一种治疗丹毒药物的质量检测方法与流程

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种治疗丹毒药物的质量检测方法。

背景技术：

丹毒是以风热毒蕴证和湿热毒蕴证为主要症状的一种病证。是清热解毒，凉血化瘀，清利湿热等多种原因引起的临床上常见的一种疾病，临床主要表现是风热、湿热毒蕴。授权专利丹毒清颗粒及其制备方法（专利号ZL200410042526.2）目前为本申请人独家投产的产品，该药物所用原料及用量重量分数比为：连翘 450～550重量份、金银花600～700重量份、栀子300～360重量份、当归450～550重量份、薏苡仁（炒）450～550重量份、牡丹皮450～550重量份、郁金300～360重量份、甘草120～200。基于上述药物处在投产初期，还没有构建制备中质量控制的技术方案，产品质量难于达到持续保证。建立该方法保证产品质量的稳定性、可控性。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种治疗丹毒药物的质量检测方法。用于该药物的质量控制，具体方法包括金银花、当归、牡丹皮、栀子的薄层鉴别和连翘苷、栀子苷含量测定方法。

（1）鉴别

①金银花鉴别

取待检药物适量，加甲醇5～15ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液浓缩至少量，加甲醇定容至5ml，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～1.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法通则0502试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比5～10∶2∶2～5醋酸丁酯－甲酸－水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm下紫外灯检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

②当归、牡丹皮鉴别

取待检药物适量，加热水20～40ml 溶解，放冷至室温，用乙醚提取2次，每次30 ml ，合并乙醚液，至35℃水浴上蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5～1.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5～1.5g，加乙醚30 ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液自然挥干，残渣加甲醇0.5～1.5ml使溶解，作为当归对照药材溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2～4mg的溶液，作为丹皮酚对照品溶液。照薄层色谱法通则0502试验，吸取上述三种溶液各3～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比2～4∶0.5～2环已烷－醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干。置365nm下紫外灯检视，供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与丹皮酚对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。

③栀子鉴别

取待检药物适量，取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含3～5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法通则0502试验，吸取对照品溶液及金银花项下供试品溶液各1～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4～6∶5∶0.5～2∶0.5～2醋酸乙酯－丙酮－甲酸－水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯365nm下显相同颜色的斑点。

（2）含量测定

连翘苷

①色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比15～35：65～85的乙腈-水为流动相；检测波长为277nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。

②对照品溶液的制备：精密称取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1～0.2mg的溶液，即得。

③供试品溶液的制备：取待检药物0.1～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50～70%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理20～40分钟，放冷，密塞，再称定重量，用50～70%甲醇补足减失重量，摇匀，离心，精密量取上清液15～30ml，置圆底烧瓶中，加入氯仿15～30ml，75℃水浴回流萃取3次，每次30分钟，合并氯仿层，水浴蒸干。残渣加适量甲醇溶解，加中性氧化铝0.5～2g拌匀，加于中性氧化铝柱上，用50～70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50～70%甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。

④测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

栀子苷

①色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比10～20：80～90的乙腈-水为流动相；检测波长为238nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。

②对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.02～0.05mg的溶液，即得。

③供试品溶液的制备：取待检药物0.1～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理20～40分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。

④测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明具有如下有益效果：

这种治疗丹毒药物的质量控制方法，对处方中的金银花、当归、牡丹皮、栀子进行定性鉴别，该方法具有较好的专属性、重现性及耐用性；对连翘苷、栀子苷进行定量分析，此法具有分离度高、分析时间短且操作简单的特点，能有效的提高生产效率，节约能源。同时采用二极管阵列检测器，考察方法的专属性；采用不同仪器及不同色谱柱考察方法的耐用性。此方法专属性强，重现性好，结果准确。这种治疗丹毒药物质量控制方法的定性、定量检测，为这种治疗清热解毒，凉血化瘀，清利湿热的药物提供了安全有效的质控方法，为药品的生产和临床应用提供了有效保障。

附图说明

图1为本发明金银花薄层鉴别色谱图；

图2为本发明当归、牡丹皮薄层鉴别色谱图-当归；

图3为本发明当归、牡丹皮薄层鉴别色谱图-牡丹皮；

图4为本发明栀子薄层鉴别色谱图-日光；

图5为本发明栀子薄层鉴别色谱图-荧光；

图6为本发明连翘苷对照品溶液高效液相色谱图；

图7为本发明连翘苷供试品溶液高效液相色谱图；

图8为本发明栀子苷对照品溶液高效液相色谱图；

图9为本发明栀子苷供试品溶液高效液相色谱图。

具体实施方式：

实施例1

待检药物：按丹毒清颗粒及其制备方法（ZL200410042526.2）实施例中颗粒剂的制备方法制成颗粒剂。

（1）鉴别

①金银花鉴别

取待检药物适量，加甲醇15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至少量，加甲醇定容至5ml，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法通则0502试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比7∶2∶2.5醋酸丁酯－甲酸－水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm下紫外灯检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

②当归、牡丹皮鉴别

取待检药物适量，加热水30ml 溶解，放冷至室温，用乙醚提取2次，每次30 ml ，合并乙醚液，至35℃水浴上蒸干，残渣加醋酸乙酯1.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，加乙醚30 ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液自然挥干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为当归对照药材溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作为丹皮酚对照品溶液。照薄层色谱法通则0502试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比2∶1环已烷－醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干。置365nm下紫外灯检视，供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与丹皮酚对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。

③栀子鉴别

取待检药物适量，取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法通则0502试验，吸取对照品溶液及金银花项下供试品溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比5∶5∶1∶2醋酸乙酯－丙酮－甲酸－水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯365nm下显相同颜色的斑点。

（2）含量测定

①色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比40：60的乙腈-水为流动相；检测波长为277nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。

②对照品溶液的制备：精密称取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1的溶液，即得。

③供试品溶液的制备：取待检药物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，密塞，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，离心，精密量取上清液20ml，置圆底烧瓶中，加入氯仿30ml，75℃水浴回流萃取3次，每次30分钟，合并氯仿层，水浴蒸干。残渣加适量甲醇溶解，加中性氧化铝2g拌匀，加于中性氧化铝柱上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用70%甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。

④测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

栀子苷

①色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比10：90的乙腈-水为流动相；检测波长为238nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。

②对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.03的溶液，即得。

③供试品溶液的制备：取待检药物0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。

④测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。