泊沙康唑中间体Z及其基因毒性杂质的分离与测定方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种泊沙康唑中间体z及其相关基因毒性杂质的分离与测定方法。
背景技术：
：泊沙康唑是一种广谱三唑类抗真菌药，可用于预防侵袭性曲霉菌和念珠菌感染，同时可用于治疗口咽念珠菌病，包括伊曲康唑和/或氟康唑难治性口咽念珠菌病。泊沙康唑中间体z(泊沙康唑粗品)化学名为4-[4-[4-[4-[[(3r,5r)-5-(2,4-difluorophenyl)tetrahydro-5-(1h-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-3-furanyl]methoxy]phenyl]-1-piperazinyl]phenyl]-2-[(1s,2s)-1-ethyl-2-hydroxypropyl]-2,4-dihydro-3h-1,2,4-triazol-3-one，分子式c37h42f2n8o4，分子量700.78，其结构式如下所示：基因毒性杂质是指化合物本身直接或者间接损伤细胞dna，导致生物体产生基因突变或者发生体内诱变，具有致癌性或者潜在倾向。具有基因毒性作用的基团一般具有亲电试剂的性质，这些基团在生理条件下同体内核酸、蛋白质或其他重要成分中的亲核中心发生取代反应，使这些成分发生不可逆的损伤，表现为毒性、致突变或致癌等作用。表现为毒性、致突变或致癌等作用的基团举例如下：在生产过程中，可能产生基因毒性杂质的环节包括新药合成、原料纯化、储存运输(与包装物接触)等，故在新药合成阶段应该指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化学物质，如所用试剂、中间体、副产品等。更进一步，在药物活性物质中没有出现的基因毒性反应物和有基因毒性结构的物质，都应该被考虑。在泊沙康唑的合成过程中，其中间体z中可能存在由关键起始原料带入的基因毒性杂质：对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯。泊沙康唑中间体z中的基因毒性杂质来源于关键起始原料sm1，合成sm1过程中用到的对甲苯磺酰氯会水解产生对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯，sm1合成路线如下所示：根据ema《基因毒性杂质限度指南》(2006年)规定，应对基因毒性杂质在泊沙康唑中的含量进行严格控制，按泊沙康唑最大日计量和最长用药时间计算该类杂质的限度应控制不超过0.015％。因此，对于泊沙康唑来 说，应控制其关键中间体z中基因毒性杂质的含量，从而有效地保障泊沙康唑原料和制剂的质量安全可控。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种分离泊沙康唑中间体z及其相关基因毒性杂质的方法，该方法能够实现泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的有效分离，从而有效控制关键中间体z中基因毒性杂质的含量；本发明的目的之二在于提供一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，利用高效液相色谱法，能够高效、精确的实现中间体z及相关基因毒性杂质的分离与测定，对泊沙康唑原料及其制剂的质量安全可控具有重要意义。为实现上述目的，本发明的技术方案为：分离泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，所述的方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以溶剂a与溶剂b的混合物为流动相进行分离，所述溶剂a为水，所述溶剂b为甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或多种。本发明所述的方法适用于上述的泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的分离，可用于单独分离某一种物质，也可同时分离泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质。本发明所述的分离泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，优选的，所述方法特别适合基因毒性杂质为对甲苯磺酸甲酯和/或对甲苯磺酸乙酯的分离。作为优选的方案，所述溶剂b为甲醇或乙腈。本发明还提供了一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，具体步骤如下：取供试品加稀释剂溶解制备成供试品溶液，取供试品溶液进样，流动相洗脱，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按照面积归一化法计算供试品中所含泊沙康唑中间体z及相关基 因毒性杂质的含量；所述高效液相色谱分析采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，所述流动相为溶剂a与溶剂b的混合物，所述溶剂a为水，所述溶剂b为甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或多种。作为优选的方案，所述的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，所述溶剂b为甲醇或乙腈。本发明所述的高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法适用于泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的分离和测定，可用于单独检测某一种物质，也可同时分离和检测泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质。作为优选的方案，所述的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，还包括如下步骤：分别取泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质对照品，溶解制备成对照品溶液，分别取泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质对照品溶液进样，流动相洗脱，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的保留时间。本发明所述的高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，优选的，所述方法特别适合相关基因毒性杂质为对甲苯磺酸甲酯和/或对甲苯磺酸乙酯的分离。作为优选的方案，所述的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，所述稀释剂为溶剂a与溶剂b的混合物，所述溶剂a为水，所述溶剂b为甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或多种；优选的，溶剂a与溶剂b的体积比为25-75：75-25。作为优选的方案，所述的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，所述流动相洗脱采用梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：0.01min时，溶剂a与溶剂b的体积比为58：42；20min时，溶剂a与溶剂b的体积比为58：42；35min时，溶剂a与溶剂b的体积比为5：95；40min时，溶剂a与溶剂b的体积比为5：95；40.01min时，溶剂a与溶 剂b的体积比为58：42；48min时，溶剂a与溶剂b的体积比为58：42。作为优选的方案，所述流动相流速为0.5-2.0ml/min。作为优选的方案，所述的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，所述色谱柱柱温为25-40℃，优选所述色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm。作为优选的方案，所述的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，所述高效液相色谱分析采用紫外检测器进行检测，检测波长为205-280nm。作为优选的方案，所述的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，所述供试品溶液中，泊沙康唑中间体z的浓度优选在0.5mg/ml-3.0mg/ml范围内。本发明的高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，样品检测过程中，溶剂峰不能干扰泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质的测定，且基因毒性杂质峰与泊沙康唑中间体z主峰间、基因毒性杂质峰之间的分离度均要求大于1.5。在本发明的一个具体实施例中，还公开了一种用高效液相色谱法测定泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质的方法，具体包括以下步骤：(1)配制空白溶液：取溶剂a与溶剂b，以溶剂a与溶剂b体积比为40-60％配制，得空白溶液；(2)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体z样品，加稀释剂溶解并稀释，得供试品溶液；(3)配制基因毒性杂质溶液：取各泊沙康唑中间体z基因毒性杂质对照品，用有机溶剂溶解，再加稀释剂稀释，得基因毒性杂质溶液；所述有机溶剂为甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或多种。(4)分别取步骤(1)的空白溶液、步骤(2)的供试品溶液和步骤(3)的基因毒性杂质溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质的保留时间，按照面积归一化法计算泊沙 康唑中间体z中各相关基因毒性杂质的含量。本发明的有益效果在于：(1)本发明的一种分离泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，该方法能够实现泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的有效分离，实现了杂质有效控制，从根本上确定了产品质量，具有简便，快速，准确度高等优点；(2)本发明的一种高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z及相关基因毒性杂质的方法，采用普通的c18色谱柱，能够有效地分离并检测泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质，操作简单，准确度高；检测过程中溶剂峰不干扰泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质的测定，基因毒性杂质峰与泊沙康唑中间体z主峰间、基因毒性杂质峰之间的分离度均大于1.5；(3)本发明所述的方法简单可行，专属性强，灵敏度高，解决了泊沙康唑中间体z与其基因毒性杂质的分离测定问题，从而确保了泊沙康唑原料及其制剂的质量安全可控，与现有技术相比，本发明的方法更快捷，提高了效率，具有显著的进步性。附图说明图1空白溶剂的高效液相色谱图。图2泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。图3对甲苯磺酸甲酯的高效液相色谱图。图4对甲苯磺酸乙酯的高效液相色谱图。图5泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质混合溶液高效液相色谱图。图6实施例3泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质混合溶液高效液相色谱图。图7实施例4泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质混合溶液高效液相色谱图。图8泊沙康唑中间体z中基因毒性杂质检测限溶液的高效液相色谱图。图9泊沙康唑中间体z中基因毒性杂质加入溶液的高效液相色谱图。图10150101批次泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。图11150102批次泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。图12150103批次泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。图13150501批次泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。图14150502批次泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。图15150601批次泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。图16150602批次泊沙康唑中间体z的高效液相色谱图。具体实施方式以下将参照附图对本发明的优选实施条例进行详细描述。优选实施条例中未注明具体条件的试验方法，参照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。以下实施例中，本发明的方法中，采用的仪器及色谱条件如下：高效液相色谱仪：岛津：lc-20atvp，spd-m20avp；色谱条件以以下优选的为例：流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：30℃；进样体积：20μl。实施例1高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体z中基因毒性杂质的方法色谱柱：c18(vp-ods或agilentzorbaxsb，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：溶剂a：水；溶剂b：乙腈或甲醇，按以下梯度进行洗脱：时间(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀释剂：乙腈水溶液(水与乙腈的体积比为40：60)。试验步骤：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；(2)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体z约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；(3)配制基因毒性杂质溶液：对甲苯磺酸甲酯溶液(1.0mg/ml)：取对甲苯磺酸甲酯约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；对甲苯磺酸乙酯溶液(0.5mg/ml)：取对甲苯磺酸乙酯约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；(4)分别取步骤(1)的空白溶液、步骤(2)的供试品溶液和步骤(3)的对甲苯磺酸甲酯溶液和对甲苯磺酸乙酯溶液进样，进行高效液相色谱分析并记录色谱图，确定泊沙康唑中间体z及对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的保留时间，按照面积归一化法计算泊沙康唑中间体z中基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的含量。实施例2本发明色谱系统对泊沙康唑中间体z、对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的分离度试验1色谱柱：c18(vp-ods，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：溶剂a：水；溶剂b：乙腈，按以下梯度进行洗脱：时间(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀释剂：乙腈水溶液(水与乙腈的体积比为40：60)。试验步骤：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；(2)配制供试品溶液：精密称取中间体z50.55mg，置25ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，经计算供试品溶液浓度为2.022mg/ml。(3)配制基因毒性杂质定位溶液：对甲苯磺酸甲酯贮备液：精密称取对甲苯磺酸甲酯23.79mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为951.6μg/ml。对甲苯磺酸乙酯贮备液：精密称取对甲苯磺酸乙酯12.88mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为515.2μg/ml。对甲苯磺酸甲酯定位溶液：精密移取对甲苯磺酸甲酯贮备液0.5ml，置25ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为19.032μg/ml。对甲苯磺酸乙酯定位溶液：精密移取对甲苯磺酸乙酯贮备液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为20.608μg/ml。(4)配制混合溶液：精密称取中间体z51.26mg，置25ml量瓶中，精密移取对甲苯磺酸甲酯贮备液0.5ml、对甲苯磺酸乙酯贮备液1.0ml至该量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(5)分别取上述空白溶液、供试品溶液、对甲苯磺酸甲酯定位溶液、对甲苯磺酸乙酯定位溶液进样、混合溶液进样，记录色谱图，结果如图1-5所示，分离度试验数据见表1。表1分离度试验数据由图1-图5及表1数据说明，本发明可以有效地将泊沙康唑中间体z与其基因毒性杂质(对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯)分离，分离度均大于1.5，专属性强。实施例3本发明色谱系统对泊沙康唑中间体z、对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的分离度试验2色谱柱：c18(vp-ods，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：溶剂a：水；溶剂b：甲醇，按以下梯度进行洗脱：时间(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀释剂：乙腈水溶液(水与乙腈的体积比为40：60)。试验步骤：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；(2)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体z50.20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；经计算供试品溶液浓度为2.008mg/ml。(3)配制基因毒性杂质溶液：对甲苯磺酸甲酯溶液：取对甲苯磺酸甲酯26.56mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；经计算供试品溶液浓度为1062.4μg/ml。对甲苯磺酸乙酯溶液：取对甲苯磺酸乙酯12.51mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；经计算供试品溶液浓度为500.4μg/ml。(4)配制混合溶液：精密称取中间体z50.26mg，置25ml量瓶中，精 密移取对甲苯磺酸甲酯贮备液0.5ml、对甲苯磺酸乙酯贮备液1.0ml至该量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(5)取混合溶液进样，记录色谱图，结果如图6所示。由图6可知，保留时间为20.669min、28.723min、37.208min色谱峰分别为对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和泊沙康唑中间体z色谱峰，分离度依次为14.320、27.619；分离度均大于1.5，专属性强。实施例4本发明色谱系统对泊沙康唑中间体z、对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的分离度试验3色谱柱：c18(agilentzorbaxsb，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：溶剂a：水；溶剂b：乙腈，按以下梯度进行洗脱：时间(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀释剂：乙腈水溶液(水与乙腈的体积比为40：60)。试验步骤：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；(2)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体z50.20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；经计算供试品溶液浓度为2.008mg/ml。(3)配制基因毒性杂质溶液：对甲苯磺酸甲酯溶液：取对甲苯磺酸甲酯26.56mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；经计算供试品溶液浓度为1062.4μg/ml。对甲苯磺酸乙酯溶液：取对甲苯磺酸乙酯12.51mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；经计算供试品溶液浓度为500.4μg/ml。(4)配制混合溶液：精密称取中间体z50.26mg，置25ml量瓶中，精密移取对甲苯磺酸甲酯贮备液0.5ml、对甲苯磺酸乙酯贮备液1.0ml至该量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(5)取混合溶液进样，记录色谱图，结果如图7所示。由图7可知，保留时间为11.696min、16.694min、28.904min色谱峰分别为对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和泊沙康唑中间体z色谱峰，分离度依次为8.211、16.647；分离度均大于1.5，专属性强。上述的方法中，色谱柱采用c18柱，溶剂b可采用甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或多种，均能达到相同的效果，以下实施例均以溶剂b为乙腈，色谱柱为c18(vp-ods，250mm×4.6mm，5μm)，进行说明。其中，流动相：溶剂a：水；溶剂b：乙腈，按以下梯度进行洗脱：时间(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀释剂：乙腈水溶液(水与乙腈的体积比为40：60)。实施例5对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的检出水平试验试验步骤：(1)配制空白溶液：取水40ml，，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。(2)配制供试品溶液：精密称取中间体z约50mg，置25ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为2.0mg/ml。(3)配制检测限溶液：对甲苯磺酸甲酯贮备液：精密称取对甲苯磺酸甲酯23.79mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为951.6μg/ml。对甲苯磺酸乙酯贮备液：精密称取对甲苯磺酸乙酯12.88mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度 为515.2μg/ml。对甲苯磺酸甲酯定位溶液：精密移取对甲苯磺酸甲酯贮备液0.5ml，置25ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为19.032μg/ml。对甲苯磺酸乙酯定位溶液：精密移取对甲苯磺酸乙酯贮备液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为20.608μg/ml。定量限溶液：分别精密移取对甲苯磺酸甲酯溶液定位溶液1.0ml、对甲苯磺酸乙酯定位溶液1.0ml，置同一100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。检测限溶液：精密移取上述定量限溶液3ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算对甲苯磺酸甲酯浓度为0.05710μg/ml、对甲苯磺酸乙酯浓度为0.06182μg/ml。(4)取检测限溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，见图8，计算对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的检测限浓度(s/n＝3：1)，试验数据见表2。表2检测限试验数据由图8和表2所知，对甲苯磺酸甲酯检测限浓度为0.05710μg/ml，以中间体z中存在浓度表示为0.0029％；对甲苯磺酸乙酯检测限浓度为0.06182μg/ml，以中间体z中存在浓度表示为0.0031％；检测限s/n＝3:1，符合要求。实施例6对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的检出能力试验试验步骤：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。(2)配制供试品溶液：精密称取泊沙康唑中间体z约50mg，置25ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为2.0mg/ml。(3)配制加入溶液(平行配置两份)：精密称取泊沙康唑中间体z约50mg，置25ml量瓶中，精密移取定量限溶液7.5ml，置同一容量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。(4)取加入溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，见图9，计算对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的检测限s/n，实验数据见表3。表3加入试验数据由图9和表3数据可知，泊沙康唑中间体z中加入检测限浓度的对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯均能被有效检出。实施例7泊沙康唑中间体z样品的检测试验步骤：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。(2)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体z(共七批泊沙康唑中间体z，批号分别为：1510101、150102、150103、150501、150502、150601、150602)约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。(3)配制基因毒性杂质溶液：对甲苯磺酸甲酯溶液：取对甲苯磺酸甲酯约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为1.0mg/ml。对甲苯磺酸乙酯溶液：取对甲苯磺酸乙酯约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，经计算浓度为0.5mg/ml。(4)取供试品溶液，按上述条件进行液相色谱分析，记录色谱图，见图10-图16，检测数据见表4。表4多批次中间体z中基因毒性杂质检出数据批号称样量(mg)对甲苯磺酸甲酯对甲苯磺酸乙酯pos-z-15010150.58未检出未检出pos-z-15010250.21未检出未检出pos-z-15010351.26未检出未检出pos-z-15050150.13未检出未检出pos-z-15050250.05未检出未检出pos-z-15060150.25未检出未检出pos-z-15060250.19未检出未检出由图1-图16、表1-4说明，本发明的方法，可以有效地将泊沙康唑中间体z与其基因毒性杂质(对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯)分离，并可以准确进行测定，以控制泊沙康唑中间体z中所述基因毒性杂质的含量，从而保证最终泊沙康唑原料和制剂的质量安全可控。最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。当前第1页12