一种中药刺激咽喉程度的评价方法与流程

本发明涉及中医中药
技术领域：
,特别涉及一种中药刺激咽喉程度的评价方法。
背景技术：
：目前，评价中药刺激性的实验有家兔眼结膜刺激性实验、家鸽呕吐实验等，其评价方法简单，指标单一，缺乏客观的技术参数，不能全面、准确地评价中药对咽喉的刺激性。现有的对声音的采集和测评专利也只局限于单纯的采集分析设备，主要应用于工业生产、通信等领域，应用范围较窄。远志为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld.或卵叶远志PolygalasibiricaL.的干燥根，具有安神益智、交通心肾、祛痰，消肿等功效，常用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚、咳痰不爽、疮疡肿毒、乳房胀痛。该药始载于《神农本草经》，列为上品，被视为延年益智之良药。但远志生用有毒，“戟人咽喉”。清代贾九如在《药品化义》中记载远志“辛重暴悍，戟喉刺舌，与南星、半夏相类”。《医学衷中参西录》称“若末服至二钱可作呕吐”。现代临床研究发现，远志常规用量偶可引起轻度恶心，若大剂量服用可引起恶心、呕吐、腹泻、溶血等不良反应，还可引起面神经麻痹、舌麻木、张口困难等症状（刘大伟，康利平，马百平.远志化学及药理作用研究进展.国际药学研究杂志，2012，39(1):32-36.）。因此，中医临床上均使用其炮制品。历代对远志的炮制方法主要有切段、甘草制、蜜制、朱砂制等，现代主要采用甘草制，《中国药典》2015年版收载了远志和制远志（甘草汁煮远志）两种饮片规格。甘草汁煮远志可减缓其“戟人咽喉”毒性，增强安神益智作用（单建学.远志的炮制及临床应用.湖南中医药导报，2001，7(2):89.）。现代研究表明，生远志对大鼠胃肠功能呈明显的抑制毒性，而甘草制远志对大鼠胃肠运动和消化功能的抑制作用明显减弱（王建，郭娟，武云.远志不同炮制品对胃肠运动及消化功能的影响.中药药理与临床，2006，22(3):120-124.）。甘草制远志可提高小鼠学习记忆能力，其作用显著强于生远志（王光志，陈林，万德光，等.不同炮制方法对远志药效学的比较研究.成都医学院学报，2011，6(4):280-282.）。技术实现要素：本发明针对上述中药咽喉刺激性评价技术的缺陷，提供了一种中药刺激咽喉程度的评价方法，通过运用录音设备对豚鼠灌药前后进行声音采集，采取客观分析，对豚鼠声音进行综合测评，进而反映中药的咽喉刺激性。该方法操作简单，成本低，能够全面、客观地评价中药刺激咽喉的程度。本发明是通过以下步骤得到的：（1）灌药前，利用自带录音设备的苹果手机对待灌药动物进行声音采集，并自动保存为MPEG格式；（2）灌药后，对灌药动物再次进行声音采集，并自动保存为MPEG格式；（3）借助电脑，对步骤（1）、（2）采集的声音使用音频软件转化为声波，截取声音信号中噪音少、声音较平稳的目标波段；（4）对所选豚鼠声音的目标波段执行音频软件中的“扫描”操作，得到豚鼠声音振幅常规数据，包括最大、最小和平均均方根（RMS）振幅；取各组RMS振幅数据绝对值，导入SPSS19.0统计软件进行处理，通过分析声波的振幅绝对值和连续性差异，判断中药对咽喉的刺激程度。所述的评价方法，优选所述灌药动物为豚鼠。所述的评价方法，优选声音采集操作为用大拇指和食指捏住豚鼠的脖子，音频输入口对准豚鼠口部1cm处进行叫声录音，并自动保存为MPEG格式。所述的评价方法，优选音频软件为AdobeAuditionCS6或CoolEditPro2.0。所述的评价方法，优选步骤（3）中采集的声音使用音频软件转化为声波后，截取声音信号中噪音少、声音较平稳的目标波段。所述的评价方法，优选所灌药物为对咽喉粘膜有刺激性作用的中药提取物。所述的评价方法，优选所灌药物为中药远志提取物。所述的评价方法，优选步骤（1）、（2）采集的声音转化为声波后，声波振幅绝对值越大，声波分布均匀性越差、能量密集性越差，所灌药物对豚鼠咽喉刺激性越大。使用SPSS19.0统计软件进行分析，得到最大振幅、最小振幅和平均振幅数据统计。远志提取物对咽喉刺激作用强弱顺序为：70%乙醇部位＞70%乙醇部位炮制品＞40%乙醇部位＞40%乙醇部位炮制品＞25%乙醇部位＞25%乙醇部位炮制品。本发明的有益效果：本发明巧妙地将声音采集分析技术与中药对咽喉的刺激性作用联系在一起，通过对采集的声音片段进行扫描和振幅常规数据的提取，使具有客观的参数比较，使对中药刺激咽喉程度的评价更加客观、全面和准确，提高测评中药咽喉刺激性的准确度。附图说明图1生理盐水组给药组豚鼠声音波形图，图2为25%乙醇部位组给药组豚鼠声音波形图，图3为25%乙醇部位炮制品组给药组豚鼠声音波形图，图4为40%乙醇部位组给药组豚鼠声音波形图，图5为40%乙醇部位炮制品组给药组豚鼠声音波形图，图6为70%乙醇部位组给药组豚鼠声音波形图，图7为70%乙醇部位炮制品组给药组豚鼠声音波形图。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：实施例11实验材料1.1药品与试剂甘草汁的制备：取净甘草15g，加水150mL煎煮30min，滤过，残渣继续加水120mL煎煮30min，滤过，合并浓缩液至150mL。即1g甘草相当于甘草汁浓缩液10mL。远志大孔树脂不同洗脱部位的制备：称取远志药材500g，用70%乙醇回流提取2次，每次70%醇用量为药材重量的8倍，提取时间第一次2h，第二次1h。合并两次提取液，过滤，60℃减压浓缩、回收溶剂，得到黑褐色浸膏。取该浸膏，加适量蒸馏水混悬，用正丁醇萃取（药液：正丁醇=1:1），减压回收溶剂，得正丁醇萃取物。取正丁醇萃取物，用水溶解，上D101大孔吸附树脂，依次用水、25%乙醇、40%乙醇、70%乙醇洗脱，减压浓缩干燥，得远志25%乙醇部位粉末10g、40%乙醇部位粉末25g、70%乙醇部位粉末35g。分别称取上述药品粉末4、10、14g，精密称定，加水溶解并定容至200mL，即得浓度分别为20、50、70mg/mL的药液，即25%乙醇部位溶液、40%乙醇部位溶液、70%乙醇部位溶液。远志大孔树脂不同洗脱部位模拟炮制品的制备：称取远志25%、40%、70%乙醇部位粉末4、10、14g，分别置烧杯中，精密称定，加甘草汁50ml，蒸馏水150mL，超声溶解，水浴100℃加热模拟炮制，每隔1h加水200mL，煮制15h，浓缩至200mL，即得浓度分别为20、50、70mg/mL的药液，即25%乙醇部位炮制品溶液、40%乙醇部位炮制品溶液、70%乙醇部位炮制品溶液。豚鼠胃蛋白酶测试试剂盒（96T，批号：201605，上海将来实业有限公司）；色谱纯乙腈、甲醇购自德国默克公司，色谱纯甲酸购自美国Tedia公司；水为Milli-QUltra-purewater(Millipore,Billerica,MA,USA)；其余试剂为分析纯。1.2动物健康、声音正常的豚鼠，体重300±20g，雄性，购自济南金丰实验动物有限公司，合格证书为SYXK(鲁)20160019。实验前豚鼠在实验室适应性喂养3天，室温20±2℃，相对湿度40%～60%。2方法与结果2.1豚鼠灌药取健康、声音正常的雄性豚鼠56只，随机分为7组，每组8只，给药组分别按1mL/100g的剂量灌胃给予远志25%乙醇部位溶液、40%乙醇部位溶液、70%乙醇部位溶液、25%乙醇部位炮制品溶液、40%乙醇部位炮制品溶液、70%乙醇部位炮制品溶液（每组灌胃剂量相当于生药量10g/kg），对照组给予同体积的生理盐水，每日1次，连续灌胃7天。2.2豚鼠声音的采集用自带录音设备的苹果手机收集豚鼠灌药期间的声音变化，存为MPEG格式。具体采集方式为：在豚鼠灌胃给药前30min，用大拇指和食指捏住豚鼠的脖子，手机音频输入口对准豚鼠口部1cm处，采集15s内豚鼠的声音信息。每日豚鼠灌胃给药30min后，重复上述录音操作，连续测定7天。2.3豚鼠声音的分析2.3.1客观分析将录制的声音信息导入AdobeAuditionCS6音频处理软件中转化为声波。由于在豚鼠声音录制过程中，会受到周围环境、个人操作及个体声音调整等因素的影响，录音信号不一定保持平稳，故实际截取声音信号中噪音少、声音较平稳的3s时间内的目标波段进行分析，豚鼠灌胃给药7天后的声波图见图1。对所选豚鼠声音的目标波段片段执行音频软件中的“扫描”操作，得到豚鼠声音振幅常规数据，包括最大、最小和平均均方根（RMS）振幅（RMS值基于特定振幅的普遍性，通常反映比绝对或平均振幅更好的感知响度）；取各组RMS振幅数据绝对值，导入SPSS19.0统计软件进行处理分析，最终结果以（±S）表示，声音的响度与振幅绝对值呈反比，振幅绝对值越小，声音响度越大，豚鼠灌胃给药7天后的各组数据见表1。观察图1，发现在相同的3s时间内，生理盐水组豚鼠的声波含有3个波段，分布比较均匀、密集，连续性很好；25%乙醇部位组含有5个波段，而25%乙醇部位炮制组减少为4个波段，且较其炮制前声波分布更加均匀和连续；40%乙醇部位组声波分布较稀疏，连续性较差，有失真现象，经炮制后失真现象消失；70%乙醇部位给药组分布极稀疏、短促，连续性差，有失真现象，其炮制后失真现象减弱。分析表1中数据，与生理盐水组比较，各给药组平均RMS振幅数据绝对值均呈升高趋势，声音响度降低；与25%乙醇部位组比较，25%乙醇部位炮制组平均RMS振幅绝对值降低，能量较多而集中，显示有差异性；与40%乙醇部位组比较，40%乙醇部位炮制组最大和平均RMS振幅绝对值均显著降低，能量较集中，声音响度增加；与70%乙醇部位组比较，70%乙醇部位组炮制组最大和平均RMS振幅绝对值也显著降低，但能量仍较分散，声音响度较低。以上说明，远志25%、40%、70%乙醇部位给药组对豚鼠咽喉具有刺激性，且经炮制后刺激性均有减弱趋势。各给药组刺激作用大小顺序为：25%乙醇部位炮制品＜25%乙醇部位＜40%乙醇部位炮制品＜40%乙醇部位＜70%乙醇部位炮制品＜70%乙醇部位。表1豚鼠声音客观评价统计分析数据（±S）注：与生理盐水组比较，*p＜0.05；与25%乙醇部位比较，※p＜0.05；与40%乙醇部位比较，#p＜0.05；与70%乙醇部位比较，△p＜0.05。2.3.2主观分析由试听人员凭主观听觉感受，对比生理盐水组豚鼠声音，按照5分制对各给药组存活的豚鼠声音截取的目标波段进行打分，评分标准见表2，豚鼠给药7天后的各组评分结果见表3。结果显示，与生理盐水组比较，豚鼠的声音均具有显著性差异，各灌药组豚鼠声音均有不同程度的嘶哑；40%乙醇部位组、70%乙醇部位组及其各自的炮制品部位组均出现了豚鼠死亡现象，其中，以70%乙醇部位组动物死亡最多；经模拟炮制后豚鼠死亡数量减少，声音有所恢复。说明生远志确有毒性和咽喉刺激性，以70%乙醇部位毒性最大，经炮制后可降低其毒性，减少其对豚鼠咽喉的刺激性。表2豚鼠声音主观评分标准等级分值评价标准一级5分（优）响亮、连续二级4分（良）低吟、短促三级3分（中）低吟、撕扯感四级2分（差）嘶哑、失真五级1分（劣）失声表3豚鼠声音主观评价统分表组别总数（只）死亡数（只）嘶哑数（只）存活豚鼠声音得分（分）生理盐水8004.96±0.0725%乙醇部位8013.98±0.68*25%乙醇部位炮制品8004.38±0.43*40%乙醇部位8242.52±0.66*40%乙醇部位炮制品8123.11±0.50*#70%乙醇部位8440.98±0.17*70%乙醇部位炮制品8332.12±0.62*△注：与生理盐水组比较，*p＜0.05；与40%乙醇部位比较，#p＜0.05；与70%乙醇部位比较，△p＜0.05。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3