心脑宁胶囊质量标准检测方法
【专利摘要】本发明公开了心脑宁胶囊质量标准检测方法，在现有质量标准的基础上增加薄层色谱法对薤白、小叶黄杨的定性鉴别和高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定。该方法稳定可靠，专一性强，提高了对产品质量的控制。
【专利说明】心脑宁胶囊质量标准检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中药，特别涉及一种心脑宁胶囊质量标准检测方法。
【背景技术】
[0002]心脑宁胶囊为一中药胶囊制剂，由银杏叶、小叶黄杨、丹参、大果木姜子、薤白构成，具有活血化气，通络止痛的作用。用于气滞血瘀的胸痹，头痛，眩晕，症见:胸闷刺痛，心悸不宁，头晕目眩等，以及冠心病、脑动脉硬化见上述症状者。
[0003]原质量标准中仅对银杏叶、丹参、大果木姜子做定性鉴别及对药品中的总黄酮醇苷含量进行测定，其不能很好的代表产品的质量。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种心脑宁胶囊质量标准检测方法，目的是解决现有技术问题，在原有质量标准的基础上增加了对薤白、小叶黄杨进行定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定，提高了产品质量。
[0005]本发明解决问题采用的技术方案是:
[0006]心脑宁胶囊质量标准检测方法，利用薄层色谱法对薤白、小叶黄杨进行定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定。
[0007]对薤白的定性鉴别包括以下步骤:取本品内容物4.5g，加正己烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加正己烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取薤白对照药材4g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯10: 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
[0008]对小叶黄杨的定性鉴别包括以下步骤:取本品内容物6g,加5ml浓氨试液与50ml甲醇，摇匀，加热回流3小时；冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加25ml水加热溶解，用氨水调节PH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加5ml三氯甲烷溶解，转移至100?200目、2g、内径I?1.5cm的中型氧化铝柱，用IOml甲醇:三氯甲烷6: 4洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1.5ml三氯甲烷溶解，即得供试品溶液。另取小叶黄杨对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液；再取黄维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液，对照药材溶液各10 μ 1，对照品溶液5 μ I,分别点于同一高效娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水10: 5: 0.5为展开齐U，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
[0009]对丹参中丹酚酸B的定量测定包括以下步骤:照中国药典2010年版附录VI D高效液相色谱法；[0010]色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-1.7%甲酸溶液(20: 10: 70)为流动相；检测波长为286nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；
[0011]对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品，加水制成每Iml分别含60 μ g的溶液，即得；
[0012]供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，超声处理(功率150W，频率20kHz) 15分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μ m)滤过，即得；
[0013]测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定；本品每粒含丹参以丹酹酸B (C36H3tlO16)计,不得少于0.9mg。
[0014]本发明的有益效果:在原有质量标准的基础上增加了对薤白、小叶黄杨进行定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定，提高了产品质量。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱一；
[0016]图2是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱二 ；
[0017]图3是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱三；
[0018]图4是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱四；
[0019]图5是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱一；
[0020]图6是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱二 ；
[0021]图7是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱三；
[0022]图8是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱四；
[0023]图9是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱五；
[0024]图10是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱六；
[0025]图11是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱七；
[0026]图12是丹酚酸B线性图。
【具体实施方式】
[0027]心脑宁胶囊
[0028]处方:银杏叶400g、小叶黄杨400g、丹参400g大果木姜子400g、薤白400g，制成
1000粒胶囊，每粒产品0.45g。
[0029]针对增加的三个检测项目，分别做了如下的测定试验:
[0030]薤白鉴别
[0031]方法为:取本品内容物4.5g，加正己烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加正己烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取薤白对照药材4g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性样品无干扰。故列入正文。[0032]1.1.1 专属性
[0033]以上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液照薄层色谱法(中国药典2010年版附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10 μ 1、对照药材溶液10 μ 1，阴性对照溶液ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，专属性好。
[0034]1.1.2 重现性
[0035]同法处理3个批号的样品，用上述确定的方法展开，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，重现性好。
[0036]1.1.3 耐用性
[0037]1.1.3.1薄层板比较
[0038]比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板、高效板和自制含0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
[0039]L L 3.2温度的比较
[0040]比较了低温(4°C )和室温环境条件下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
[0041](I)低温(4°C )条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0042]薄层板:商品硅胶G薄层板
[0043]规格:100X IOOmm
[0044]活度:三色分开
[0045]点样:样品10 μ I，对照药材10 μ I，阴性10 μ I
[0046]点样方式:点状
[0047]展开剂:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0048]展开剂用量:10ml
[0049]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0050]展距:9cm
[0051]温度:4°C
[0052]湿度:48%
[0053]薄层板上从左到右点样顺序为:
[0054]1-心脑宁胶囊(批号20130307) 2_心脑宁胶囊(批号20130316)
[0055]3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
[0056]5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
[0057]薄层色谱结果见图1。
[0058](2)室温条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0059]薄层板:商品硅胶G薄层板
[0060]规格:100X IOOmm
[0061]活度:三色分开
[0062]点样:样品10 μ I，对照药材10 μ I，阴性10 μ I[0063]点样方式:点状
[0064]展开剂:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0065]展开剂用量:10ml
[0066]展开方式:双槽展缸(13X 12cm)
[0067]展距:9cm
[0068]温度:20°C
[0069]湿度:48%
[0070]薄层板上从左到右点样顺序为:
[0071]1-心脑宁胶囊(批号20130307) 2_心脑宁胶囊(批号20130316)
[0072]3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
[0073]5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
[0074]薄层色谱结果见图2。
[0075]1.1.3.3湿度的比较
[0076]比较了低湿度(32% )和高湿度(72% )环境下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
[0077](I)低湿(32% )条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0078]薄层板:商品硅胶G薄层板
[0079]规格:100X IOOmm
[0080]活度:三色分开
[0081 ] 点样:样品10 μ I，对照药材10 μ I，阴性10 μ I
[0082]点样方式:点状
[0083]展开剂:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0084]展开剂用量:10ml
[0085]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0086]展距:9cm
[0087]温度:20°C
[0088]湿度:32%
[0089]薄层板上从左到右点样顺序为:
[0090]1-心脑宁胶囊(批号20130307) 2_心脑宁胶囊(批号20130316)
[0091]3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
[0092]5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
[0093]薄层色谱结果见图3。
[0094](2)高湿(72% )条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0095]薄层板:商品硅胶G薄层板
[0096]规格:100X IOOmm
[0097]活度:三色分开
[0098]点样:样品10 μ I，对照药材10 μ I，阴性10 μ I[0099]点样方式:点状
[0100]展开剂:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0101]展开剂用量:10ml
[0102]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0103]展距:9cm
[0104]温度:20°C
[0105]湿度:72%
[0106]薄层板上从左到右点样顺序为:
[0107]1-心脑宁胶囊(批号20130307) 2_心脑宁胶囊(批号20130316)
[0108]3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
[0109]5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
[0110]薄层色谱结果见图4。
[0111]小叶黄杨鉴别
[0112]方法为:取本品内容物6g，加5ml浓氨试液与50ml甲醇，摇匀，加热回流3小时。冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加25ml水加热溶解，用氨水调节pH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加5ml三氯甲烷溶解，转移至中型氧化铝柱(100?200目，2g，内径I?1.5cm)，用甲醇:三氯甲烷(6: 4) IOml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1.5ml三氯甲烷溶解，即得供试品溶液。另取小叶黄杨对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液，对照药材溶液各10 μ 1，对照品溶液5 μ 1，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性样品无干扰。故列入正文。
[0113]薄层色谱条件如下所示:
[0114]薄层板:高效硅胶G薄层板
[0115]规格:100X IOOmm
[0116]活度:三色分开
[0117]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ I
[0118]点样方式:条状
[0119]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0120]展开剂用量:10ml
[0121]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0122]展距:9cm
[0123]温度:20°C
[0124]湿度:48%
[0125]薄层板上从左到右点样顺序为:
[0126]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0127]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D[0128]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
[0129]薄层色谱结果见图5。
[0130]2.2.1 专属性
[0131]以上述供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液和阴性对照溶液照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10 μ 1、对照药材溶液10 μ 1，对照品溶液5 μ 1，阴性对照溶液ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，专属性好。
[0132]薄层色谱条件如下所示:
[0133]薄层板:高效硅胶G薄层板
[0134]规格:100X IOOmm
[0135]活度:三色分开
[0136]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ I
[0137]点样方式:条状
[0138]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0139]展开剂用量:10ml
[0140]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0141]展距:9cm
[0142]温度:20°C
[0143]湿度:48%
[0144]薄层板上从左到右点样顺序为:
[0145]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0146]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D
[0147]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
[0148]薄层色谱结果见图5，从结果中可看出，该鉴别小叶黄杨的方法具有良好的专属性。
[0149]2.1.2 重现性
[0150]同法处理3个批号的样品，用上述确定的方法展开，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，重现性好。
[0151 ] 薄层色谱条件如下所示:
[0152]薄层板:高效硅胶G薄层板
[0153]规格:100X IOOmm
[0154]活度:三色分开
[0155]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ I
[0156]点样方式:条状
[0157]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0158]展开剂用量:10ml[0159]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0160]展距:9cm
[0161]温度:20°C
[0162]湿度:48%
[0163]薄层板上从左到右点样顺序为:
[0164]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0165]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D
[0166]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)薄层色谱结果见图5，从结果中可看出，该鉴别小叶黄杨的方法具有良好的重现性。
[0167]2.2.3 耐用性
[0168]2.2.3.1薄层板比较
[0169]比较了青岛海洋化工厂分厂商品硅胶板、高效硅胶G薄层板。发现商品硅胶板斑点不清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。高效硅胶G薄层板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。因此采用高效硅胶G薄层板。
[0170]薄层色谱条件如下所示:
[0171 ] 薄层板:1.商品硅胶G薄层板2.高效商品硅胶G薄层板
[0172]规格:100X IOOmm
[0173]活度:三色分开
[0174]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ I
[0175]点样方式:条状
[0176]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0177]展开剂用量:10ml
[0178]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0179]展距:9cm
[0180]温度:20°C
[0181]湿度:48%
[0182]分别在商品硅胶G薄层板和高效商品硅胶G薄层板上点样，其每块薄层板上从左至右的点样顺序如下所示:
[0183]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0184]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D
[0185]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
[0186]薄层色谱结果分别见图6 (采用商品硅胶G薄层板)、图7 (采用高效商品硅胶G薄层板)，从结果中可看出，高效硅胶G薄层板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。因此采用高效硅胶G薄层板。
[0187]2.2.3.2温度的比较
[0188]比较了低温(4°C )和室温环境条件下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
[0189](I)低温(4°C )条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0190]薄层板:高效商品硅胶G薄层板[0191]规格:100X 100mm
[0192]活度:三色分开
[0193]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ I
[0194]点样方式:条状
[0195]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0196]展开剂用量:10ml
[0197]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0198]展距:9cm
[0199]温度:4°C
[0200]湿度:48%
[0201]薄层板上从左至右的点样顺序如下所示:
[0202]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0203]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D
[0204]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
[0205]薄层色谱结果见图8，证明该检测方法在低温条件下具有良好的耐用性。
[0206](2)室温条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0207]薄层板:高效商品硅胶G薄层板
[0208]规格:100X IOOmm
[0209]活度:三色分开
[0210]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ I
[0211]点样方式:条状
[0212]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0213]展开剂用量:10ml
[0214]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0215]展距:9cm
[0216]温度:20°C
[0217]湿度:48%
[0218]薄层板上从左至右的点样顺序如下所示:
[0219]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0220]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D
[0221]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
[0222]薄层色谱结果见图9，证明该检测方法在低温条件下具有良好的耐用性。
[0223]2.2.3.3湿度的比较
[0224]比较了低湿度(32% )和高湿度(72% )环境下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
[0225](I)低湿(32% )条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0226]薄层板:高效商品硅胶G薄层板
[0227]规格:100X IOOmm[0228]活度:三色分开
[0229]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ μ I
[0230]点样方式:条状
[0231]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0232]展开剂用量:10ml
[0233]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0234]展距:9cm
[0235]温度:20°C
[0236]湿度:32%
[0237]薄层板上从左至右的点样顺序如下所示:
[0238]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0239]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D
[0240]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
[0241]薄层色谱结果见图10，证明该检测方法在低湿条件下具有良好的耐用性。
[0242](2)高湿度(72% )条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示:
[0243]薄层板:高效商品硅胶G薄层板
[0244]规格:100X IOOmm
[0245]活度:三色分开
[0246]点样:样品10 μ 1，对照药材10 μ 1，对照品5 μ 1，阴性10 μ I
[0247]点样方式:条状
[0248]展开剂:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0249]展开剂用量:10ml
[0250]展开方式:双槽展缸(13 X 12cm)
[0251]展距:9cm
[0252]温度:20°C
[0253]湿度:72%
[0254]薄层板上从左至右的点样顺序如下所示:
[0255]1-心脑宁胶囊(批号20130313) 2_心脑宁胶囊(批号20130120)
[0256]3-心脑宁胶囊(批号20130325) 4_环维黄杨星D
[0257]5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
[0258]薄层色谱结果见图11，证明该检测方法在高湿条件下具有良好的耐用性。丹参中丹酚酸B的含量测定。
[0259]3.1.1仪器与试剂高效液相色谱仪:美国戴安3000高效液相色谱仪，带四元泵；VWD可变波长紫外检测器；在线真空脱气机；智能化柱温箱；色谱柱=Thermo C18150X4.6mm
[0260]丹酚酸B对照品(供含量测定用):购于中国药品生物制品检定所，批号111562-201212
[0261]甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其它试剂为分析纯。[0262]3.1.2丹酚酸B对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B (含量以95.4 %计)对照品5.920mg,置100mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含丹酚酸B56.477 μ g)。
[0263]3.1.3供试品溶液制备方法的选择
[0264]取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，分别超声处理(功率150W，频率20kHz) 15分钟和30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μ m)滤过，即得。
[0265]表1提取方法的选择
[0266]
【权利要求】
1.心脑宁胶囊质量标准检测方法，其特征在于:增加了利用薄层色谱法对薤白、小叶黄杨的定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定。
2.如权利要求1中所述的心脑宁胶囊质量标准检测方法，其特征在于:对薤白的定性鉴别包括以下步骤:取本品内容物4.5g，加正己烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加正己烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取薤白对照药材4g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各IOy 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯10: 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
3.如权利要求1中所述的心脑宁胶囊质量标准检测方法，其特征在于:对小叶黄杨的定性鉴别包括以下步骤:取本品内容物6g,加5ml浓氨试液与50ml甲醇,摇勻,加热回流3小时；冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加25ml水加热溶解，用氨水调节pH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加5ml三氯甲烷溶解，转移至100?200目、2g、内径I?1.5cm的中型氧化铝柱，用IOml甲醇:三氯甲烷6: 4洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1.5ml三氯甲烷溶解，即得供试品溶液；另取小叶黄杨对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液；再取黄维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液，对照药材溶液各10 μ 1，对照品溶液5 μ 1，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水10: 5: 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
4.如权利要求1中所述的心脑宁胶囊质量标准检测方法，其特征在于:对丹参中丹酚酸B的定量测定包括以下步骤: 照高效液相色谱法； 色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-1.7%甲酸溶液(20: 10: 70)为流动相；检测波长为286nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品，加水制成每Iml分别含60 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，超声处理(功率150W，频率20kHz) 15分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μ m)滤过，即得； 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定；本品每粒含丹参以丹酚酸B(C36H30016)计，不得少于0.9mg。
【文档编号】G01N30/88GK104007216SQ201410205673
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年5月16日 优先权日:2014年5月16日
【发明者】简卫光 申请人:贵州安泰药业有限公司