一种液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的方法
【专利摘要】本发明公开了一种液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的方法，步骤如下：收集标本，采受试者痰液2-5ml；配制处理液，液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌痰前处理液自行配制；离心，上述痰液加入到自制的痰前处理液中，振荡若干分钟；制片，用吸管吸取痰前处理液试管底部的痰液若干毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，制片机制好后取出干燥；抗酸染色和镜检。本发明的优点是：比现有技术痰厚涂片检查抗酸杆菌阳性率提高数十倍，可以尽早发现结核病传染源，早诊断、早治疗，减轻病人负担，控制结核病的蔓延。
【专利说明】 一种液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种检查抗酸杆菌的方法，尤其涉及一种液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的方法。
【背景技术】
[0002]结核病是严重危害人类健康的慢性传染病。在结核病控制工作中，结核病细菌学检查对于发现传染源，确定诊断和制定治疗方案具有重要意义，是诊断结核病的金标准。结核病细菌学检查目前有涂片抗酸染色镜检和分离培养。涂片抗酸染色镜检是世界范围内结核病细菌学检查中使用广泛的技术，此法设备简便、操作容易，但检出阳性率较低(约5%-10%)，且近年呈下降趋势。分离培养较涂片抗酸染色镜检法敏感性、特异性强，但设备要求高，操作繁杂，培养时间长，需要2个月才报告结果，不能满足临床诊断的需要。为突破涂片抗酸染色镜检阳性率低，分离培养时间长，出结果慢的局限，国内外一直在探讨简便实用阳性率高的检查方法，但未见成功的报道。我们创新发明的液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的新技术，该技术较涂片抗酸染色检查抗酸杆菌阳性率提高数十倍，又无假阳性，可以作为诊断结核病的金标准，有推广应用的前景。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的方法，该方法比现有的涂片检查抗酸杆菌阳性率提高数十倍，可以尽早发现结核病传染源，早诊断、早治疗，减轻病人负担，控制结核病的蔓延。
[0004]本发明是这样来实现的，一种液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的方法，其特征在于方法步骤如下:
(O收集标本，采受试者痰液(胸腹水、脑脊液、尿液、支气管冲洗液，穿刺液等)2-5ml ；
(2)配制处理液，液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌标本前处理液自行配制；
(3)离心，上述标本加入到自制的痰前处理液中，振荡5-30分钟(视标本而定)，离心机2000转/分，离心2-10分钟后取出；
(4)制片，用吸管吸取经振荡离心后的标本前处理液试管底部的标本1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟后，制片机制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检；
(6)显微镜检查，用IOx目镜双目显微镜镜检(物镜用IOOx油镜)读片；
(7)镜检结果报告。
[0005]抗酸杆菌阴性(_):连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌。
[0006]抗酸杆菌阳性(报告抗酸杆菌数):1-8条/300视野。
[0007]抗酸杆菌阳性(1+):3-9条/100视野，连续观察300个视野。[0008]抗酸杆菌阳性(2+):1-9条/10视野，连续观察100个不同视野。
[0009]抗酸杆菌阳性(3+):1-9条/每视野。
[0010]抗酸杆菌阳性(4+):> 10条/每视野。
[0011]本发明的优点是:比现有技术的痰厚涂片检查抗酸杆菌阳性率提高数十倍，可以尽早发现结核病传染源，早诊断、早治疗，减轻病人负担，控制结核病的蔓延。
【具体实施方式】
[0012]以下结合本发明的实施例作进一步详细描述，但本实施例并不用于限制本发明，凡是采用本发明的相似结构及其相似变化，均应列入本发明的保护范围。
[0013]具体实施例一:
(1)收集标本。采受试者痰液2-5ml;
(2)配制处理液。液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌痰前处理液自行配制；
(3)离心。上述痰液加入到自制的痰前处理液中，振荡20-30分钟，离心机2000转/分，尚心2-10分钟后取出；
(4)制片。用吸管吸取经振荡离心后的痰前处理液试管底部的痰液1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟制片机制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检；
(6)显微镜检查，用IOx目镜双目显微镜镜检(物镜用IOOx油镜)读片；
(7)镜检结果报告。
[0014]具体实施例二:
(1)收集标本。采受试者脑脊液2-5ml;
(2)配制处理液。液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌痰前处理液自行配制；
(3)离心。上述脑脊液痰液加入到自制的痰前处理液中，振荡5-10分钟，离心机2000转/分，离心2-10分钟后取出；
(4)制片。用吸管吸取经振荡离心后的痰前处理液试管底部的脑脊液1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟后，制片机制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检；
(6)显微镜检查，用IOx目镜双目显微镜镜检(物镜用IOOx油镜)读片；
(7)镜检结果报告。
[0015]具体实施例三:
(1)收集标本。采受试者支气管冲洗液2-5ml;
(2)配制处理液。液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌痰前处理液自行配制；
(3)离心。上述支气管冲洗液痰液加入到自制的痰前处理液中，振荡10-20分钟，离心机2000转/分，离心2-10分钟后取出；
(4)制片。用吸管吸取经振荡离心后的痰前处理液试管底部的支气管冲洗液1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟后,制片机制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检；
(6)显微镜检查，用IOx目镜双目显微镜镜检(物镜用IOOx油镜)读片；
(7)镜检结果报告。
[0016]具体实施例四:
(O收集标本。受试者胸腹水l-5ml ；
(2)配制处理液。液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌痰前处理液自行配制；
(3)离心。上述胸腹水加入到自制的痰前处理液中，振荡10-20分钟，离心机2000转/分，尚心2-10分钟后取出；
(4)制片。用吸管吸取经振荡离心后的痰前处理液试管底部的胸腹水1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟后，制片机制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检；
(6)显微镜检查，用IOx目镜双目显微镜镜检(物镜用IOOx油镜)读片；
(7)镜检结果报告。
[0017]具体实施例五:
(1)收集标本。采受试者穿刺液2-5ml;
(2)配制处理液。液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌痰前处理液自行配制；
(3)离心。上述穿刺液加入到自制的痰前处理液中，振荡20-30分钟，离心机2000转/分，尚心2-10分钟后取出；
(4)制片。用吸管吸取经振荡离心后的痰前处理液试管底部的穿刺液1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟后，制片机制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检；
(6)显微镜检查，用IOx目镜双目显微镜镜检(物镜用IOOx油镜)读片；
(7)镜检结果报告。
[0018]具体实施例六:
(1)收集标本。采受试者尿液2-5ml;
(2)配制处理液。液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌痰前处理液自行配制；
(3)离心。上述尿液加入到自制的痰前处理液中，振荡5-10分钟，离心机2000转/分，尚心2-10分钟后取出；
(4)制片。用吸管吸取经振荡离心后的痰前处理液试管底部的尿液1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟后，制片机制好后取出干燥；
(5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检；
(6)显微镜检查，用IOx目镜双目显微镜镜检(物镜用IOOx油镜)读片；
(7)镜检结果报告。
[0019]试验结论:液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌方法比现有技术的痰厚涂片检查抗酸杆菌阳性率提高数十倍。
【权利要求】
1.一种液基薄层细胞涂片检查抗酸杆菌的方法，其特征在于方法步骤如下: (O收集标本，采受试者痰液(胸腹水、脑脊液、尿液、支气管冲洗液，穿刺液等)2-5ml ； (2)配制处理液，液基薄层细胞涂片查抗酸杆菌标本前处理液自行配制； (3)离心，上述标本加入到自制的痰前处理液中，振荡5-30分钟，离心机2000转/分，尚心2-10分钟后取出； (4)制片，用吸管吸取经振荡离心后的标本前处理液试管底部的标本1-2毫升，入制片仓中，制片仓放入制片机中，6-10分钟后，制片机制好后取出干燥； (5)抗酸染色，涂片干燥后，加热固定，滴加石碳酸复红染液，保持染色5-10分钟，流水轻缓冲洗，冲去染色液，滴加脱色剂，脱色1-15分钟,流水轻缓冲洗,冲去脱色液,滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水轻缓冲洗，待玻片干燥后镜检； (6)显微镜检查； (7)镜检结果报告。
【文档编号】G01N1/30GK103822815SQ201410111666
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年3月25日 优先权日:2014年3月25日
【发明者】胡望福, 周小玫, 詹国苍, 罗智勇, 刘高焦, 陈学峰, 段水莲, 刘子东, 肖人鸿, 彭江琴 申请人:吉安协和医院