羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒的制作方法

文档序号:16418090发布日期:2018-12-28 18:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于该试剂盒主要含有:以制备的布鲁氏菌脂多糖作为包被抗原,以人工免疫健康绵羊制备阳性血清,以采集健康非免疫绵羊血清作阴性血清,以HRP标记鼠抗羊IgG Fc抗体、底物溶液、终止液、样品稀释液、HRP标记鼠抗羊IgG稀释液及20×洗涤液组分组装而成,用于检测绵羊和山羊血清中的光滑型布鲁氏菌抗体;其中:

HRP标记鼠抗羊IgG Fc抗体是由被命名为抗羊IgG Fc段单克隆抗体细胞6F9株制备的,该细胞株已于2016年11月14日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所内中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCCNo.13282。

2.权利要求1所述羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于阳性血清的制备和标定方法是:

用布鲁氏菌虎红平板凝集试验、试管凝集试验和补体结合试验对临床表现健康的15月龄成年羊进行检测,筛选布病抗体阴性羊;对筛选的阴性羊用布鲁氏菌参考强毒株M28灭活抗原以5×1010CFU/羊颈部皮下免疫,3个月后双倍剂量加强免疫1次;加强免疫后2周采血,用试管凝集试验测定凝集效价为800IU/ml;静脉放血,分离血清,用羊布病阴性血清与效价为800IU的阳性血清等体积稀释,将其效价调整为400IU/mL,用0.45μm滤器过滤除菌,作为试剂盒中布病阳性血清。

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