溶剂选自丙酮、氯仿、乙酸乙酯或甲醇，优选为氯仿。
[0013]本发明的第五优选技术方案为:步骤(1)中的回流时间为I小时。
[0014]本发明的第六优选技术方案为:剑叶龙血树总黄酮的制备方法为:
[0015](1)取剑叶龙血树，粉碎成粗粉；[0016](2)加含0.2%。?0.7%。氢氧化钠的25?75%乙醇回流提取二次，每次加4?14倍量，每次0.5?2小时，滤过，滤液合并；
[0017](3)回收步骤(2)中的溶剂后加5?20%的盐酸调节pH值为I?3，放置6?18小时，滤过；
[0018](4)沉淀加水洗涤至中性，干燥，加醋酸乙酯回流提取二次，每次加3?12倍量，每次0.5?2小时，滤过，滤液合并，
[0019](5)回收步骤(4)中有机溶剂，提取液减压浓缩至相对密度在80°C下为1.1?1.6的稠膏，85°C以下干燥，粉碎，过筛，得到剑叶龙血树总黄酮。
[0020]下面对本发明的技术方案做进一步的解释和说明。
[0021]鉴于7-羟基-4’ -甲氧基黄烷和紫檀芪二者已知的显著活性，采用7-羟基-4’ -甲氧基黄烷和紫檀芪两类低极性成分，作为对剑叶龙血树的龙血树检测指标，从而全面评价其质量是十分必要的。本发明通过系统的质量控制方法学研究，采用变换波长法，建立了HPLC法同步测定这两个不同类别代表性成分的含量测定方法，为全面评价原药材剑叶龙血树及相关提取物质量提供参考。
[0022]本发明所提供的方法具有如下优点:
[0023]本发明通过色谱条件优化，应用变换波长检测HPLC法同步测定其中两个低极性不同类别药效成分，实现了一条快速经济，重现性好的质量检测方法，对实现药材及提取物全面质量控制有重要意义。
【专利附图】
【附图说明】:
[0024]图1:254nm检视三个不同体系下7_羟基_4’ -甲氧基黄烷TLC纯度检验；
[0025]图2:可见光下检视经10%H2S04乙醇溶液显色后照片；
[0026]图3:7_羟基-4’ -甲氧基黄烷纯度检验的紫外吸收光谱图；
[0027]图4:7_羟基-4’ -甲氧基黄烷纯度检验的高效液相色谱图；
[0028]图5:254nm检视三个不同体系下紫檀芪TLC纯度检验；
[0029]图6:紫檀芪纯度检验的紫外吸收光谱图；
[0030]图7:紫檀芪纯度检验的高效液相色谱图；
[0031]图8:281nm条件下剑叶龙血树总黄酮色谱图；
[0032]图9:306nm条件下剑叶龙血树总黄酮色谱图；
[0033]图1O:混合对照品的紫外吸收光谱图；
[0034]图11:混合对照品的闻效液相色谱图；
[0035]图12:7_羟基-4’-甲氧基黄烷的标准曲线图；
[0036]图13:紫檀芪的标准曲线图。
[0037]本发明的【具体实施方式】仅限于进一步解释和说明本发明，并不对本发明的内容构成限制。
【具体实施方式】
[0038]实施例17-羟基-4’ -甲氧基黄烷化学对照品研究
[0039]7-轻基-4’ -甲氧基黄烧(7_hydroxy-4’ methoxyf Iavane)的分子式为:[0040]
【权利要求】
1.一种剑叶龙血树的质量检测方法，其特征在于，所述质量检测方法包括采用变换波长HPLC法检测剑叶龙血树提取物——剑叶龙血树总黄酮中7-羟基-4’ -甲氧基黄烷和/或紫檀芪的含量的步骤。
2.根据权利要求1所述的剑叶龙血树的质量检测方法，其特征在于，所述剑叶龙血树总黄酮中含7-羟基-4’ -甲氧基黄烷不少于0.050wt%，和/或含紫檀芪不少于0.10wt%o
3.根据权利要求1所述的剑叶龙血树的质量检测方法，其特征在于，所述剑叶龙血树总黄酮中含7-羟基-4’ -甲氧基黄烷不少于0.10被％，和/或含紫檀芪不少于0.20wt%o
4.根据权利要求1所述的剑叶龙血树的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取剑叶龙血树总黄酮加有机溶剂提取，回流、超声或索式提取0.5~2小时； (2)选用色谱柱，色谱柱填料为以十八烷基键合硅胶为载体的ODS柱，规格为4.6 X 150mm,粒径 5 μ m ； 流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(36:64);柱温:35°C;流速:1.0ml.mirT1,?-羟基-4’-甲氧基黄烷的保留时间为35.8min，紫檀芪的保留时间为41.7min，通过变换波长法，7-羟基-4’-甲氧基黄烷的检测波长为:281nm，紫檀芪的检测波长为:306nm。
5.根据权利要求4所述的剑叶龙血树的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中的有机溶剂选自丙酮、氯仿、乙酸乙酯或甲醇，优选为氯仿。
6.根据权利要求4 所述的剑叶龙血树的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中的回流时间为I小时。
7.根据权利要求1所述的剑叶龙血树的质量检测方法，其特征在于，剑叶龙血树总黄酮的制备方法为: (1)取剑叶龙血树，粉碎成粗粉； (2)加含0.2%。~0.7%。氢氧化钠的25~75%乙醇回流提取二次，每次加4~14倍量，每次0.5~2小时，滤过，滤液合并； (3)回收步骤(2)中的溶剂后加5~20%的盐酸调节pH值为I~3，放置6~18小时，滤过； (4)沉淀加水洗涤至中性，干燥，加醋酸乙酯回流提取二次，每次加3~12倍量，每次0.5~2小时，滤过，滤液合并， (5)回收步骤(4)中有机溶剂，提取液减压浓缩至相对密度在80°C下为1.1~1.6的稠膏，85°C以下干燥，粉碎，过筛，得到剑叶龙血树总黄酮。
【文档编号】G01N30/02GK103901119SQ201210576245
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2012年12月26日 优先权日:2012年12月26日
【发明者】邹节明, 周艳林 申请人:桂林三金药业股份有限公司