本发明涉及一种稀释液,具体涉及一种血细胞分析用稀释液。
背景技术:
血细胞稀释液通常是一类具有酸碱缓冲作用、适当的离子强度和电导率的等渗溶液。适当的离子强度、与血浆相同的渗透压,能在一定时间内完整的保持血细胞原来的体积;合适的电导率能保证获得与细胞体积相应的脉冲大小。
稀释液是临床检验中血细胞分析仪最常用的一种试剂,是完成血细胞分类或计数的关键试剂。进行血细胞分析前,清洗液与稀释液相互配合将仪器检测单元的容器与管道清洗干净,以此来降低仪器的背景值,避免前一检测样本对本次检测的干扰。除此之外,稀释液还起到维持白细胞、血小板原有形态,确保仪器对白细胞进行准确分类的作用。
市场售稀释液一般只采用硼酸盐缓冲对,部分血浆,经过溶血剂处理后,ph值低于7.5,硼酸盐缓冲对就失去了缓冲效果,造成溶液ph值不稳定,从而影响血细胞计数的准确性及血红蛋白含量测定的准确性。
技术实现要素:
本发明提出一种血细胞分析用稀释液,该稀释液缓冲能力强,有利于提高血细胞计数的准确性及血红蛋白含量测定的准确性。
本发明的技术方案是这样实现的:
一种血细胞分析用稀释液,各组分为:无机盐、抗凝剂、防腐剂、二甲基脲、硼酸盐缓冲对与磷酸盐缓冲对,且稀释液的ph缓冲范围为6.5~10.0。
作为优选,本发明的实施中,硼酸盐缓冲对为硼酸与四硼酸钠,硼酸的含量为0.6g/l,四硼酸钠的含量为1.0g/l;磷酸盐缓冲对为磷酸二氢钾与磷酸氢二钠,磷酸二氢钾的含量为0.5g/l,磷酸氢二钠为1.0g/l。
进一步,无机盐为氯化钠与硫酸钠,氯化钠的含量为6.5g/l,硫酸钠的含量为9.0g/l。
进一步,抗凝剂为乙二胺四乙酸二钠,抗凝剂的含量为0.2g/l。
进一步,防腐剂为2,4,4’-三氯-2’羟基二苯醚或者叠氮化钠,防腐剂的含量为1.0g/l。
本发明中wbc即白细胞(英文名:leukocyte,whitebloodcell,简称:wbc),旧称白血球。
本发明中rbc为红细胞又称红血球或红血细胞,是血液中最多的一种血细胞。红细胞中含有血红蛋白,因而使血液呈红色。血红蛋白能和空气中的氧结合,因此红细胞能通过血红蛋白将吸入肺泡中的氧运送给组织,而组织中新陈代谢产生的二氧化碳也通过红细胞运到肺部并被排出体外。
本发明中hgb(hemoglobin;haemoglobin;hb;hgb)每一血红蛋白分子由四分子的珠蛋白和四分子亚铁血红素组成,每个血红素又由4个吡咯环组成,在环中央有一个铁原子。血红蛋白中的铁在二价状态时,可与氧呈可逆性结合(氧合血红蛋白),如果铁氧化为三价状态。
本发明中plt(bloodplatelet)为血小板,是哺乳动物血液中的有形成分之一,是从骨髓成熟的巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质。
无机盐在稀释液中所起作用是为血液中细胞提供人体的无机盐环境,一般选用氯化钠与硫酸钠,当然也可以选用氯化钾或者硫酸钾,只要能起到提供人体的无机盐环境而不引起细胞破裂溶解即可。
应用物理或化学方法,除掉或抑制血液中的某些凝血因子,阻止血液凝固,称为抗凝。本发明中抗凝剂是指能够阻止血液凝固的化学试剂或物质。一般有天然抗凝剂(肝素,水蛭素等),ca+2鳌合剂(柠檬酸钠,氟化钾),从血细胞计数准确性和血红蛋白含量测定准确性的角度考虑,本发明中优选为螯合剂乙二胺四乙酸二钠,该螯合剂与钙离子结合成螯合物,从而阻止血液凝固。
硼酸盐缓冲对缓冲范围为7.5~10.0,当ph值低于7.5时,几乎没有缓冲性。磷酸盐缓冲对缓冲范围为6.5~8.0,当ph值低大于8.0时,几乎没有缓冲性。本发明采用硼酸盐和磷酸盐两种缓冲对,稀释液ph缓冲范围在6.5~10.0,双重缓冲体系提升了稀释液的缓冲能力。当经过溶血剂处理的血浆溶液ph值低于7.5时,溶液ph值也可以很好的保持在一定范围内,从而保证了血细胞计数的准确性和血红蛋白含量测定的准确性,特别是提高异常标本检测结果的准确性。
具体实施方式
实施例1
一种血细胞分析用稀释液,各组分为:
6.5g/l氯化钠,9.0g/l硫酸钠,0.2g/l乙二胺四乙酸二钠,1.0g/l2,4,4’-三氯-2’羟基二苯醚,0.5g/l二甲基脲,0.6g/l硼酸,1.0g/l四硼酸钠,0.5g/l磷酸二氢钾,1.0g/l磷酸氢二钠。
该稀释液的ph缓冲范围为6.5~10.0。
将各组分按照要求准确称量,用水溶解后混合、定容,然后用2.2μm滤膜过滤分装。
实施例2
一种血细胞分析用稀释液,各组分为:
6.5g/l氯化钠,9.0g/l硫酸钠,0.2g/l乙二胺四乙酸二钠,1.0g/l叠氮化钠,0.5g/l二甲基脲,0.6g/l硼酸,1.0g/l四硼酸钠,0.5g/l磷酸二氢钾,1.0g/l磷酸氢二钠。
该稀释液的ph缓冲范围为6.5~10.0。
将各组分按照要求准确称量,用水溶解后混合、定容,然后用2.2μm滤膜过滤分装。
试验例
1材料与方法
1.1仪器
1.1.1迈瑞bc-3000血细胞分析仪
1.1.2雷磁ph酸度计
1.2试剂
1.1.1迈瑞bc-3000血细胞分析仪原厂配套试剂:原厂稀释液、溶血剂、冲洗液。
1.2.2实施例1稀释液。
1.2.3标本实验当日加入edta-k2抗凝的临床病人静脉血,采血后4小时内检测完毕。
1.2.4血常规质控血。
1.3实验方法
1.3.1ph测定
实验室温度设定25℃.
测定原厂稀释液和实施例1稀释液的ph。
取10ml比色管2支,分别加入原厂稀释液和实施例1稀释液5ml,同一抗凝血20μl,然后分别加入溶血剂1ml,摇匀,60s后测定ph并记录。
抽取20个正常标本和20个异常标本,进行上述实验。
1.3.2临床检测
实验前实验室温度设定20℃,在bc-3000血细胞分析仪上测定质控血,检测各项目是否在参考值范围内,确保仪器正常工作。
抽取20个正常标本和20个异常标本,分别使用原厂稀释液和实施例1稀释液在血细胞分析仪上进行检测,记录hgb、wbc、rbc、plt等各项检测结果。
通过人工镜检方式进行检测上述20个正常标本和20个异常标本,记录hgb、wbc、rbc、plt等各项检测结果。
以人工镜检方式作为各检测项目的标准值。
2结果与分析
2.1ph
原厂稀释液ph为7.32,实施例1稀释液ph为7.35
原厂稀释液和实施例1稀释液分别与血液混合后的ph见表1和表2。
表1原厂稀释液和实施例1稀释液分别稀释正常标本的ph
表2原厂稀释液和实施例1稀释液分别稀释异常标本的ph
从表1可以看出,原厂稀释液和实施例1稀释液溶与正常血液标本混合后的ph基本相同,均稳定在7.18~7.58之间,表明两种试剂对正常标本都有较强的ph缓冲性。
原厂稀释液与异常血液标本混合后的ph变化很大,在6.60~7.89之间,实施例1稀释液与异常血液标本混合后的ph较小,在7.14~7.42之间。表明实施例1稀释液与异常血液标本混合后的ph缓冲度比发明稀释液强很多。
2.2临床检测结果及分析
分别用原厂稀释液、实施例1稀释液及人工镜检方式临床测定20个正常标本和20个异常标本,主要参数统计结果见表3和表4。
表3正常标本两种试剂及人工镜检临床测定结果比较(x±s)
表4异常标本两种试剂及人工镜检临床测定结果比较(x±s)
从表3中可以看出,正常标本wbc、rbc、hgb、plt等各项检测结果两种试剂与人工镜检基本一致,无显著性差异。
从表4中可以看出,异常标本wbc、rbc、hgb、plt等各项检测结果,原厂稀释液测定各项目结果与人工镜检有显著性差异,实施例1稀释液测定各项目结果与人工镜检无显著性差异,实施例1稀释液临床检测结果更接近标准值。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。