一种治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法与流程

文档序号:11618761阅读:285来源:国知局

发明涉及一种中药制剂的检测方法,特别涉及一种治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法。



背景技术:

处方为茵陈、丹参、柴胡、白茅根、板蓝根、甘草、大枣的纯中药制剂,是《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的药品,标准编号是ws3-b-0339-90,名称为“复方丹茵膏”,它具有清热利湿,解毒退黄的作用,临床上用于治疗急性传染性肝炎,但由于此处方的检测方法是上世纪80年代末制定的检测标准,受当时的技术水平和检测仪器条件的限制,原检测方法很不完善,其检测方法中除按照煎膏剂通则进行一般指标的检测外,没有其它任何质量监测措施,不能够很好地保证药品质量,以至于不法厂商有可能在生产药品时不严格按照处方的剂量配料,肆意减少价格较高的原料药材,致使药品的疗效明显下降,影响药品的安全有效,严重损害患者的利益。

另外,处方中用量较大的药材之一是丹参,占整个处方量的四分之一,但是丹参药材往往被秦艽假冒或者混淆入药,给药品质量和疗效造成不良影响,秦艽为龙胆科植物的干燥根,丹参为唇形科植物的干燥根及根茎,由于两者的外观性状颇相似,近年来,常常发现人们容易将两种药材混淆使用,但是两者的作用截然不同,必须要有相应的检测方法进行区分。

本药品的处方中用量最大的药材之一茵陈,占整个处方量的四分之一,但是茵陈药材容易与青蒿混淆入药,给药品质量和疗效造成不良影响,茵陈为菊科多年生草本植物茵陈蒿或滨蒿的幼苗,性味苦寒,归脾、胃、肝、胆经,主要的功效就是清利湿热,消退黄疸,亦可用于湿疮瘙痒、浸流黄水等症,而青蒿却为菊科一年生草本植物青蒿和黄花蒿的全草,而以黄花蒿为最多见、最普遍,性味苦、辛、寒,归肝、胆、肾经,主要的功效为清退虚热,凉血截疟,解暑解热等,用于疟疾寒热,阴虚发热,骨蒸劳瘵,日晡潮热,手足心热,暑热外感,发热无汗或有汗,头昏头痛,口渴脉洪数,或温热病后期,温热之邪入阴分,夜热早凉,热退无汗之证或温热病后低热不退等等,两者的作用不同,必须要有相应的检测方法进行区分。



技术实现要素:

本发明的目的,是提供一种治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法,该方法通过增加主要药材茵陈、丹参、甘草的薄层色谱鉴别,增加主要成分丹参酮ⅱa的含量测定,从而有效的监测不法厂商是否少投或不投相应原料药材,同时通过检测青蒿、秦艽的成分鉴定,从而监测易混淆的青蒿、秦艽的混入,防止了误用和乱用,有效的监测了该中药制剂(复方丹茵膏)的质量,使该药品安全有效,保证该药品的临床疗效,维护患者的利益。

本发明是这样实现的:

该中药制剂(复方丹茵膏)是以茵陈240重量份、丹参240重量份、柴胡120重量份、白茅根120重量份、板蓝根120重量份、甘草120重量份、大枣60重量份为原料药制成的。

本发明提供的一种治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法,包括性状、检查、成分鉴别、含量测定项目;其中,成分鉴别包括对药品中茵陈和青蒿的鉴别、丹参和秦艽的鉴别、甘草的鉴别;含量测定是对药品中丹参酮ⅱa的含量测定。

该检测方法如下:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别:分别以滨蒿内酯、青蒿素为对照品,以体积比计的60~90℃石油醚∶乙酸乙酯∶丙酮=5~9∶3~5∶1~3为展开剂,用薄层色谱法鉴别;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别:分别以丹参酮ⅱa、龙胆苦苷为对照品,以体积比计的苯∶乙酸乙酯=19~23∶0.5~2为展开剂,用薄层色谱法鉴别;

(3)甘草的成分鉴别:以甘草为对照药材,以体积比计的三氯甲烷∶甲醇∶水=38~42∶8~12∶0.5~2为展开剂,用薄层色谱法鉴别;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比计的甲醇∶水=72~78∶23~27为流动相;检测波长为260~280nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀;精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理10~30分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa(c19h18o3)不得少于0.5mg。

更具体的检测方法如下:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别:取本品1g,加甲醇8~12ml,超声处理20~40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为滨蒿内酯对照品溶液;取青蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为青蒿素对照品溶液;吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的60~90℃石油醚:乙酸乙酯:丙酮=6~8:3.5~4.5:1.5~2.5为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;在与青蒿素对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别是:取本品2g,加水8~12ml,搅拌使溶解,加乙醚15~25ml,振摇,放置0.5~2小时,分取乙醚层,备用,残液再加乙醚8~12ml,振摇,放置0.5~2小时,分取乙醚层,与前面的乙醚混合,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取丹参酮ⅱa对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液,作为丹参酮ⅱa对照品溶液;取龙胆苦苷对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液,作为龙胆苦苷对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的苯:乙酸乙酯=20~22:0.8~1.5为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与丹参酮ⅱa对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上,不显相同颜色的斑点;

(3)甘草的成分鉴别是:取本品10g,加乙醇20~40ml,搅拌使溶解,超声处理10~30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水10~30ml溶解,用盐酸调ph值至2~3,用乙酸乙酯振摇提取1~3次,每次10~30ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加水适量,煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至20ml,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的三氯甲烷:甲醇:水=39~41:9~11:0.8~1.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定是:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以按体积比计的甲醇:水=73~76∶24~26为流动相;检测波长为265~275nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,然后再从摇匀的混合液中精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得每1ml中含丹参酮ⅱa16μg的对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理15~25分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa(c19h18o3)不得少于0.5mg。

最佳的检测方法如下:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别是:取本品1g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为滨蒿内酯对照品溶液;取青蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为青蒿素对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以体积比计的60~90℃石油醚∶乙酸乙酯∶丙酮=7∶4∶2为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,在与青蒿素对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别是:取本品2g,加水10ml,搅拌使溶解,加乙醚20ml,振摇,放置1小时,分取乙醚层,备用,残液再加乙醚10ml,振摇,放置1小时,分取乙醚层,与前面的乙醚混合,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取丹参酮ⅱa对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液,作为丹参酮ⅱa对照品溶液,取龙胆苦苷对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液,作为龙胆苦苷对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以体积比计的苯∶乙酸乙酯=21∶1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与丹参酮ⅱa对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上,不显相同颜色的斑点;

(3)甘草的成分鉴别是:取本品10g,加乙醇30ml,搅拌使溶解,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml溶解,用盐酸调ph值至2~3,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加水适量,煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至20ml,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以体积比计的三氯甲烷∶甲醇∶水=40∶10∶1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定是:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比计的甲醇∶水=75∶25为流动相;检测波长为270nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀;精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理20分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa(c19h18o3)不得少于0.5mg。

本发明的有益效果:

本发明提供的一种治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法,茵陈、丹参、甘草的薄层色谱鉴别,以及增加了易混淆药材青蒿、秦艽的薄层色谱鉴别,增加了丹参药材中主要成分丹参酮ⅱa的含量测定,让贵细药材也有了明确的质量指标,该方法科学合理、切实可行,处方中的丹参成分也得到了有效的质量监测,另外,茵陈的混淆品青蒿和丹参的混淆品秦艽也能进行有效的检测,避免了青蒿和秦艽的混入而影响药品质量和疗效,从而避免影响人体健康,以上方法不仅能更好更全面地反映复方丹茵膏的质量,而且能有效地监测不法厂商生产伪劣复方丹茵膏,从而保证了药品的疗效,保证了药品的安全,保护了群众的健康。

具体实施方式

实施例1

处方:茵陈240g、丹参240g、柴胡120g、白茅根120g、板蓝根120g、甘草60g、大枣60g。

制法:以上七味,加水煎煮三次,合并煎液,静置,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.30(热测)以上,加蔗糖240g,加热熔化,混匀,浓缩至相对密度为1.10~1.30,即得。

性状:本品为棕褐色稠厚的半流体,味甜、微苦。

检查:相对密度为1.10~1.30。

成分鉴别及含量测定:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别:取本品1g,加甲醇8ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为滨蒿内酯对照品溶液;取青蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为青蒿素对照品溶液;吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的60~90℃石油醚:乙酸乙酯:丙酮=5:3:1为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;在与青蒿素对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别是:取本品2g,加水8ml,搅拌使溶解,加乙醚15ml,振摇,放置0.5小时,分取乙醚层,备用,残液再加乙醚8ml,振摇,放置0.5小时,分取乙醚层,与前面的乙醚混合,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取丹参酮ⅱa对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液,作为丹参酮ⅱa对照品溶液;取龙胆苦苷对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液,作为龙胆苦苷对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的苯:乙酸乙酯=19:0.5为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与丹参酮ⅱa对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上,不显相同颜色的斑点;

(3)甘草的成分鉴别是:取本品10g,加乙醇20ml,搅拌使溶解,超声处理10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,用盐酸调ph值至2~3,用乙酸乙酯振摇提取1次,每次10ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加水适量,煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至20ml,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的三氯甲烷:甲醇:水=38:8:0.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定是:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以按体积比计的甲醇:水=72∶23为流动相;检测波长为265nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,然后再从摇匀的混合液中精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得每1ml中含丹参酮ⅱa16μg的对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理15分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa为0.7mg。

实施例2

本实施例中,除成分鉴别及含量测定中的步骤(1)至步骤(4)与实施例1不同之外,其余方法均相同。

成分鉴别及含量测定:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别:取本品1g,加甲醇12ml,超声处理40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为滨蒿内酯对照品溶液;取青蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为青蒿素对照品溶液;吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的60~90℃石油醚:乙酸乙酯:丙酮=9:5:3为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;在与青蒿素对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别是:取本品2g,加水12ml,搅拌使溶解,加乙醚25ml,振摇,放置2小时,分取乙醚层,备用,残液再加乙醚12ml,振摇,放置2小时,分取乙醚层,与前面的乙醚混合,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取丹参酮ⅱa对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液,作为丹参酮ⅱa对照品溶液;取龙胆苦苷对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液,作为龙胆苦苷对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的苯:乙酸乙酯=23:2为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与丹参酮ⅱa对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上,不显相同颜色的斑点;

(3)甘草的成分鉴别是:取本品10g,加乙醇40ml,搅拌使溶解,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml溶解,用盐酸调ph值至2~3,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次30ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加水适量,煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至20ml,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的三氯甲烷:甲醇:水=42:12:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定是:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以按体积比计的甲醇:水=78∶27为流动相;检测波长为275nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,然后再从摇匀的混合液中精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得每1ml中含丹参酮ⅱa16μg的对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理25分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa为0.6mg。

实施例3

本实施例中,除成分鉴别及含量测定中的步骤(1)至步骤(4)与实施例1不同之外,其余方法均相同。

成分鉴别及含量测定:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别:取本品1g,加甲醇8ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为滨蒿内酯对照品溶液;取青蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为青蒿素对照品溶液;吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的60~90℃石油醚:乙酸乙酯:丙酮=6∶3.5∶1.5为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;在与青蒿素对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别是:取本品2g,加水8ml,搅拌使溶解,加乙醚15ml,振摇,放置0.5小时,分取乙醚层,备用,残液再加乙醚8ml,振摇,放置0.5小时,分取乙醚层,与前面的乙醚混合,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取丹参酮ⅱa对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液,作为丹参酮ⅱa对照品溶液;取龙胆苦苷对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液,作为龙胆苦苷对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的苯:乙酸乙酯=20∶0.8为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与丹参酮ⅱa对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上,不显相同颜色的斑点;

(3)甘草的成分鉴别是:取本品10g,加乙醇20ml,搅拌使溶解,超声处理10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,用盐酸调ph值至2~3,用乙酸乙酯振摇提取1次,每次10ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加水适量,煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至20ml,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的三氯甲烷:甲醇:水=39∶9∶0.8为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定是:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以按体积比计的甲醇∶水=73∶24为流动相;检测波长为265nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,然后再从摇匀的混合液中精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得每1ml中含丹参酮ⅱa16μg的对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理15分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa为0.6mg。

实施例4

本实施例中,除成分鉴别及含量测定中的步骤(1)至步骤(4)与实施例1不同之外,其余方法均相同。

成分鉴别及含量测定:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别:取本品1g,加甲醇12ml,超声处理40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为滨蒿内酯对照品溶液;取青蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为青蒿素对照品溶液;吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的60~90℃石油醚∶乙酸乙酯∶丙酮=8∶4.5∶2.5为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;在与青蒿素对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别是:取本品2g,加水12ml,搅拌使溶解,加乙醚25ml,振摇,放置2小时,分取乙醚层,备用,残液再加乙醚12ml,振摇,放置2小时,分取乙醚层,与前面的乙醚混合,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取丹参酮ⅱa对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液,作为丹参酮ⅱa对照品溶液;取龙胆苦苷对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液,作为龙胆苦苷对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的苯∶乙酸乙酯=22∶1.5为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与丹参酮ⅱa对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上,不显相同颜色的斑点;

(3)甘草的成分鉴别是:取本品10g,加乙醇40ml,搅拌使溶解,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml溶解,用盐酸调ph值至2~3,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次30ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加水适量,煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至20ml,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以按体积比计的三氯甲烷∶甲醇∶水=41∶11∶1.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定是:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以按体积比计的甲醇∶水=76∶26为流动相;检测波长为275nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,然后再从摇匀的混合液中精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得每1ml中含丹参酮ⅱa16μg的对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理25分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa为0.8mg。

实施例5

本实施例中,除成分鉴别及含量测定中的步骤(1)至步骤(4)与实施例1不同之外,其余方法均相同。

成分鉴别及含量测定:

(1)茵陈和青蒿的成分鉴别是:取本品1g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为滨蒿内酯对照品溶液;取青蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为青蒿素对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以体积比计的60~90℃石油醚∶乙酸乙酯∶丙酮=7∶4∶2为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,在与青蒿素对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;

(2)丹参和秦艽的成分鉴别是:取本品2g,加水10ml,搅拌使溶解,加乙醚20ml,振摇,放置1小时,分取乙醚层,备用,残液再加乙醚10ml,振摇,放置1小时,分取乙醚层,与前面的乙醚混合,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;取丹参酮ⅱa对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液,作为丹参酮ⅱa对照品溶液,取龙胆苦苷对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液,作为龙胆苦苷对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以体积比计的苯∶乙酸乙酯=21∶1为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与丹参酮ⅱa对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上,不显相同颜色的斑点;

(3)甘草的成分鉴别是:取本品10g,加乙醇30ml,搅拌使溶解,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml溶解,用盐酸调ph值至2~3,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加水适量,煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至20ml,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5~10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以体积比计的三氯甲烷∶甲醇∶水=40∶10∶1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;

(4)丹参酮ⅱa的含量测定是:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比计的甲醇∶水=75∶25为流动相;检测波长为270nm;理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于2000;精密称取丹参酮ⅱa对照品10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀;精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液;取本品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,在功率120w,频率59khz的条件下超声处理20分钟,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品每克含丹参酮ⅱa为0.7mg。

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