一种半定量微量尿白蛋白快速检测装置制造方法
【专利摘要】本实用新型专利公开了一种半定量微量尿白蛋白快速检测装置。其特征在于装置由微量尿白蛋白(UmAlb)胶体金半定量检测试纸笔(1)、配套比色卡(2)和采样杯(3)构成。UmAlb胶体金半定量检测试纸笔由外部的卡壳内部的试纸组成：试纸由含有胶体金标记人血清白蛋白抗体的胶体金垫、包被有人血清白蛋白和抗鼠IgG的NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成；卡壳内部装载试纸，下部具有可以为细长型或一体型样品窗口。采样杯是可以接收尿液的塑料容器。配套比色卡是白色背景上印有4条不同深浅红色线条的卡片，分别对应不同UmAlb浓度。检测时用采样杯采样，结果和比色卡对比进行半定量判定。操作简便、快速、经济实用，特别适合个人自测或临床检测。
【专利说明】一种半定量微量尿白蛋白快速检测装置
【技术领域】
[0001]本实用新型是涉及医学临床诊断【技术领域】，特别是涉及一种以免疫胶体金快速检测技术制备的半定量微量尿白蛋白快速检测装置。
【背景技术】
[0002]微量尿白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，为含585个氨基酸残基的单链多肽，分子量为66KD，在成人血清中的含量是40?55g /L，占总蛋白含量的一半左右。但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量尿白蛋白是反映肾脏异常渗漏蛋白质。微量尿白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。
[0003]当一名患者有高血压或糖尿病或同时患有这两种疾病(经常同时发生)时，肾脏血管会发生病变，改变了肾脏滤过蛋白质(尤其是白蛋白)的功能，这使得蛋白质渗漏到尿中，为糖尿病肾病。微量白蛋白尿是糖尿病影响肾脏的早期征象。
[0004]2型糖尿病是一种常见病，近20年来发病率显著升高，且发病年龄提前，目前全球20-79岁人群患病人数约1.5亿，其中患病人数最多的前3位国家是:印度、中国、美国现有数据显示2型糖尿病患者微量白蛋白尿的患病率30%-40%左右，为此，美国糖尿病学会推荐所有2型糖尿病患者在初诊断时及以后每年检查微量白蛋白尿。
[0005]尿中白蛋白用来评估肾脏受损程度时，当发现尿白蛋白在20mg/L-200mg / L范围内时，属微量尿白蛋白，这个时候说明肾脏已经损伤，如果患者能够经过规范的修复肾单位和逆转纤维化治疗，尚可彻底修复肾小球，消除蛋白尿。而当尿中微量白蛋白超过200mg /L时，尿常规测试尿蛋白阳性，此时证明机体已有大量白蛋白漏出，可能出现低蛋白血症，肾病发展离不可逆期只有一步之遥，如果不及时进行医治，就会进入尿毒症期。
[0006]目前检测尿微量白蛋白的方法主要生化法、免疫法。免疫法又包含免疫比浊法、ELISA法和胶体金法等。
[0007]免疫胶体金技术是一种新型的诊断技术，基本原理如下:利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线，在一定的条件下，T线的强弱和样品中的浓度呈正相关或负相关，从而实现定量或半定量检测。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
[0008]申请号CN201210165074.1的专利公开了一种半定量检测尿微量白蛋白的试纸条，该试纸是一种条型结构，采用了 3条T线的检测方法；申请号CN201210165074.1的专利公开了微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，是一种卡型结构，但不包含比色卡和采样杯，不能进行快速的半定量检测，以上两个专利和本申请专利的笔型结构并配套比色卡和采样杯构成的检测装置明显不同，另外本检测提供了微量尿白蛋白检测的全套装置，不需要其它任何配件即能实现检测，而以上两个专利只提供了实现微量尿白蛋白检测的部分部 件。
【发明内容】
[0009]本实用新型的目的是提供一种半定量微量尿白蛋白快速检测装置，具有半定量检测能力，操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、经济实用。检测装置不需要其它任何配件即能实现检测，特别适合于个人的自测。具体内容如下:
[0010]一种半定量微量尿白蛋白快速检测装置，其特征在于装置由微量尿白蛋白胶体金半定量检测试纸笔(I)、配套比色卡(2)和采样杯(3)构成；微量尿白蛋白胶体金半定量检测试纸笔由外部的卡壳内部的试纸组成；采样杯是可以装载3-10ml尿液的塑料容器。配套比色卡是白色背景上印有系列不同深浅红色线条的卡片，用于对检测结果的对比判定，不同深浅的红色线条共4条，分别对应0、20、50、200mg/L的微量尿白蛋白浓度。
[0011 ] 所述试纸由含有胶体金标记人血清白蛋白抗体的胶体金垫、包被有人血清白蛋白和抗鼠IgG的NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成；试纸的宽度为3-5_，总长度为6-9cm。样品垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板的一端至另一端依次排列。样品垫长度1.5-4.5cm ;胶体金垫长度为0.6-lcm ；NC膜长度1.8-2.5cm,吸样垫长度为1.5-2.5cm。
[0012]所述卡壳是一种塑料注塑件，包含上盖和下盖两个部分，卡壳内部可以装载宽度为3_5mm,总长度为6_9cm的试纸；卡壳上盖中间部分对应试纸NC膜设置了观察视窗,用于观察结果，卡壳下部应对试纸样品垫设置了样品窗口，用于加样；样品窗口外观为细长型结构。
[0013]所述试纸的微量尿白蛋白抗体为鼠抗单克隆抗体，和人体其它正常蛋白没有交叉反应。
[0014]所述试纸的NC膜抗体的包被过程为:以0.01MpH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)将人白蛋白(Alb)配制成l-3mg / ml的溶液,将抗鼠IgG配制成l_2mg / ml的溶液,用喷膜仪在NC膜上部和下部以1-1.5ul / cm的参数进行分别划线，包被C、T线，划线后将NC膜在干燥间，温度20-25°C，湿度小于30%，干燥3-5小时。
[0015]所述试纸的胶体金垫制备过程为:以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-40nm的胶体金溶液，制备完成后取IOOml胶体金液放在烧杯内，用0.2M K2CO3调至PH8.0,按IOOml胶体金溶液加入0.5-lmg的Alb抗体，室温搅拌2小时，加入终浓度为0.5%牛血清白蛋白，0.5%聚乙二醇20000封闭20min，12000r / m离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至75ml，按Iml溶液铺20cm2的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间，温度20-25°C，湿度小于30%，干燥3-5小时，制成胶体金垫。
[0016]所述试纸卡的装配过程为:在干燥室内，温度20_25°C，湿度小于40%，取塑料底板，将已包被的NC膜放置在塑料底板的中部粘贴，将胶体金垫裁切成合适的宽度，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫，搭胶体金垫的l_2mm粘贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫，搭胶体金垫的2-3mm粘贴；在NC膜C线一侧搭接吸样垫，搭吸样垫的l_2mm粘贴；最后用裁剪机将贴好的塑料板切成3-5_宽的试纸条，总长度为6-9cm。样品垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从左至右依次排列。样品垫长度1.5-4.5cm ;胶体金垫长度为0.6-lcm ;吸样垫长度为
1.5-2.5cm。将试纸再装入细长型或一体型塑料卡壳内，形成试剂试纸笔。
[0017]将试纸笔、配套比色卡和采样杯组合，加上外包装，即形成微量尿白蛋白快速检测>J-U ρ?α装直。
[0018]所述检测装置，检测方法为:1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸笔2)
[0019]细长型的试纸笔，可在排尿时直接将尿淋在试纸笔的样品窗口。也可以和一体型的试纸笔一样，用采样杯收集尿液，然后取100-150ul尿液加入纸笔的样品窗口。3)将试纸笔平放，计时，5-10分钟内用比色卡半定量判定结果:将试纸卡T线的颜色和比色卡上标准线的颜色深浅进行对比，半定量判定样品的浓度区间。
[0020]本实用新型的有益效果是:提供一种利用免疫胶体金技术制备的UmAlb快速测装置，特别适合个人自测或单人份检测。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
【专利附图】
【附图说明】:
[0021 ] 图1是半定量UmAlb快速检测装置结构图
[0022]附图符号说明:
[0023]1、试纸笔；2、比色卡；3、采样杯
【具体实施方式】
[0024]实施例:半定量UmAlb快速检测装置制备及检测
[0025]I主要材料
[0026]1.1Alb特异性抗体、Al`b抗原:从有资质的供应商处购买；鼠抗人IgG抗体:自制；氯金酸:Sigma公司产品；硝酸纤维素(NC)膜:Millipore公司产品；牛血清白蛋白(BSA),聚乙二醇PEG20000，水解酪蛋白=Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。
[0027]1.2临床样本由公司在相关医院获得，100份，UmAlb含量分布区间为0_500mg / L之间。
[0028]1.3卡壳、比色卡:由本公司设计，相关公司按要求生产、提供。
[0029]2 方法
[0030]2.1UmAlb抗体胶体金标记氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30_40nm的胶体金溶液，制备完成后取三份胶体金，分别用0.2M K2CO3将溶液调到pH7.5、pH8.0和pH8.5。然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每100ml溶液加入0.8mg、lmg、l.5mg将标记用UmAlb抗体缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌2小时，再加入到终浓度为0.5%的PEG2000和0.5%的BSA进行封闭20min，标记结束后以12000r / m离心，弃上清，沉淀按50%原体积复溶至不同配比的胶体金工作液中(PH8.0，含BSA，羊血清，蔗糖和表面活性剂)。然后将标记胶体金溶液按Iml溶液铺20cm2的比例加样于无纺布上，在温度20_25°C，相对湿度在〈30%的干燥间干燥3-5小时，制成胶体金垫。
[0031]2.2NC 膜包被用 0.01M pH7.4PBS 将 Alb 稀释成 Img / ml、2mg / ml、3mg / ml，鼠抗人IgG分别稀释成Img / ml、2mg / ml,然后用喷膜仪在NC膜上按1.2ul / cm进行分别划线包被，包被完成后将NC膜在在温度20-25 °C，相对湿度在〈30 %的干燥间干燥2_5小时。
[0032]2.3试纸卡组装在干燥室内，温度20_25°C，湿度小于40%，取塑料底板，将已包被的NC膜放置在塑料底板的中部粘贴，将胶体金垫裁切成合适的宽度，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫，搭胶体金垫的1_2_粘贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫，搭胶体金垫的2-3mm粘贴；在NC膜C线一侧搭接吸样垫，搭吸样垫的l_2mm粘贴；最后用裁剪机将贴好的塑料板切成3-5_宽的试纸条，总长度为6-9cm。样品垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从左至右依次排列。样品垫长度1.5-4.5cm ;胶体金垫长度为0.6-lcm ;吸样垫长度为1.5-2.5cm。将试纸再装入细长型或一体型塑料卡壳内，形成试剂试纸笔。
[0033]2.4将试纸笔、配套比色卡和采样杯组合，加上外包装，即形成微量尿白蛋白快速检测装置。
[0034]2.5试纸工艺参数调试将浓度不同标记、包被的试剂进行组合配对，制备小样，利用UmAlb标准品对试剂进行测试，寻找最佳组合。
[0035]2.6检测方法I)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸笔2)取100_150ul尿液加入纸笔的样品窗口。3)将试纸笔平放，计时，5、10、15、20分钟内用比色卡半定量判定结果:将试纸卡T线的颜色和比色卡上标准线的颜色深浅进行对比，半定量判定样品的浓度区间。
[0036]2.7临床样本检测试剂制备完成后，按检测方法对所有临床样本进行检测，并分析检测结果。
[0037]3 结果
[0038]3.1试纸参数确定根据小样的检测结果，确定了试纸的最佳标记pH值为8.0 ；Alb抗体最佳标记量为Img / 100ml胶体金溶液；最佳的胶体金工作液为20mM硼酸盐缓冲液，口!18.0，含0.5%854、10%羊血清，5%蔗糖，0.2%了￥661120;最佳包4113浓度为211^ / ml。检测结果的最佳判定时间为5-10分钟。但以上参数在制备不同批次产品时可能需要适当调整。
[0039]3.2临床样本检测对100份临床定值样本检测，区间判定结果和样本值的符合率为95%，一致性系数KappaX).85。检测结果表明制备的检测装置性能良好，适合用于个人自测或临床检测。
【权利要求】
1.一种半定量微量尿白蛋白快速检测装置，其特征在于装置由微量尿白蛋白胶体金半定量检测试纸笔(I)、配套比色卡(2)和采样杯(3)构成，微量尿白蛋白胶体金半定量检测试纸笔由外部的卡壳内部的试纸组成；采样杯是可以装载3-10ml尿液的塑料容器；配套比色卡是白色背景上印有系列不同深浅红色线条的卡片，用于对检测结果的对比判定，不同深浅的红色线条共4条，分别对应O、20、50、200mg/L的微量尿白蛋白浓度。
2.根据权利要求1所述的检测装置，其特征在于试纸由含有胶体金标记人血清白蛋白抗体的胶体金垫、包被有人血清白蛋白和抗鼠IgG的NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成；试纸的宽度为3-5_，总长度为6-9cm ;样品垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板的一端至另一端依次排列。样品垫长度1.5-4.5cm ;胶体金垫长度为0.6-lcm ;NC膜长度1.8-2.5cm,吸样塾长度为 1.5-2.5cm。
3.根据权利要求1所述的检测装置，其特征在于卡壳是一种塑料注塑件，包含上盖和下盖两个部分，卡壳内部可以装载宽度为3-5_，总长度为6-9cm的试纸；卡壳上盖中间部分对应试纸NC膜设置了观察视窗，用于观察结果，卡壳下部应对试纸样品垫设置了样品窗口，用于加样；样品窗口外观为细长型结构。
4.根据权利要求1和2所述的检测装置，其特征在于所述检测装置的微量尿白蛋白抗体为鼠抗单克隆抗体，和人体其它正常蛋白没有交叉反应。
【文档编号】G01N33/68GK203432976SQ201320487209
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年8月7日 优先权日:2013年8月7日
【发明者】李洲, 杨发青, 周鸿锐 申请人:天津中新科炬生物制药有限公司