卡泊三醇的中间体Mb及其杂质的分离测定方法
【专利摘要】本发涉及一种卡泊三醇的中间体Mb及其杂质的分离测定方法。该方法采用多孔硅胶微粒或十八烷基键合多孔硅胶为填充剂的色谱柱，以乙酸乙酯-正己烷或者三氯甲烷-乙腈或者水-乙醇为流动相，进行了Mb及其杂质：Mb的20S-异构体、E、D、F、VD2、Mb的1β-异构体和I(Ma)的分离测定。该方法不仅能够实现Mb及杂质的有效分离，还能够准确测定Mb及其杂质的含量，专属性强，准确度高；该操作方法简单，具有简便、快速的优点。
【专利说明】卡泊三醇的中间体Mb及其杂质的分离测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析化学领域，特别涉及一种卡泊三醇的中间体Mb及其杂质的分离 测定方法。
【背景技术】
[0002] 卡泊三醇是维生素D的衍生物，能抑制皮肤细胞（角朊细胞）的过度增生和诱导 其分化，从而使银肩病皮肤细胞的增生及分化异常得以纠正。Mb是合成卡泊三醇的一个 重要的中间体，化学名称：（S) -2- ((3R，3aR，7E，7aS)-八氢-7- ((E) -2- ((3S，5R) -3, 5-双 [[叔丁基二甲基硅]氧基]-2-亚甲基环己亚基]乙烯基]-3a-甲基-IH-茚-3-基）丙 醛；英文名称：（S) -2- ((3R, 3aR, 7E, 7aS) -octahydro-7- ((E) -2- ((3S, 5R) -3, 5-Bis [ [ (ter t-butyI)dimethylsi Iy1]oxy]-2-methylenecyclohexyIidene)ethylidene)-3a_methy1-1 H-inden_3-yl)propanal ;其结构式如下：
[0003]
【权利要求】
1. 一种高效液相色谱法分离如下式所示的Mb及其杂质的方法，其特征在于：所述方法 采用多孔硅胶微粒或十八烷基键合多孔硅胶为填充剂的色谱柱进行分离；
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述杂质包括如下所示的Mb的20S-异 构体、E、D、F、VD2、Mb的 1 0 -异构体和I(Ma):
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法以乙酸乙酯-正己烷或者三氯 甲烧-乙腈或者水-乙醇为流动相。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述色谱柱的规格为4. 6X250mm，5ym 或4X250mm, 5ym;所述流动相的流速为0? 8-2.Oml/min。
5. 根据权利要求2至4任一项所述的方法，其特征在于： 针对所述Mb、Mb的20S-异构体和E进行分离时，以乙酸乙酯：正己烷体积比2:98为 流动相； 针对所述Mb、D和F进行分离时，以三氯甲烷：乙腈体积比8:92为流动相； 针对所述VD2、Mb的1 0 -异构体和I(Ma)进行分离时，以水：乙醇体积比10:90为流 动相。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于： 针对所述Mb、Mb的20S-异构体和E进行分离时，设置流动相流速为1. 5ml/min; 针对所述Mb、D和F进行分离时，设置流动相流速为2.Oml/min; 针对所述VD2、Mb的1 0 -异构体和I(Ma)进行分离时，设置流动相流速为0. 8ml/min。
7. -种高效液相色谱法分离测定Mb及其杂质的方法，其特征在于：在权利要求5所述 的方法的基础上，在波长272nm进行检测。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于：采用自身对照法进行分析并计算各成分 含量。
9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于： 针对所述Mb、Mb的20S-异构体和E进行分离测定时，包括以下步骤： (1) E定位溶液：称取杂质E约5mg加稀释剂溶解制成0.lmg/mLE定位溶液； (2)Mb的20S-异构体定位溶液：称取杂质Mb的20S-异构体约5mg加稀释剂溶解制成 0.lmg/mL20S-异构体定位溶液； (3)Mb对照品定位溶液：称取对照品Mb约15mg加稀释剂溶解制成0. 6mg/mLMb对照 品定位溶液； (4) 供试品溶液：取供试品约15mg加稀释剂溶解制成0. 6mg/mL供试品溶液； (5) 自身对照溶液：精密移取供试品溶液1. 0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解制成 0? 006mg/mL自身对照溶液； (6) 测定方法：设置流动相流速为1. 5ml/min，分别取上述溶液20y1进样，记录色谱 图，按自身对照法计算各杂质的含量； 针对所述Mb、D和F进行分离测定时，包括以下步骤： (1) D定位溶液：称取杂质D约5mg加稀释剂溶解制成0.lmg/mLD定位溶液； (2)F定位溶液：称取杂质F约5mg加稀释剂溶解制成0.lmg/mLF定位溶液； (3)Mb对照品定位溶液：称取对照品约10mg加稀释剂溶解制成lmg/mLMb对照品定位 溶液； (4) 供试品溶液：取供试品适量，加稀释剂溶解制成lmg/ml供试品溶液； (5) 杂质D贮备液：取杂质D适量，加稀释剂溶解制成0.lmg/ml杂质D贮备液； (6) 杂质F贮备液：取杂质F适量，加稀释剂溶解制成0.lmg/ml杂质F贮备液； (7) 对照品溶液：分别精密移取杂质D贮备液和杂质F贮备液各1. 0ml，加稀释剂溶解 制成0. 00lmg/ml对照品溶液； (8) 测定方法：设置流动相流速为2.Oml/min，分别取上述溶液20y1进样，记录色谱 图，比较供试品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积； 针对所述VD2、Mb的1 0 -异构体和I(Ma)进行分离测定时，包括以下步骤： (1) VD2定位溶液：称取杂质VD2约5mg加稀释剂溶解制成0.lmg/mLVD2定位溶液； (2) I(Ma)定位溶液：称取杂质I(Ma) 5mg加稀释剂溶解制成0?lmg/mLI(Ma)定位溶 液； (3)Mb的113 -异构体定位溶液：称取杂质Mb的113 -异构体5mg加稀释剂溶解制成 0.lmg/mLMb的113 -异构体定位溶液； (4) 供试品溶液：取供试品适量，加稀释剂溶解制成lmg/ml供试品溶液； (5) 杂质Mb的1 0 -异构体贮备液：取杂质1 0 -异构体适量，加稀释剂溶解制成0.lmg/ml杂质113 -异构体备液； (6) 对照品溶液：精密移取杂质1 0异构体贮备液1. 0ml，加稀释剂溶解制成0.OOlmg/ ml对照品溶液； (7) 测定方法：设置流动相流速为0. 8ml/min，分别取上述溶液20y1进样，记录色谱 图，比较供试品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积； 所述稀释剂为相应的流动相或流动相中的一种有机溶剂。
10. -种固定相及流动相在分离和/或测定Mb及其杂质的色谱法中的应用，所述固定 相为多孔硅胶微粒或十八烷基键合多孔硅胶，所述流动相为乙酸乙酯-正己烷或者三氯甲 烧 -乙腈或者水-乙醇。
【文档编号】G01N30/06GK104478921SQ201410766997
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】曾正英, 周春燕 申请人:重庆华邦制药有限公司