高效液相色谱低温蒸发光散射法测定白酒中八种甜味剂的方法与流程

本发明涉及食品加工技术领域，具体来说是一种高效液相色谱低温蒸发光散射法测定白酒中八种甜味剂的方法。

背景技术：

白酒酿造工艺是我国宝贵的非物质文化遗产之一，优质的白酒具有酒体甘冽、醇厚、绵软等特点，这与优良白酒酿造工艺过程中自然发酵产生的高级醇、多元醇等物质有着密切的关系。好酒出自好的传统酿造工艺，然而在当今食品工业飞速发展的今天，一些酿酒作坊或商家，使用食用酒精或质量较差的原酒勾调成品酒，为了掩盖酒体苦、涩等不良口感的缺陷，增加甜感，擅自向这些酒体中添加人工合成甜味剂，以次充好。这不仅伤害了白酒消费者的切身利益，而且对中国传统白酒酿造工艺的形象造成了不良的影响。

人工合成甜味剂针对白酒等发酵酒而言国家明文规定是不得添加的，目前对白酒中甜味剂的检测方法主要有液相色谱质谱法、液相色谱二极管阵列法、液相色谱视差法、离子色谱法、毛细管电泳法等。其中液相色谱质谱法灵敏度最好，但检测成本较高，其它方法由于使用检测器的缺陷或化合物本身的性质决定了其检测灵敏度不乐观及检测种类上的不全面。

技术实现要素：

本发明的目的是针对上述技术存在的问题，提供一种高效液相色谱-低温蒸发光散射法测定白酒中八种甜味剂的方法。该方法检测条件温和，具有简单、快捷、分离效果好的特点，对提高实验室检测效率、降低检测成本起到了积极的作用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种高效液相色谱低温蒸发光散射法测定白酒中八种甜味剂的方法，包括如下步骤：

(1)标准溶液配制：分别称取各标准品各25mg于25mL容量瓶中，用超纯水稀释并定容至刻度，配制成1000μg/mL的标准储备液，准确吸取八种甜味剂标准储备液各0.02mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL于10mL容量品中，分别配制成2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、50.00μg/mL、100.00μg/mL的混合标准工作液，备用；

(2)样品前处理：准确称取白酒样品5g于10mL比色管中，将样品放入恒温45℃的水浴氮吹仪中挥干酒体，取出挥干的样品并静置至室温，用乙酸水将残余物定容至1mL，过0.45μm水相滤膜，待测；

(3)样品检测：色谱柱：C₁₈柱为4.6mm×250mm,5μm；低温蒸发散射检测器条件：蒸发管温度40℃，雾化气压350kPa，Gain值7，辅助检测器二极管阵列检测条件：检测波长208nm；柱温30℃；流速1.0mL/min；进样体积40μl；流动相为乙腈(A)/20mmol/L乙酸铵水溶液(B)；设定进样体积为40μL进行洗脱；

(4)校正曲线的建立：采用响应信号与标准物质浓度同时取对数来建立校准曲线，模型Y＝X^ae^b，其中X为目标物质浓度对数，Y为对应目标物质响应峰面积的对数，a,b为对数相关系数；

(5)结果：采用建立好的校准曲线积分样品色谱图，计算结果：

$M=\frac{C\×V}{m\×1000}$

其中：C为被测组分积分浓度，μg/mL；V为浓缩定容体积，mL；m为样品取样量，g；M为样品中被测组分含量，g/kg。

进一步的，步骤(2)中，乙酸水pH为4.5。

进一步的，步骤(3)中，流动相分离洗脱程序为：

进一步的，八种所述甜味剂为安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、纽甜和甜菊糖苷。

本发明的有益技术效果是：本发明技术方案采用低温蒸发散射检测法测定白酒中含有的八种甜味剂，该方法检测条件温和，具有简单、快捷、分离效果好的特点，对提高实验室检测效率、降低检测成本起到了积极的作用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1八种甜味剂的蒸发光色谱图(左起分别为安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、纽甜、甜菊糖苷，浓度50μg/mL)；

图2样品加标(5μg/mL)及阳性样品对比。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例

(1)标准溶液配制：分别称取各标准品各25mg于25mL容量瓶中，用超纯水稀释并定容至刻度，配制成1000μg/mL的标准储备液，准确吸取八种甜味剂标准储备液各0.02mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL于10mL容量品中，分别配制成2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、50.00μg/mL、100.00μg/mL的混合标准工作液，备用；

(2)样品前处理：准确称取白酒样品5g于10mL比色管中，将样品放入恒温45℃的水浴氮吹仪中挥干酒体，取出挥干的样品并静置至室温，用乙酸水将残余物定容至1mL，过0.45μm水相滤膜，待测；

(3)流动相的准备：

流动相A的准备：流动相A为乙腈，作为流动相前超声波排气5min，静置备用；

流动相B的准备：流动相B为酸化20mmol/L乙酸铵(乙酸酸化，pH4.5)，经4.5μm水相滤膜过滤，备用。

(4)检测仪器的开启与调试

①分别打开液相色谱仪脱气机、泵、柱温箱、低温蒸发光散射检测器和主控器并连接分离柱；

②液相色谱系统排气；

③同时启动A泵(连接流动相A)和B泵(连接流动相B)，逐渐将系统流动相流速由0mL/min提升至1.2mL/min(禁止突然将流速升至最高，防止瞬时压力过大，破坏柱子)；

④将柱温箱中柱温在整个检验流程中恒定在30℃，保持不变；

⑤待蒸发光散射检测器中U形管中液体近满时，开启氮气瓶，慢慢将雾化压力调节至350kPa(2.8L/min)；

⑥调节检测器响应值(Gain值)为7；

⑦调节蒸发管温度为40℃；

⑧在以上状态下平衡系统约15min。

(5)样品的检测

进样体积40μl，流动相分离洗脱程序按一下步骤进行：

八种甜味剂的蒸发光色谱图如图1所示。

(6)校正曲线的建立：采用响应信号与标准物质浓度同时取对数来建立校准曲线，模型Y＝X^ae^b，其中X为目标物质浓度对数，Y为对应目标物质响应峰面积的对数，a,b为对数相关系数；

(7)结果：采用建立好的校准曲线积分样品色谱图，计算结果，结果如表1所示，

$M=\frac{C\×V}{m\×1000}$

其中：C为被测组分积分浓度，μg/mL；V为浓缩定容体积，mL；m为样品取样量，g；M为样品中被测组分含量，g/kg。

表1检测结果

*基于称样量5g，定容体积1mL，进样体积40μL。

本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样定义，不会用理想化或过于正式的含义来解释。

最后所应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。