本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及一种分析茶叶中含氮化合物的方法，特别是一种碧螺春绿茶中含氮化合物的检测方法。
背景技术：
碧螺春绿茶是我国的传统名茶，距今已有1000多年历史，其工艺流程分为鲜叶、杀青、揉捻和干燥四个步骤。其具有条索纤细、卷曲成螺，满身披毫，银白隐翠，香气浓郁，滋味鲜醇甘厚，汤色碧绿清澈，叶底嫩绿明亮等特点，又兼有特殊的花果香，深受消费者的喜爱。
碧螺春绿茶中的含氮化合物与其他物质一样是构成碧螺春绿茶的重要因素，决定碧螺春绿茶的风味和典型性。国内外研究者采用定性定量的办法已经鉴定出许多种决定成品碧螺春绿茶风味的物质。近些年对碧螺春绿茶风味物质的研究发现虽然含氮化合物在碧螺春绿茶中含量甚微，然该类化合物风味阈值低，具有坚果香和焙烤香等怡人风味，并对其他香味物质有明显的烘托叠加作用，是碧螺春绿茶中一类重要的风味化合物，但目前国内外对碧螺春绿茶中的含氮化合物的研究仍处于起步阶段，应用常规的气相色谱法(FID检测器)直接进样分析存在一定困难。本发明旨在采用顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术，对市面上碧螺春绿茶茶样中的含氮化合物进行分析研究，建立一套碧螺春绿茶中含氮化合物的定性定量分析方法，操作简单、易行，适用性广泛。
技术实现要素：
针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种碧螺春绿茶中含氮化合物的鉴定方法，所述的这种方法要解决现有技术中测定碧螺春绿茶中的含氮化合物成份和浓度不准确的技术问题。
本发明一种碧螺春绿茶中含氮化合物的鉴定方法，包括下列步骤：
1)一个提取碧螺春绿茶中含氮化合物的步骤：将去离子水加热至80℃备用；准确称取碧螺春绿茶，将碧螺春绿茶倒入准备的去离子水中，碧螺春和去离子水的质量比为1：1，摇匀浸泡，浸泡10min；浸泡完成后，经筛网过滤，再将过滤所得茶汤迅速冷却至室温；取5g冷却后茶汤，加入1g氯化钠、20μL2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15ml或20mL顶空瓶中，顶空瓶用硅胶垫皮密封，用于顶空固相微萃取，顶空固相微萃取条件为：将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃取头处于样品之上2cm，恒温水浴温度45～55℃下，萃取40～50min；萃取完成后，迅速将萃取头插入气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪进样口，于250℃下解吸4～6min；
2)一个利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的碧螺春绿茶中的含氮化合物的步骤：
气相色谱条件：HP-5MS毛细管色谱柱，其参数为60m×0.25mm、0.25μm；手动不分流进样，进样口温度250℃；程序升温：初始温度40℃，保留6min，以3℃/min的速率升至100℃，以5℃/min的速率升至230℃，保留20min；
NPD温度：250℃；氢气流速：2.0mL/min；空气流速：60mL/min；载气He，流速30mL/min；
MS条件：EI电离源，电子能量70eV，扫描范围30～550amu，离子源温度230℃；
传输线温度280℃；四极杆温度150℃；
3)一个对检出的含氮化合物进行定性分析的步骤，未知化合物的质谱通过与wiley7nDatabase，NIST11及标准品对比进行定性；
4)一个对检出的含氮化合物进行定量分析的步骤，称取一定量标准品，配制于去离子水中作为单标贮备液，准确吸取一定量的标准贮备液用去离子水配制成一系列浓度的混合标样；其中内标物质为2-甲氧基-3-甲基吡嗪。
进一步的，所述的分析检测仪器为气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪。
进一步的，所述的定量方法为内标标准曲线法定量。
本发明采用了顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术，对碧螺春绿茶中的含氮化合物进行分析研究，建立一套适用于碧螺春绿茶中含氮化合物的有效定性定量分析方法。本发明操作简单、易行，达到了满足生产快速检测需求的目的，适用性广泛。
附图说明
图1为市售碧螺春绿茶中的含氮化合物色谱图。
具体实施方式
为进一步阐释采用顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术快速检测并定性定量碧螺春绿茶中含氮化合物的方法，下面结合实例作更详尽的说明。
实施例1
本方法主要采用顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术对碧螺春绿茶中含氮化合物进行快速检测及定性定量，具体步骤如下：
1)提取碧螺春绿茶中含氮化合物：1)称量80g去离子水于250ml锥形瓶中，将去离子水加热至80℃备用；2)准确称取80g市售碧螺春绿茶，将茶样倒入步骤1)准备的去离子水中，摇匀浸泡。3)浸泡共需10min，过程中需每隔2min摇晃锥形瓶一次，目的在于摇匀茶叶。4)浸泡完成后，经筛网过滤，再将过滤所得茶汤迅速冷却至室温。5)取5g冷却后茶汤，加入1g氯化钠、20μL2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15ml或20mL顶空瓶中，顶空瓶用硅胶垫皮密封，用于顶空固相微萃取(SPME)。SPME条件为：将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃取头处于样品之上2cm，恒温水浴温度50℃下，萃取45min；萃取完成后，迅速将萃取头插入气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪进样口，于250℃下解吸5min；
2)用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的碧螺春绿茶中的含氮化合物、并对其含氮化合物进行定性定量分析：
气相色谱条件：HP-5MS毛细管色谱柱，其参数为60m×0.25mm、0.25μm；手动不分流进样，进样口温度250℃；程序升温：初始温度40℃，保留6min，以3℃/min的速率升至100℃，以5℃/min的速率升至230℃，保留20min；
NPD温度：250℃；氢气流速：2.0mL/min；空气流速：60mL/min；载气He，流速30mL/min；
MS条件：EI电离源，电子能量70eV，扫描范围30～550amu，离子源温度230℃；传输线温度280℃；四极杆温度150℃；
3)检出物质的定性：未知化合物的质谱通过与wiley7nDatabase，NIST11及标准品对比进行定性；
4)定量分析：准确吸取一定量标准品，用去离子水配制成一系列浓度的混合标样；其中内标物质为2-甲氧基-3-甲基吡嗪。
表1本发明方法碧螺春绿茶中的含氮化合物检测结果
由表1可知，利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术共检测出碧螺春绿茶中8种含氮化合物，其中噻唑3种、吡嗪类5种。该方法能快速定性出多种含氮化合物，准确测定出碧螺春绿茶中含氮化合物的含量。