一种外用治疗干眼症的中药组合物的检测方法
【专利摘要】本发明提供一种治疗干眼症的中药组合物眼贴制剂的检测方法，其原料药组成为：枸杞子、菊花、丹参、黄柏、珍珠粉、冰片、薄荷脑。本发明检测方法专属性强，精密度、稳定性、重复性良好。
【专利说明】一种外用治疗干眼症的中药组合物的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药组合物检测方法，具体涉及一种外用治疗干眼症的中药组合 物的检测方法，属于中医药领域。
【背景技术】
[0002] 干眼症（Dry eye syndrome)，又名角结膜干燥症（Xerophthalmia)，是多种因素所 致的一种泪液和眼表疾病，包括眼表不适症状，视力变化和泪膜不稳定并且有潜在的眼表 损害，伴随泪液渗透压升高和眼表炎症反应。常见的症状为：干涩感、异物感、烧灼感、痒 感、畏光、眼红、视物模糊、视力波动等。严重干眼者可引起视力明显下降从而影响其正常的 工作和生活，甚至导致失明。目前治疗干眼症的常规方法是滴具有润滑功能的眼药水或人 工泪液缓解症状。新的治疗方法则是针对干眼症潜在的病因而不是单纯的缓解症状。资料 显示，干眼症的发病与炎症、泪腺腺泡细胞和眼表上皮细胞的凋亡、性激素失调、血流动力 学改变、血液循环障碍、组织血流量降低等因素有密切关系。
[0003] 干眼症与中医的"白涩症"，"干涩昏花症"，"神水将枯症"类似，中医认为干眼症属 燥证范畴，燥邪损伤气血津液，而使阴津耗损，气血亏虚不能上荣于目，目失濡养出现一系 列症状。多种原因导致脏腑经络失调是产生干眼症的关键因素。
[0004] 干眼症（xerophthalmia)可分为以下两类：①泪液不足型干眼，水液性泪液生成 不足而引起的Siogren综合征，许多全身因素可引起该类干眼；②蒸发过强型干眼，主要由 于脂质腺分泌异常（量或质的异常）而引起，如眼睑的缺损或异常或睑缘炎等引起蒸发量 增加。临床上以泪液不足型干眼最为常见。临床主要表现为眼睛干涩、灼热、异物感、波动 感、眼红、畏光、分泌物增多、视力模糊、视疲劳等；严重时还会引起角膜表面磨损、丝状角膜 炎、角膜溃疡，最终导致视力下降以至于视力丧失等严重后果。属于中医"神水将枯"、"神 气枯痒"、"干涩昏花"等病证的范畴。由于环境污染日益严重、人口老龄化进一步加剧，尤其 是佩戴各种角膜接触镜的人数的迅速增加以及计算机终端操作的日渐普遍，干眼症的发病 率日趋上升，已成为眼科疾病中发病率最高的眼表疾病之一。
[0005] 中国专利申请201010194077. 9公开了一种治疗干眼症的中药组合物，其原料药 包含：菊花、枸杞子、黄柏、丹参、珍珠、冰片、薄荷脑。具体用量配比可以为：菊花2. 5-3份、 枸杞子2. 5-3份、黄柏2. 5-3份、丹参1. 5-2份、珍珠0. 08-0. 1份、冰片0. 08-0. 1份、薄荷 脑0. 15-0. 2份。该组合物可以制成湿敷剂，但该湿敷制剂皮肤顺应性不佳，且不利于有效 成分的吸收。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种治疗干眼症疗程短、效果佳的中药眼贴制剂的检测方 法。
[0007] 本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
[0008] -种治疗干眼症的中药眼贴制剂的检测方法，该方法包括如下鉴别方法和/或含 量测定中的一种或几种：
[0009]鉴别 A :
[0010] 该鉴别方法包括如下步骤：
[0011] 步骤a，取眼贴内容物，加水提取，提取液以与水互不相溶的有机溶剂萃取，取萃取 液制备供试品溶液；
[0012] 步骤b，取枸杞子药材，加水提取，提取液以与水互不相溶的有机溶剂萃取，取萃取 液制备对照药材溶液；
[0013] 步骤c，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以 25-35:5-15:0.5-2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，置紫外灯下检视；供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0014] 鉴别 B:
[0015] 该鉴别方法包括如下步骤：
[0016] 步骤a，取眼贴内容物，加水提取，提取液以与水互不相溶的有机溶剂萃取，取萃取 液制备供试品溶液；
[0017] 步骤b，取盐酸小檗碱和盐酸巴马汀对照品，以与水互溶的有机溶剂制备成对照品 溶液；
[0018] 步骤c，取黄柏药材，以与水互溶的有机溶剂提取，制备成对照药材溶液；
[0019] 步骤d，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以 5-10:0.5-2:1-4的正丁醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，置紫外灯下下检视；供试品色 谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0020] 鉴别 C :
[0021] 该鉴别方法包括如下步骤：
[0022] 步骤a，取眼贴内容物，加有机酸和与水互不相溶的有机溶剂提取，制备供试品溶 液；
[0023] 步骤b，取丹酚酸B对照品，以与水互溶的有机溶剂制备成对照品溶液；
[0024] 步骤c，取丹参药材，加水提取，提取液加有机酸和与水互不相溶的有机溶剂提取， 制备对照药材溶液；
[0025] 步骤d，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以 1-5:1-5:2-8:0. 5-2:1-4的甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，喷以 三氯化铁醇溶液显色；供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显示 相同颜色的斑点。
[0026] 鉴别 D :
[0027] 该鉴别方法包括如下步骤：
[0028] 步骤a，取眼贴内容物，加有机酸和与水互不相溶的有机溶剂提取，制备供试品溶 液；
[0029] 步骤b，取木犀草苷对照品，以与水互溶的有机溶剂制备成对照品溶液；
[0030] 步骤c，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以 0. 5-2:0. 5-2的甲醇-甲酸为展开剂，展开，喷以三氯化铁醇溶液显色；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0031] 含量测定：
[0032] 该含量测定方法包括如下步骤：
[0033] 色谱条件：以乙腈（A)-磷酸水溶液⑶为流动相，检测波长为250_300nm ;
[0034] 洗脱程序为：0?17min，流动相为A :B = 20-25:80-75 ;
[0035] 17 ?18min，流动相由 A :B = 20-25 :80-75 到 A :B = 75-85:25-15 ;
[0036] 18 ?23min，流动相为 A :B = 75-85:25-15 ;
[0037] 对照品溶液制备：取丹酚酸B对照品，加甲醇制备成对照品溶液；
[0038] 供试品溶液制备：取眼贴内容物，以甲醇提取，制备成供试品溶液；
[0039] 测定法：分别吸取对照品和供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法 测定，即得；
[0040] 相当于原药材2-5g的眼贴内容物含丹参以丹酚酸B(C36H3(l0 16)计，应为不低于 0. 6mg〇
[0041] 进一步，上述鉴别和含量测定方法中所述与水互不相溶的有机溶剂选自乙醚、石 油醚、正己烷、乙酸乙酯、三氯甲烷的任意一种或几种；
[0042] 所述与水互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮的任意一种或几种；
[0043] 所述有机酸选自甲酸、乙酸中的任意一种。
[0044] 进一步，上述含量测定方法中流动相B为0. 05-0. 3 %磷酸水溶液；
[0045] 检测波长为286nm ;
[0046] 洗脱程序为：0?17min，流动相为A :B = 22:78 ;
[0047] 17 ?18min，流动相由 A :B = 22:78 到 A :B = 80:20 ;
[0048] 18 ?23min，流动相为 A :B = 80:20。
[0049] 更进一步，本发明眼贴内容物检测方法包括如下鉴别方法和/或含量测定方法中 的一种或几种：
[0050] 鉴别A :取相当于原药材2_5g的眼贴内容物，加水超声处理，水液加三氯甲烷振摇 提取，提取液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为供试品溶液；取枸杞子对照药材0. 2-lg，加水 煎煮，离心，取上清液，加三氯甲烷振摇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为对照 品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分 别点于同一娃胶G薄层板上，以25-35:5-15:0. 5-2的三氯甲烧-乙酸乙酯-甲醇为展开 齐U，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的 位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0051] 鉴别B :取相当于原药材2-5g的眼贴内容物，加水超声处理，水液加三氯甲烷振摇 提取，提取液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱和盐酸巴马汀对 照品，加甲醇制成每lml含盐酸小檗碱、盐酸巴马汀各0. 2-lmg的混合溶液，作为对照品溶 液；另取黄柏对照药材〇. 05-0. 2g，加甲醇2-8ml，超声提取，提取液滤过，滤液作为对照药 材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版附录VIB)试验，吸取上述对照品溶液和供试品 溶液各5 μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以5-10:0. 5-2:1-4的正丁醇-甲酸-水为展 开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0052] 鉴别C :取相当于原药材12-30g的眼贴内容物，加甲酸0. 5-2mL，加乙醚20-40ml 振摇提取，提取液低温挥干乙醚，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对 照药材〇. 5-2g，加水煎煮，滤过，滤液加甲酸0. 5-2mL，加乙醚20-40ml振摇提取，提取 液低温挥干乙醚，残渣加甲醇lmL使溶解，作为对照药材溶液；再取丹酚酸B对照品，力口 甲醇制成每lmL含丹酚酸Bl-3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典 2010年版附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 1-5:1-5:2-8:0. 5-2:1-4的甲苯：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药 材色谱和对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；
[0053] 鉴别D :取相当于原药材12-30g的眼贴内容物，加甲酸0. 5-2mL，加乙醚20-40ml 振摇提取，提取液低温挥干乙醚，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液；取木犀草苷对 照品，加甲醇制成每lmL含木犀草苷0. 1-0. 4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法 (中国药典2010年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一聚酰胺薄膜 上，以0. 5-2:0. 5-2的甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 %三氯化铁乙醇溶液， 在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色 的斑点；
[0054] 含量测定：色谱条件：以乙腈（A)-0. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相，洗脱程序为： 0?17min，等度洗脱，流动相为A :B = 22:78 ;17?18min，梯度洗脱，流动相由A :B = 22:78 到A :B = 80:20 ; 18?23min，等度洗脱，流动相为A :B = 80:20 ;检测波长为286nm ;
[0055] 对照品溶液制备：取丹酚酸B对照品，加甲醇制备成每1ml含30-50 μ g的对照品 溶液；
[0056] 供试品溶液制备：取相当于原药材0. 5-3g的眼贴内容物，置于25ml量瓶中，加甲 醇约20ml，超声处理，用甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得；
[0057] 测定法：分别吸取对照品和供试品溶液各5 μ 1，注入高效液相色谱仪，照高效液 相色谱法测定，即得；
[0058] 相当于原药材2_5g的眼贴内容物含丹参以丹酚酸B(C36H3(l0 16)计，应为不低于 0. 6mg〇
[0059] 本发明所述中药眼贴制剂的原料药组成为：
[0060] 枸杞子250-300重量份、菊花250-300重量份、丹参150-200重量份、黄柏250-300 重量份、珍珠粉8-10重量份、冰片0. 1-10重量份、薄荷脑0. 2-20重量份。
[0061] 进一步，其原料药组成为：
[0062] 枸杞子250-300重量份、菊花250-300重量份、丹参150-200重量份、黄柏250-300 重量份、珍珠粉8-10重量份、冰片0. 1-2重量份、薄荷脑0. 2-4重量份；
[0063] 或，枸杞子250-300重量份、菊花250-300重量份、丹参150-200重量份、黄柏 250-300重量份、珍珠粉8-10重量份、冰片8-10重量份、薄荷脑15-20重量份。
[0064] 本发明中药组合物眼贴制剂的制备方法为：取枸杞子、菊花、丹参、黄柏加水煎煮， 滤过，滤液浓缩，冷却至室温，加入乙醇使含醇量达到40-80%，冷藏静置，滤过，回收乙醇得 清膏，备用；取珍珠粉，以乳酸水解制备成珍珠水解液，备用；以上清膏与珍珠水解液合并， 加水稀释制成药液；加入冰片、薄荷脑，灌装，灭菌，即得。
[0065] 本发明检测方法中所述"相当于原药材…g的中药组合物制剂"是指中药组合物制 剂与原药材在重量或体积上的对应关系。如lOOOg原药材可制成中药组合物外用眼贴药液 1000ml，即lml药液相当于原药材lg，那么"取相当于原药材3g的中药组合物制剂"即取外 用眼贴药液3ml。
【专利附图】
【附图说明】
[0066] 图1丹酚酸B紫外吸收图
[0067] 图2丹酚酸B对照品色谱图
[0068] 图3杞菊润目贴供试品色谱图
[0069] 图4缺丹参阴性供试品色谱图
[0070] 图5丹酚酸B线性曲线图
[0071] 实验例1含量测定方法学考察
[0072] 1.仪器与试剂
[0073] 仪器：AgilentllOO高效液相色谱仪；
[0074] 色谱柱：Agilent Zorbax SB-C184. 6mmX 250mm，5 μ m ;
[0075] 对照品：丹酚酸B由中国食品药品检定研究院（供含量测定用，批号 111562-200504)；
[0076] 供试品：批号：101201、101202、101203,均按实施例1方法制备。
[0077] 其他试剂：乙腈：色谱纯；水：超纯水；其它试剂均为分析纯。
[0078] 2.方法与结果
[0079] 2. 1色谱条件：
[0080] 流动相：乙腈-0.1 %磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序见表1 ;
[0081] 流速：lmL/min ;检测波长：286nm ;
[0082] 色谱柱的理论板数按丹酚酸B峰峰计算，应不低于5000。
[0083] 表1梯度洗脱程序
[0084]
[0085]
【权利要求】
1. 一种治疗干眼症的中药眼贴制剂的检测方法，该方法包括如下鉴别方法和/或含量 测定中的一种或几种： 鉴别A : 该鉴别方法包括如下步骤： 步骤a，取眼贴内容物，加水提取，提取液以与水互不相溶的有机溶剂萃取，取萃取液制 备供试品溶液； 步骤b，取枸杞子药材，加水提取，提取液以与水互不相溶的有机溶剂萃取，取萃取液制 备对照药材溶液； 步骤c，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以 25-35:5-15:0. 5-2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，置紫外灯下检视；供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 鉴别B : 该鉴别方法包括如下步骤： 步骤a，取眼贴内容物，加水提取，提取液以与水互不相溶的有机溶剂萃取，取萃取液制 备供试品溶液； 步骤b，取盐酸小檗碱和盐酸巴马汀对照品，以与水互溶的有机溶剂制备成对照品溶 液； 步骤c，取黄柏药材，以与水互溶的有机溶剂提取，制备成对照药材溶液； 步骤d，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以 5-10:0.5-2:1-4的正丁醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，置紫外灯下下检视；供试品色 谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 鉴别C : 该鉴别方法包括如下步骤： 步骤a，取眼贴内容物，加有机酸和与水互不相溶的有机溶剂提取，制备供试品溶液； 步骤b，取丹酚酸B对照品，以与水互溶的有机溶剂制备成对照品溶液； 步骤c，取丹参药材，加水提取，提取液加有机酸和与水互不相溶的有机溶剂提取，制备 对照药材溶液； 步骤d，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以 1-5:1-5:2-8:0. 5-2:1-4的甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，喷以 三氯化铁醇溶液显色；供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显示 相同颜色的斑点。 鉴别D : 该鉴别方法包括如下步骤： 步骤a，取眼贴内容物，加有机酸和与水互不相溶的有机溶剂提取，制备供试品溶液； 步骤b，取木犀草苷对照品，以与水互溶的有机溶剂制备成对照品溶液； 步骤c，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以 0. 5-2:0. 5-2的甲醇-甲酸为展开剂，展开，喷以三氯化铁醇溶液显色；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 含量测定： 该含量测定方法包括如下步骤： 色谱条件：以乙腈（A)-磷酸水溶液（B)为流动相，检测波长为250-300nm ; 洗脱程序为：〇?17min，流动相为A :B = 20-25:80-75 ; 17 ?18min，流动相由 A :B = 20-25 :80-75 到 A :B = 75-85:25-15 ; 18 ?23min，流动相为 A :B = 75-85:25-15 ; 对照品溶液制备：取丹酚酸B对照品，加甲醇制备成对照品溶液； 供试品溶液制备：取眼贴内容物，以甲醇提取，制备成供试品溶液； 测定法：分别吸取对照品和供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定， 即得； 其中，所述中药眼贴制剂的原料药组成为： 枸杞子250-300重量份、菊花250-300重量份、丹参150-200重量份、黄柏250-300重 量份、珍珠粉8-10重量份、冰片0. 1-10重量份、薄荷脑0. 2-20重量份。
2. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述与水互不相溶的有机溶剂选自乙 醚、石油醚、正己烷、乙酸乙酯、三氯甲烷的任意一种或几种；所述与水互溶的有机溶剂选自 甲醇、乙醇、丙酮的任意一种或几种；所述有机酸选自甲酸、乙酸中的任意一种。
3. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含量测定方法中流动相B为 0.05-0. 3 %磷酸水溶液。
4. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测波长为286nm。
5. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述洗脱程序为： 0 ?17min，流动相为 A :B = 22:78 ; 17 ?18min，流动相由 A :B = 22:78 到 A :B = 80:20 ; 18 ?23min，流动相为 A :B = 80:20。
6. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别方法和/或含量测 定方法中的一种或几种： 鉴别A :取相当于原药材2-5g的眼贴内容物，加水超声处理，水液加三氯甲烷振摇提 取，提取液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为供试品溶液；取枸杞子对照药材0. 2-lg，加水煎 煮，离心，取上清液，加三氯甲烷振摇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为对照品 溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别 点于同一娃胶G薄层板上，以25-35:5-15:0. 5-2的三氯甲烧-乙酸乙酯-甲醇为展开剂， 展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，显相同颜色的荧光斑点； 鉴别B :取相当于原药材2-5g的眼贴内容物，加水超声处理，水液加三氯甲烷振摇提 取，提取液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱和盐酸巴马汀对照 品，加甲醇制成每lml含盐酸小檗碱、盐酸巴马汀各0. 2-lmg的混合溶液，作为对照品溶液； 另取黄柏对照药材〇. 05-0. 2g，加甲醇2-8ml，超声提取，提取液滤过，滤液作为对照药材溶 液；照薄层色谱法（中国药典2010年版附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液和供试品溶 液各5 μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以5-10:0. 5-2:1-4的正丁醇-甲酸-水为展开 齐U，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的荧光斑点； 鉴别c :取相当于原药材12-30g的眼贴内容物，加甲酸0. 5-2mL，加乙醚20-40ml振摇 提取，提取液低温挥干乙醚，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材 0. 5-2g，加水煎煮，滤过，滤液加甲酸0. 5-2mL，加乙醚20-40ml振摇提取，提取液低温挥干 乙醚，残渣加甲醇lmL使溶解，作为对照药材溶液；再取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每lmL 含丹酚酸Bl-3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版附录VIB)试 验，吸取上述三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1-5:1-5:2-8:0. 5-2:1-4 的甲苯：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙 醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相 应的位置上，显示相同颜色的斑点； 鉴别D :取相当于原药材12-30g的眼贴内容物，加甲酸0. 5-2mL，加乙醚20-40ml振摇 提取，提取液低温挥干乙醚，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液；取木犀草苷对照品， 加甲醇制成每lmL含木犀草苷0. 1-0. 4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国 药典2010年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一聚酰胺薄膜上， 以0.5-2:0. 5-2的甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，在 l〇5°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点； 含量测定：色谱条件：以乙腈（A)-0. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相，洗脱程序为：0? 17min，流动相为 A :B = 22:78 ; 17 ?18min，流动相由 A :B = 22:78 到 A :B = 80:20 ; 18 ? 23min，流动相为A :B = 80:20 ;检测波长为286nm ; 对照品溶液制备：取丹酚酸B对照品，加甲醇制备成每lml含30-50 μ g的对照品溶液； 供试品溶液制备：取相当于原药材〇. 5-3g的眼贴内容物，置于25ml量瓶中，加甲醇约 20ml，超声处理，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别吸取对照品和供试品溶液各5 μ 1，注入高效液相色谱仪，照高效液相色 谱法测定，即得。
【文档编号】G01N30/02GK104280506SQ201410268761
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年6月16日 优先权日:2013年7月3日
【发明者】张晓娟 申请人:郑州市新视明科技工程有限公司