基于埃德曼降解的蛋白质C-末端肽富集方法与流程

文档序号:12611407阅读:来源:国知局

技术特征:

1.基于埃德曼降解的蛋白质C-末端肽富集方法,其特征在于:使用在赖氨酸之后进行酶切的蛋白酶对蛋白样品进行酶解,使产生的蛋白质非C-末端肽的C末端带有一个赖氨酸,而蛋白质C-末端肽不含有赖氨酸;

酶解后产生的肽段使用带有理化性质改变功能团和异硫氰酸酯功能团的氨基反应试剂进行标记;

标记完成后,在强酸性条件下进行埃德曼降解,使肽段的N端第一个氨基酸从肽段上断裂下来;

蛋白质非C-末端肽由于其C末端赖氨酸侧链氨基被标记上理化性质改变功能团,其化学物理性质与蛋白质C-末端肽存在显著差异;

利用这一差异对蛋白质非C-末端肽进行选择性吸附,从而富集得到蛋白质C-末端肽。

2.按照权利要求1所述的蛋白质样品,包括:组织、细胞、血浆、标准蛋白中的一种或二种以上等各种来源的蛋白质样品。

3.按照权利要求1所述的方法,其特征在于:使用在赖氨酸之后进行酶切的蛋白酶对蛋白样品进行酶解;蛋白酶包括Lys-C等任意一种在赖氨酸之后进行酶切的蛋白酶。

4.按照权利要求1所述的方法,其特征在于:对多肽的N端氨基和赖氨酸侧链氨基,使用带有理化性质改变功能团和异硫氰酸酯功能团的氨基反应试剂进行标记。

5.按照权利要求1所述的方法,其特征在于:对标记后的肽段,使用埃德曼降解反应,在三氟乙酸溶液中,使肽段的N端第一个氨基酸从肽段上断裂下来。

6.按照权利要求1所述的方法,其特征在于:为了实现蛋白质C-末端肽的分离,利用蛋白质非C-末端肽与蛋白质C-末端肽在化学物理性质上的显著差异,对蛋白质非C-末端肽进行选择性吸附,从而富集得到蛋白质C-末端肽;吸附材料选取与理化性质改变功能团吸附的材料,理化性质改变功能团包括亲水性、疏水性、带电性、亲和性及分子体积中的一种或两种以上。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1