本发明属于医药技术领域，涉及药物制剂质量分析，具体涉及感愈胶囊的质量控制方法。
背景技术：
感冒是一种最常见的呼吸系统疾病，以鼻塞、流涕、喷嚏、咳嗽、头痛、恶寒、发热、全身不适等为主要临床表现的外感疾病。近年来，学者们对感冒的治疗进行了大量的研究，取得了较大进展，中医辨证论治，解表达邪、调和阴阳，效果优于西医的抗生素治疗，因此，新药研究技术的快速发展和中西合剂技术的进步，为抗病毒药物的研究提供了坚实的基础和高效的技术支撑。
感愈胶囊由板蓝根、金银花、人工牛黄、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、淀粉精制而成，是我公司独家品种，作为中西合剂其发挥了化药起效快，中药标本兼治的优点，可有效地治愈流感，但临床反馈有些批次样品起效慢，为进一步保证该产品的质量及更有利于对该产品质量的监督、管理，所以有必要对该产品的检测进行改进，从而更进一步保证该产品的质量和疗效。
感愈胶囊质量标准为国家食品药品监督管理局国家药品标准：ws-10368(zd-0368)-2002，该标准存在不完善之处，在含量测定中仅测定了对乙酰氨基酚含量，没有对盐酸金刚烷胺含量进行测定；标准中也没有对该制剂在体内释放情况进行检测，致使药物在疗效上存在不确定性。感愈胶囊中的这两种化药进入人体后，释放及代谢速度直接关系到药物的疗效和副作用的发生率，因此为更好的保证本药的安全、有效、质量可控，修改了含量测定方法，同时增加了溶出度测定，利用体外溶出行为模拟药物在体内的释放，从而减少了产品疗效不稳定导致的安全性风险，更好地满足市场需求。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种感愈胶囊的检查方法。它在现有质量检测基础上增加了对盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的溶出曲线测定，可以对感愈胶囊的主要药物成分进行更有效控制。
本发明的目的可通过下列技术方案来实现：感愈胶囊的检测方法，按照重量份计，所述胶囊剂是用板蓝根250g、金银花150g、人工牛黄10g、对乙酰氨基酚250g、盐酸金刚烷胺100g和淀粉3.3g制备成1000粒胶囊剂；其特征在于，该检测方法包括以下步骤：
1、性状：本品为胶囊剂，内容物为黄棕色的粉末；味苦；
2、鉴别：
(1)取本品内容物4g，加石油醚(60～90℃)20ml，超声处理20分钟，弃去石油醚，残渣加醋酸乙酯30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水(2∶30∶2∶2∶4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本品内容物1.2g，加氯仿20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸(15∶7∶5)(v/v)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取本品内容物0.4g，加氯仿5ml，振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取盐酸金刚烷胺对照品，加氯仿制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-浓氨试液(9∶1∶1∶0.012)(v/v)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3、检查：重金属不得过百万分之二十；其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定；
4、含量测定：
对乙酰氨基酚和盐酸金刚烷胺，采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(hplc-elsd)法测定：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以75:25的1.0％醋酸铵-甲醇溶液为流动相；其中1.0％醋酸铵的ph＝3.6；蒸发光散射检测器漂移管温度为105℃，雾化气体为n2，流速2.85l/min，进样量20μl，检测波长249nm。
对照品溶液的制备：精密称取经105℃干燥3小时的盐酸金刚烷胺对照品与对乙酰氨基酚对照品各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中分别含盐酸金刚烷胺0.2mg及对乙酰氨基酚0.5mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250w、频率25khz)20分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒含对乙酰氨基酚(c8h9no2)应为标示量的90.0％～110.0％；每粒含盐酸金刚烷胺(c10h18cln)应为标示量的85.0％～115.0％。
5、溶出曲线的测定：
取本品，照溶出度与释放度测定法，分别以ph1.2、ph6.8、ph4.0、水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，按时间点取溶出液15ml，弃去初滤液至少10ml，及时补充溶出介质，取续滤液作为供试品溶液；照含量测定项下的色谱条件，精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。另取经105℃干燥3小时的盐酸金刚烷胺对照品与对乙酰氨基酚对照品各适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中分别含盐酸金刚烷胺0.11mg及对乙酰氨基酚0.28mg的对照品溶液。按外标法以峰面积计算每片的溶出量，每粒含盐酸金刚烷胺应为标示量的75％；每粒含对乙酰氨基酚应为标示量的80％，应符合规定。
本发明的积极效果是：在现有检测基础上修改了含量测定方法并增加了盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的溶出曲线测定，可以对感愈胶囊的主要西药药物成分进行更有效控制，使得感愈胶囊的质量监控水平有了很大的提高。有利于生产厂家和监督管理部门对产品批间质量和疗效的监测，也可以为患者的治疗提供更好的保障。
为了验证本发明检测方法的合理性，申请人对该方法进行了方法学验证。
1、盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的含量方法学验证：
1.1检测波长选择、测定方法选择：盐酸金刚烷胺没有紫外吸收，考虑用其他检测器，参照盐酸金刚烷胺溶出度测定方法，选取荧光分光光度法，精密量取盐酸金刚烷胺对照品溶液(0.056mg/ml)和水各1ml，分别置试管中，精密加入硼酸-氢氧化钠缓冲液(ph9.0)9ml、0.12％荧光胺乙腈溶液5ml和水10ml，密封、强烈振摇，静置60分钟，照荧光分光光度法，在391nm激发波长和474nm发射波长处测定吸光度，计算出每片溶出量。此方法较繁琐且灵敏度低，且同时需要测定盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚。
因此选取hplc-elsd法测定，选取对乙酰氨基酚的紫外吸收波长，同时盐酸金刚烷胺也有较强吸收峰，所以选择249nm为检测波长。
1.2流动相的选择：选择甲醇体系，甲醇-水(70:30)为流动相进行测定，后又进行比例调整，色谱峰形均不好；选取1.0％醋酸铵(ph3.6)-甲醇(75:25)溶液为流动相，进行测定，效果较好。
1.3色谱柱选择：首选十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，检测效果较好。
1.4蒸发光散射检测器测定方法的选择：漂移管温度为105℃，雾化气体为n2，流速2.85l/min。
1.5对照品溶液制备：精密称取盐酸金刚烷胺对照品约125mg与对乙酰氨基酚对照品300mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，备用。
1.6盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚线性关系：精密量取上述对照品溶液1.0ml、2.0ml、3ml、4ml、5.0ml分别置于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下测定，以样品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚的回归方程分别为y＝157.34x+2.48，r＝0.9995；y＝347.55x+3.58，r＝0.9996。盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚分别在0.1～0.5mg/ml，0.24～1.2mg/ml范围内线性关系良好。
1.7供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250w、频率25khz)20分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
1.8精密度试验：精密量取盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚的对照品溶液，重复进样6次，测定盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚峰面积，rsd分别为0.86％、0.65％。
1.9稳定性试验：精密量取供试品溶液20μl，于0、2、4、6、8小时进样，测定盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚峰面积，结果表明供试品溶液在8小时内稳定性良好。
1.10样品含量测定：取3批中试样品，按供试品溶液的制备方法分别制备供试品溶液，测定盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚峰面积，计算盐酸金刚烷胺与对乙酰氨基酚的含量，结果均符合规定。
2、盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的溶出度方法学验证：
2.1溶出曲线测定方法的筛选
2.1.137℃溶解度试验：分别称取盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚适量，置具塞试管中，分别加37℃溶出介质(ph1.0-ph8.0)各约10ml，置37℃水浴中加热60分钟，每隔5分钟强力振摇30秒，过滤，弃去初滤液10ml，置于37℃水浴中备用。取样品稀释，进行峰面积测定，分别计算盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚在各个溶出介质的溶解度。
2.1.2溶出介质的选择：根据37℃溶解度试验确定样品的溶出介质，均衡盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的溶解度选取ph1.2、ph4.0、ph6.8、水这四种溶出介质对本制剂进行评价。
2.1.3不同溶出介质的缓冲溶液的配置：ph1.2缓冲液(取盐酸7.65ml，加水到1000ml，即得)；ph4.0缓冲液(取冰醋酸1.36ml，加醋酸钠1.22g，加水到1000ml，即得)；ph6.8磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g，加氢氧化钠0.896g，加水到1000ml使溶解，即得)；
2.1.4溶出介质的体积选择：主要是使药物符合漏槽条件，使溶出到介质中的药物很快被介质稀释带走，药物的溶出不受溶出介质中药物浓度的影响。目前溶出介质的体积一般为500ml、900ml、1000ml，而最为普遍的是900ml，且该体积符合漏槽条件，所以溶出体积选取900ml。
2.1.5篮法、桨法、转速选择：参照fda网站公布的盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的溶出试验条件均为桨法，桨法与50rpm转速，更接近人的胃肠蠕动，因此将溶出转速定为50rpm/min。
2.1.6滤膜吸附试验：取溶出液50ml，分别于离心(3000转，20min)后取上清液作为供试品溶液；另将溶出液经0.45μm的滤膜分别滤过2ml、5ml、10ml、15ml，作为供试品溶液。测定样品的峰面积，结果溶出液经0.45μm的滤膜滤过10ml与离心样品的峰面积基本一致，说明滤膜经滤去10ml初滤液后不干扰溶出度测定，所以弃去至少10ml初滤液。
2.1.7溶出曲线测定时间点的选择：根据《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》，尽量选择整数时间点，溶出曲线截止时间点是连续两点溶出量均达85％以上，且差值在5％以内的时间点。因此取样时间点为5、10、15、30、45、60、90、120分钟。
2.2溶出方法确认
取本品，照溶出度与释放度测定法，分别以ph1.2、ph6.8、ph4.0、水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，按时间点取溶出液15ml，弃去初滤液至少10ml，及时补充溶出介质，取续滤液作为供试品溶液；照含量测定项下的色谱条件，精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。另取经105℃干燥3小时的盐酸金刚烷胺对照品与对乙酰氨基酚对照品各适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中分别含盐酸金刚烷胺0.11mg及对乙酰氨基酚0.28mg的对照品溶液。按外标法以峰面积计算每片的溶出量，每粒含盐酸金刚烷胺应为标示量的75％；每粒含对乙酰氨基酚应为标示量的80％，应符合规定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例：
一种感愈胶囊的检测方法，按照重量份计，所述胶囊剂是用板蓝根250g、金银花150g、人工牛黄10g、对乙酰氨基酚250g、盐酸金刚烷胺100g和淀粉3.3g制备成1000粒胶囊剂；其特征在于，该检测方法包括以下步骤：
1、性状：本品为胶囊剂，内容物为黄棕色的粉末；味苦；
2、鉴别：
(1)取本品内容物4g，加石油醚(60～90℃)20ml，超声处理20分钟，弃去石油醚，残渣加醋酸乙酯30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水(2∶30∶2∶2∶4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本品内容物1.2g，加氯仿20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸(15∶7∶5)(v/v)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取本品内容物0.4g，加氯仿5ml，振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取盐酸金刚烷胺对照品，加氯仿制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-浓氨试液(9∶1∶1∶0.012)(v/v)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3、检查：重金属不得过百万分之二十；其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定；
4、含量测定：
对乙酰氨基酚和盐酸金刚烷胺，采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(hplc-elsd)法测定：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以75:25的1.0％醋酸铵-甲醇溶液为流动相；其中1.0％醋酸铵的ph＝3.6；蒸发光散射检测器漂移管温度为105℃，雾化气体为n2，流速2.85l/min，进样量20μl，检测波长249nm。
对照品溶液的制备：精密称取经105℃干燥3小时的盐酸金刚烷胺对照品与对乙酰氨基酚对照品各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中分别含盐酸金刚烷胺0.2mg及对乙酰氨基酚0.5mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250w、频率25khz)20分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒含对乙酰氨基酚(c8h9no2)应为标示量的90.0％～110.0％；每粒含盐酸金刚烷胺(c10h18cln)应为标示量的85.0％～115.0％。
5、溶出曲线的测定：
取本品，照溶出度与释放度测定法，分别以ph1.2、ph6.8、ph4.0、水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，按时间点取溶出液15ml，弃去初滤液至少10ml，及时补充溶出介质，取续滤液作为供试品溶液；照含量测定项下的色谱条件，精密量取对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定。另取经105℃干燥3小时的盐酸金刚烷胺对照品与对乙酰氨基酚对照品各适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中分别含盐酸金刚烷胺0.11mg及对乙酰氨基酚0.28mg的对照品溶液。按外标法以峰面积计算每片的溶出量，每粒含盐酸金刚烷胺应为标示量的75％；每粒含对乙酰氨基酚应为标示量的80％，应符合规定。
经分析方法确认后采用四种溶出介质(ph1.2；ph4.0；ph6.8；水)对多批样品溶出曲线测定：
经过多批次感愈胶囊的溶出曲线测定，计算本品四种溶出介质下各批次样品的相似因子(f2)，考察样品的批内及批间差异；以及同日本橙皮书公布的对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺各自单方制剂溶出曲线，进行相似度比较，结果是f2>50为相似。