一种用液相色谱法分离测定比拉斯汀原料及其制剂的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定比拉斯汀及其有关物质的方法。
背景技术：
：比拉斯汀是一种无镇静作用的高选择性组胺H1受体拮抗剂，用于治疗过敏性鼻结膜炎和荨麻疹，本品安全性良好，无常用抗组胺药物存在的镇静作用及心脏毒性。比拉斯汀化学名为2-[4-(2-{4-[1-(2-Ethoxy-ethyl)-1H-benzoimidazol-2-yl]-piperidin-1-yl}-ethyl)-phenyl]-2-methyl-propionicacid，分子式为C28H37N3O3。比拉斯汀结构式为：在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这几个中间体即药物质量控制中的有关物质，对于比拉斯汀的合成主要控制的有关物质有六个，其中中间体有四个，杂质有两个，分别是中间体1Toluene-4-sulfonicacid2-{4-[1-(4,4-dimethyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-1-methyl-ethyl]-phenyl}-ethylester、中间体22-Piperidin-4-yl-1H-benzoimidazole、中间体32-[1-(2-{4-[1-(4,4-Dimethyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-1-methyl-ethyl]-phenyl}-ethyl)-piperidin-4-yl]-1H-benzoimidazole、中间体42-{2-[1-(2-{4-[1-(4,4-Dimethyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-1-methyl-ethyl]-phenyl}-ethyl)-piperidin-4-yl]-benzoimidazol-1-yl}-ethanol；杂质12-[4-(2-{4-[1-(2-Hydroxy-ethyl)-1H-benzoimidazol-2-yl]-piperidin-1-yl}-ethyl)-phenyl]-2-methyl-propionicacid、杂质22-{2-[1-(2-{4-[1-(4,4-Dimethyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-1-methyl-ethyl]-phenyl}-ethyl)-piperidin-4-yl]-benzoimidazol-1-yl}-ethanol，结构式分别为：中间体1中间体2中间体3中间体4杂质1杂质2对于合成比拉斯汀中引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中都是需要进行质量控制的，因此，实现对比拉斯汀及其有关物质的分离，在比拉斯汀的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种分析比拉斯汀的纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现比拉斯汀与其有关物质的分离和测定，保证比拉斯汀及含比拉斯汀制剂的质量控制。本发明所述的用液相色谱法分析比拉斯汀的纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲液－有机相为流动相。上述的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，选自Apollo-C18。上述的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇，优选为甲醇或乙腈。上述的方法，其流动相无机盐缓冲液-有机相采用梯度洗脱。上述的方法中，所说的无机盐缓冲液中无机盐选自以下：磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、高氯酸钠等，优选为磷酸二氢铵。其中无机盐缓冲液中所含无机盐的浓度为0.01～0.05mol/L，最优为0.02mol/L。本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：1)取比拉斯汀或含比拉斯汀的制剂样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成含比拉斯汀0.1～1.5mg的样品溶液。2)设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，流动相流速优选为1.0mL/min，检测波长为210～250nm，最佳检测波长为215nm，色谱柱柱箱温度为20～40℃，柱箱柱温最佳为25℃。3)取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成比拉斯汀与有关物质的分离测定。其中：高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp色谱柱：C18（Apollo，250×4.6mm，5μm）流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH5.5）；B：乙腈，按以下梯度进行洗脱时间（min）051025556070B%15203040701515流速：1.0mL/min检测波长：215nm柱温：25℃进样体积：10μL本发明采用C18(Apollo，250×4.6mm，5μm)，能够有效的分离比拉斯汀及其有关物质。本发明解决了比拉斯汀及其有关物质的分离测定问题，从而确保了比拉斯汀及其制剂的质量可控。附图说明图1空白溶剂的高效液相色谱图图2比拉斯汀及其有关物质的高效液相色谱图图3比拉斯汀原料的高效液相色谱图图4比拉斯汀片辅料空白的高效液相色谱图图5比拉斯汀片的高效液相色谱图具体实施方式：以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。实施例1仪器与条件高效液相色谱仪：岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp；色谱柱：C18（Apollo，250×4.6mm，5μm）；流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH5.5）；B：乙腈，按以下梯度进行洗脱时间（min）051025556070B%15203040701515流速：1.0mL/min检测波长：215nm柱温：25℃进样体积：10μL实验步骤分别取比拉斯汀及其中间体约25mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，各取适量配制成混合样品溶液。分别取试剂空白溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2。图2中保留时间为23.218min的色谱峰为比拉斯汀的色谱峰，其余色谱峰为比拉斯汀各中间体及杂质的色谱峰，由图可以看出，比拉斯汀与其中间体及杂质能够达到基线分离，符合中国药典的要求。实施例2仪器与条件高效液相色谱仪：岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp；色谱柱：C18（Kromasil，250×4.6mm，5μm）；流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH5.5）；B：乙腈，按以下梯度进行洗脱时间（min）0525556070B%152045701515流速：1.0mL/min；检测波长：215nm；柱温：25℃；进样体积：10μL。实验步骤取比拉斯汀原料约25mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。图3中保留时间为23.727min的色谱峰为比拉斯汀的色谱峰，由图可以证明，比拉斯汀的化学纯度达到原料药的要求，本法可以用于比拉斯汀的质量监测。实施例3仪器与条件高效液相色谱仪：岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp；色谱柱：C18（Apollo，250×4.6mm，5μm）；流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH5.5）；B：乙腈，按以下梯度进行洗脱时间（min）051025556070B%15203040701515流速：1.0mL/min；检测波长：215nm；柱温：25℃；进样体积：10μL。实验步骤取比拉斯汀片适量，约相当于比拉斯汀12.5mg，置25mL量瓶中，加甲醇超声处理溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，并同法进行空白辅料试验，结果见图4、图5。图4证明，空白辅料不干扰本品的测定，图5证明本法可以用于比拉斯汀片的质量监测。23.101min的色谱峰为比拉斯汀的色谱峰。从图1－图5表明：本发明的方法，可以清楚地将比拉斯汀与其中间体体分离，并可以准确进行检测定量，以计算出比拉斯汀的含量，从而有效控制比拉斯汀的产品质量。当前第1页1 2 3