专利名称：猪瘟分支肽及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种猪瘟分支肽及其应用。
背景技术：
猪瘟病毒E2蛋白可以诱导产生中和抗体，是猪瘟病毒最主要的保护性抗原(Konig等，J Virol，1995，69:479-86)。关于E2蛋白抗原表位的鉴定已经取得了一定的进展。其中，E2蛋白的829-837位氨基酸是一个主要的抗原表位，而且是保守的猪瘟特异性的线性表位(Lin等，J Virol, 2000, 74:11619-25)。大肠杆菌表达的该表位与GST的融合产物诱导了保护性免疫应答(Liu等，J Virol Meth，2006，134:125-9)，并且串联了 4个拷贝后，表达的融合蛋白能抵抗猪瘟病毒的攻击(Liu等，Vaccine，2006，24:7175-7180)。把该表位人工合成的肽链与BSA偶联后，免疫猪，仅仅显示了微弱的保护效力(Dong等，Vaccine, 2006, 24:1906-1913)。利用合成重叠肽的方法，已经鉴定出了一系列的猪瘟E2蛋白的线性中和表位，把上述表位分别与BSA偶联后，免疫猪，能诱导产生中和抗体，但并不能对猪提供完全的保护(Dong 等，Vaccine，2006，24:1906-1913 ;Dong 等，Vaccine，2006，24:426-434)。上述研究无论是表位与GST融合表达还是合成的肽链与BSA偶联，免疫动物后都不可避免地产生针对载体的免疫应答，这可能会给免疫动物带来一定的风险。而且，短肽链与巨大的载体偶联会更多地诱导机体产生针对载体的免疫应答(cease等，Proc NatlAcad Sci U S A, 1987,84(12):4249-53)。因此，需要研制一种包含上述E2蛋白抗原表位的免疫原分子，能为猪提供安全、高效的免疫保护。对于猪瘟病毒抗体的检测，目前公认的方法是用中和试验来检测，但是该方法操作复杂，费时，而且需要高质量的猪瘟单克隆抗体来检测，普通的实验室很难达到上述要求。因此， 猪瘟抗体的检测需要一种制备简单、可实现快速检测的检测抗原。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种猪瘟分支肽，该分支肽含有辅助性T细胞表位和具有中和活性的猪瘟病毒E2蛋白B细胞表位，该分支肽既可以作为免疫原诱导机体产生中和抗体，又可以作为检测抗原来检测猪瘟病毒抗体，其作为免疫原时，不仅可避免载体蛋白诱导不期望的免疫应答，而且能提高肽疫苗的免疫原性，增强免疫保护作用。此外，还需要提供一种猪瘟分支肽在制备预防或治疗猪瘟病的药物中的应用，以及还提供一种猪瘟分支肽在制备检测猪瘟病毒抗体的生物制品中的应用。为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:在本发明的一个方面，提供了一种猪瘟分支肽，该分支肽具有B-L-T结构，其中，T为通用型辅助性T细胞表位，该通用型辅助性T细胞表位的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示；B为猪瘟病毒E2蛋白B细胞表位，该B细胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
L为连接T与B的连接肽，该连接肽具有下述结构式:
权利要求
1.一种猪瘟分支肽，其特征在于，所述分支肽具有B-L-T结构，其中， T为通用型辅助性T细胞表位，该通用型辅助性T细胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示； B为猪瘟病毒E2蛋白B细胞表位，该B细胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示； L为连接T与B的连接肽，该连接肽具有下述结构式:
2.一种疫苗组合物，其特征在于，用于免疫动物以对抗猪瘟病毒的感染，所述疫苗组合物包含:权利要求1所述的猪瘟分支肽、以及佐剂。
3.权利要求1所述的猪瘟分支肽在制备预防或治疗猪瘟病的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物包括猪瘟疫苗。
5.—种检测猪瘟病毒抗体的试剂盒,其特征在于,包含权利要求1所述的猪瘟分支肽。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包含猪瘟病毒阳性对照血清、猪瘟病毒阴性对照血清。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包含ELISA酶标板、酶标二抗、显色液。
8.权利要求1所述的猪瘟分支肽在制备检测猪瘟病毒抗体的生物制品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述生物制品为检测猪瘟病毒抗体的检测抗原。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，通过ELISA的方法检测猪瘟病毒抗体。
全文摘要
本发明公开了一种猪瘟分支肽，该分支肽将辅助性T细胞表位和猪瘟病毒E2蛋白B细胞表位用分支骨架结构进行连接。本发明还公开了上述猪瘟分支肽作为猪瘟疫苗及作为检测猪瘟病毒抗体的检测抗原的应用。本发明猪瘟分支肽，作为猪瘟疫苗，不仅避免机体产生针对载体的免疫应答，而且提高了合成肽疫苗的免疫原性，其成份单纯，没有毒副作用和生物安全方面的担忧，具有产业化优势。本发明猪瘟分支肽，作为检测抗原，不仅制备简单，且能快速检测猪瘟病毒抗体，具有很好的应用前景。
文档编号G01N33/68GK103159858SQ201310060318
公开日2013年6月19日 申请日期2013年2月26日 优先权日2013年2月26日
发明者童光志, 李国新, 周艳君, 于海 申请人:中国农业科学院上海兽医研究所