本发明涉及一种冰冻透明的组织观测方法。
背景技术：
在生命科学实验等组织学检验中，通常需要采用切片的方式来对组织进行观察研究。传统的组织观测方法中，通常是直接将包埋剂放置在冷冻头上，然后将新鲜的待切片组织进行包埋，待其冷冻后放到切片机上进行切片，再将切片后的组织放置在载破片上并采用染色剂进行染色，染色完成后再置放在显微镜的工作台上观察组织。采用该方式来进行组织观察时需要对样本进行破坏处理，无法保证样本的完整性，操作也较为麻烦，而且对于一些尺寸较小的样本而言，采样上述方式在实施时切片过程较难完成，且切片机在切片时对切片的厚度有一定的限制，不能完全观测到所有切面的组织。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种冰冻透明的组织观测方法，该组织观测方法简单易行，具有良好的适用性。为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种冰冻透明的组织观测方法，用于对样本进行组织观测，所述组织观测方法包括如下步骤：（1）将冷冻机的冷冻头放置在显微镜的工作台上，所述冷冻头具有载物台；（2）选用能够在冷冻状态下凝固的包埋剂，将所述包埋剂滴在所述载物台上，并使得覆盖在所述载物台上的所述包埋剂的长度、宽度、厚度分别大于所述样本的长度、宽度、高度；（3）待覆盖在所述载物台上的所述包埋剂至半凝固状态，所述半凝固状态下所述包埋剂上未凝部分的尺寸稍大于所述样本的尺寸，将所述样本置放在所述包埋剂的所述未凝部分上，按照样本观测需求调整所述样本在所述包埋剂上的位置，静置至所述包埋剂完全凝固；（4）往所述样本上再滴加包埋剂，使得所述包埋剂凝固后形成对所述样本的完全包覆；（5）对包覆有所述包埋剂的所述样本进行修片，将所述样本的表壳去除；（6）往所述样本上滴加质量百分比为20%～50%的甘油，待所述样本透明化，调整所述显微镜的镜头观察所述样本的组织图像。优选地，所述冷冻机为半导体冷冻切片机。优选地，所述包埋剂为OTC组织包埋剂。优选地，所述步骤（2）中，覆盖在所述载物台上的所述包埋剂的长度、宽度、厚度分别为所述样本的长、宽、高的1.2～1.3倍。优选地，所述步骤（6）中，观察所述样本的所述组织图像时对所述组织图像进行拍照记录。进一步优选地，所述拍照记录在滴加所述甘油后的2min～3min内进行。优选地，所述显微镜为数码体视显微镜。由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：本发明的一种冰冻透明的组织观测方法，其中通过直接在冷冻头的载物台上采用包埋剂将样本进行冷冻包埋，再进行修片并做透明化处理即可进行组织观测，该过程中无需对样本进行染色处理和切片处理，定位方便且在操作过程中无需进行移动，实验前后能够保持样本形态、形状以及颜色的一致性，满足多种类型样本的组织观测要求，其操作简单易行，具有良好的适用性。附图说明附图1为本发明中冷冻机与显微镜的连接示意图。具体实施方式下面结合附图和具体的实施例来对本发明的技术方案作进一步的阐述。本发明的冰冻透明的组织观测方法，主要用于对动物等组织进行观测。首先将冷冻机1的冷冻头2放置在显微镜4的工作台上，该冷冻头2具有载物台3，用于放置待冷冻的物体，冷冻机1可采用半导体冷冻切片机，可方便地对冷冻头2的载物台3上的物体进行快速制冷。显微镜4采用数码体视显微镜，能够对待观测的图像进行拍照处理，同时可以观测到立体感强的三维空间像。然后选用能够在冷冻状态下凝固的包埋剂，该包埋剂可采用OTC组织包埋剂，即聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，将包埋剂滴在载物台3上，并使得覆盖在载物台3上的包埋剂的长度、宽度、高度分别大于样本的长度、宽度和高度，在这里，包埋剂可滴加至其覆盖在载物台3上的长度、宽度、高度分别为样本的1.2～1.3倍，这样才能保证能够将样本置于包埋剂的中间。包埋剂在冷冻头2上冷冻凝固，当包埋剂达到未凝部分的尺寸稍大于样本尺寸的半凝固状态时，将样本放置在包埋剂的未凝部分上，然后按照样本观测的需求调整样本在包埋剂上的位置，调整完毕后将其静置至包埋剂完全凝固。接着往样本上滴加包埋剂，使得包埋剂在凝固后形成对样本的完全包覆，这样冷冻的样本便制作完成。在需要观测时，先对包覆有包埋剂的样本进行修片，将样本的表壳去除。修片时用刀片在显微镜下进行刮片，将刀片与样本大致呈接近垂直的角度方向来轻轻地刮除样本的表层，使得样本的组织露出来。最后再往样本上滴加质量百分比为20%～50%的甘油，待样本透明化，调整显微镜的镜头观察样本的组织图像。由于样本在甘油的作用下透明化，当时间过长样本完全透明化后便观测不到样本的组织结构，因而组织图像的观测需在滴加甘油后的2min～3min内进行，在该时间段内，还可将组织图像进行拍照记录以便于后续观测研究。当将上述组织观测方法用于对吸血的医学节肢动物，如蚊子、蛉、蚤、虱、蜱、螨等动物时，在透明化后其消化系统、生殖系统、呼吸系统、排泄系统分别呈现不同的颜色，组织观测效果更好。当然，上述组织观测方法也可用于其他的实验动物组织和植物组织的观测。所需观测的样本的大小在载物台3大小的3/5以内即可按照本发明的方法进行组织观测。采用本发明的组织观测方法对样本进行组织观测时，无需对样本进行染色处理和切片处理，定位方便且在操作过程中无需进行移动，实验前后能够保持样本形态、形状以及颜色的一致性，满足多种类型样本的组织观测要求，其操作简单易行，具有良好的适用性。上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。