赶黄草的质量检测方法
【专利摘要】本发明提供了赶黄草的质量检测方法。通过同时检测赶黄草中的总黄酮和槲皮素的含量，达到有效的控制赶黄草的质量。本发明通过同时检测赶黄草中的总黄酮和槲皮素，有效控制赶黄草药材及提取物的质量，检测方法专属性强，分离度高，稳定，易于实验室以及工业大生产中产品的质量控制。
【专利说明】赶黄草的质量检测方法【技术领域】
[0001]本发明涉及赶黄草的质量检测方法。
【背景技术】
[0002]赶黄草为虎耳草科赶黄草属植物赶黄草Penthorum chinense Pursh的干燥地上部分，收载于1993年版《湖南省中药材标准》。主含黄酮类、挥发油等成分。其中已确定没食子酸和槲皮素为已知具有抗乙肝病毒和保肝作用的成分，是赶黄草的有效成分。据现有文献资料，仅见对其化学成分的研究报道，以及含该药材的中成药肝苏颗粒用于治疗肝炎及抗肝纤维化等临床报道。但多年来未见《湖南省中药材标准》修正赶黄草项，并且该标准中主要以槲皮素的含量为标准，难以对赶黄草药材及其制剂进行全面评价和有效的质量控制。
[0003]申请号:201210490728.8，发明名称:扯根菜提取物的制备方法，其中公开了总黄酮的含量测定方法，采用紫外分光光度法在350nm吸光度下测定总黄酮含量。郭亚健，范丽，张珍兰，等.关于比色法测定总黄酮方法的探讨[J].药物分析杂志，2002，22(2):97;马陶陶，张群林，李俊，等.三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨[J].时珍国医国药，2008，19(1):54ο
【发明内容】
[0004]本发明的技术方案是提供了赶黄草的质量检测方法。
[0005]本发明提供了赶黄草的质量检测方法，它包括检测赶黄草中的总黄酮和槲皮素；
[0006]其中，总黄酮的含量检测方法是采用UV法测定赶黄草中的总黄酮的含量，它包括如下步骤:
[0007]a、溶液的制备
[0008]芦丁对照品溶液的制备精确称取芦丁 10.6mg于IOmL烧杯中，以50%乙醇溶解，定容于IOOmL容量瓶中，浓度为0.106mg. ML-1 ；
[0009]供试品溶液的制备精密称取赶黄草细粉约0.1g于50mL具塞锥形瓶中，100:1的比例分别于5个锥形瓶中各加入70%乙醇溶液10mL，摇匀，密封，避光处静置lh，于超声波清洗器中超声提取lh，摇匀，静置冷却，取续滤液；
[0010]b、测定方法及测定波长的选择
[0011]取芦丁对照品溶液和供试品溶液各0.2mL于5mL容量瓶，加水至刻度，摇匀，加
0.1mol.ml/1三氯化铝溶液lmL，加水定容至10mL，摇匀静置30min，用紫外分光光度计扫描，测定波长为417nm ；
[0012]槲皮素的检测方法包括薄层色谱检测法和高效液相色谱法；
[0013]其中，薄层色谱检测方法包括如下步骤:
[0014]a、供试品溶液制备:取赶黄草细粉，加入50%-70%的乙醇超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用石油醚萃取，弃去石油醚，水液加稀盐酸，置100°c水浴锅中水解，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取，合并乙酸乙酯液，用水洗涤，弃去水洗液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，过滤，作为供试品溶液；
[0015]b、对照品溶液制备:取槲皮素对照品加乙酸乙酯溶解制成每ImL含0.5mg的对照品溶液；
[0016]C、分别取a步骤的供试品和对照品溶液，点样于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10: 8: 3)为展开剂，预饱和lOmin，上行展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的亮黄色的斑点；再喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0017]所述的HPLC法测定赶黄草槲皮素的含量:
[0018]色谱条件:色谱柱:DikmaKromasil C18(250mmX4.6mm, 5 μ m);流动相:甲醇-0.1%磷酸(52: 48);检测波长:366nm;柱温:40°C ;流速:1.(^*1^11-1;进样量:10 μ L0
[0019]其中，所述的槲皮素的检测方法中薄层色谱检测方法a步骤中乙醇浓度为70%。
[0020]其中，槲皮素的检测方法中槲皮素标准品Rf=0.47。
[0021]其中，所述的HPLC法测定赶黄草槲皮素的含量中，对照品溶液的制备方法为:精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的槲皮素对照品4.23mg置IOOmL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为42.3 μ g.ml/1的槲皮素对照品溶液；供试品溶液的制备:精密称取赶黄草粗粉0.5g，加入IOmL甲醇，超声提取lh，过滤，取5mL加24%盐酸水解1.5h，蒸干，甲醇定容于5mL容量瓶，作为供试品溶液。
`[0022]本发明通过同时检测赶黄草中的总黄酮和槲皮素的含量，达到有效的控制赶黄草的质量。本发明通过同时检测赶黄草中的总黄酮和槲皮素，有效控制赶黄草药材及提取物的质量，检测方法专属性强，分离度高，稳定，易于实验室以及工业大生产中产品的质量控制。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]图1赶黄草提取液和芦丁对照品溶液扫描图谱A芦丁对照品溶液B赶黄草提取液
[0024]图2芦丁标准吸收曲线
[0025]图3槲皮素薄层色谱非荧光斑点(其中，1、2、3槲皮素提取液4槲皮素对照品)
[0026]图4槲皮素薄层色谱荧光斑点(其中，1、2、3槲皮素提取液4槲皮素对照品)
[0027]图5槲皮素对照品溶液HPLC色谱图
[0028]图6赶黄草供试品溶液HPLC色谱图
[0029]图7槲皮素对照品标准曲线图
[0030]图8槲皮素紫外吸收图(A槲皮素对照品溶液B赶黄草提取液)
【具体实施方式】
[0031]实施例1UV法测定赶黄草中的总黄酮的含量
[0032]I溶液的制备[0033]芦丁对照品溶液的制备精确称取芦丁 10.6mg于IOmL烧杯中，以50%乙醇溶解,定容于IOOmL容量瓶中，浓度为0.106mg.mL'
[0034]供试品溶液的制备精密称取细粉约0.1g于50mL具塞锥形瓶中，100: I的比例分别于5个锥形瓶中各加入70%乙醇溶液10mL，摇匀，密封，避光处静置lh，于超声波清洗器中超声提取lh，摇匀，静置冷却，取续滤液。
[0035]2测定方法及测定波长的选择
[0036]取芦丁对照品溶液和供试品溶液各0.2mL于5mL容量瓶，加水至刻度，摇匀，加
0.1mol.ml/1三氯化铝溶液lmL，加水定容至10mL，摇匀静置30min，用紫外分光光度计扫描，对照品溶液和供试品溶液均在417nm处有最大吸收(图1)，故以417nm作为其测定波长。
[0037]3标准曲线的绘制
[0038]分别取芦丁对照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8，1.0, 1.2mL，按2.1.2项下方法测定，在波长417nm处测定吸光度A，测得结果(表1 )。
[0039]表1总黄酮线性试验测定结果
[0040]
【权利要求】
1.赶黄草的质量检测方法，其特征在于:它包括检测赶黄草中的总黄酮和槲皮素； 其中，总黄酮的含量检测方法是采用UV法测定赶黄草中的总黄酮的含量，它包括如下步骤: a、溶液的制备 芦丁对照品溶液的制备精确称取芦丁 10.6mg于IOmL烧杯中，以50%乙醇溶解，定容于IOOmL容量瓶中，浓度为0.106mg.mL—1 ； 供试品溶液的制备精密称取赶黄草细粉约0.1g于50mL具塞锥形瓶中，100: I的比例分别于5个锥形瓶中各加入70%乙醇溶液10mL，摇匀，密封，避光处静置lh，于超声波清洗器中超声提取lh，摇匀，静置冷却，取续滤液； b、测定方法及测定波长的选择: 取芦丁对照品溶液和供试品溶液各0.2mL于5mL容量瓶，加水至刻度，摇匀，加0.1mol.ml/1三氯化铝溶液lmL，加水定容至10mL，摇匀静置30min，用紫外分光光度计扫描，测定波长为417nm ； 槲皮素的检测方法包括薄层色谱检测法和高效液相色谱法； 其中，薄层色谱检测方法包括如下步骤: a、供试品溶液制备:取赶黄草细粉，加入50%-70%的乙醇超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用石油醚萃取，弃去石油醚，水液加稀盐酸，置100°C水浴锅中水解，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取，合并乙酸乙酯液，用水洗涤，弃去水洗液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，过滤，作为供试品溶液； b、对照品溶液制备:取槲皮素对照品加乙酸乙酯溶解制成每ImL含0.5mg的对照品溶液； C、分别取a步骤的供试品和对照品溶液，点样于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10: 8: 3)为展开剂，预饱和lOmin，上行展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的亮黄色的斑点；再喷以I %三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑占.所述的HPLC法测定赶黄草槲皮素的含量: 色谱条件:色谱柱:Dikma Kromasil C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m);流动相:甲醇-0.1%磷酸(52: 48);检测波长:366nm ;柱温:40°C ;流速:1.0mL.min—1 ;进样量=IOyL0
2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于:所述的槲皮素的检测方法中薄层色谱检测方法a步骤中乙醇浓度为70%。
3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于:槲皮素的检测方法中槲皮素标准品 Rf=0.47。
4.根据权利要求1所述的质量测定方法，其特征在于:所述的HPLC法测定赶黄草槲皮素的含量中，对照品溶液的制备方法为:精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的槲皮素对照品4.23mg置IOOmL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为42.3 μ g.ml/1的槲皮素对照品溶液；供试品溶液的制备:精密称取赶黄草粗粉0.5g，加入IOmL甲醇，超声提取lh，过滤，取5mL加24%盐酸水解1.5h,蒸干，甲醇定容于5mL容量瓶，作为供试品溶液。
【文档编号】G01N21/33GK103822888SQ201310596386
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2013年11月21日 优先权日:2013年11月21日
【发明者】税丕先, 朱烨, 欧丽兰, 李婷, 余昕, 张春, 庄元春, 李建, 卢娟 申请人:泸州医学院