一种具有提神功效精油或其产品的筛选方法与流程

本发明涉及日化技术领域，特别涉及一种具有提神功效精油或其产品的筛选方法。

背景技术：

随着社会的发展，现代生活节奏不断加快，生存竞争日趋激烈，工作学习压力越来越大，尤其是商务人士、白领及学生，经常会感到疲惫、头脑昏沉。有些人在春天、炎热夏季、秋季容易犯困，特别是驾驶人员，更需要在疲乏困倦时提神醒脑，避免危险。因此，消费者对具有提神醒脑功效的产品需求量增加。

精油是从植物的花、叶、茎、根或果实中，通过水蒸气蒸馏法、挤压法、冷浸法或溶剂提取法提炼萃取的挥发性芳香物质。芳香精油对人体中枢神经系统可以产生影响，这种影响源于嗅觉感应神经元细胞及其受体对大脑功能的影响，这类功能包括了提神和警觉等行为。精油是由一些很小的分子所组成，这些高挥发物质，可由鼻腔粘膜组织吸收进入身体，将讯息直接送到脑部，通过大脑的边缘系统，调节情绪和身体的生理功能。精油具有刺激交感神经及副交感神经、镇静及催眠、兴奋提神、调整精神状况、抗忧郁、缓解心理压力、修复神经系统的作用。动物研究显示，某些芳香精油可以在一定程度上增加体液中多巴胺浓度。

目前，芳香精油功效的评估多基于原料种属，原料产地，原料成分，原料含量，原料提取和制备工艺，包括凝固点、熔点、沸点、密度、折光度、颜色在内的原料物理属性，原料气味，原料应用的传统经验，以及少量人体使用感受和某些特定体液测量等。上述对芳香精油提神功效进行评估的技术手段，多基于芳香精油原料的物理属性、制备工艺、传统经验以及感官判断和体验。但针对芳香精油生物学功效评估的技术手段，缺乏在生物学水平的客观标准支持，无法固化和量化芳香精油提神功效的相关生物学功效，导致在工业应用中在挑选具有提神功效的芳香精油原料、配方应用和功效宣传等方面，受到很大局限性和不确定性。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了一种具有提神功效精油或其产品的筛选方法。该筛选方法具有快速准确、数据可重复、方法可固化、标准客观以及应用安全的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种具有提神功效精油或其产品的筛选方法，包括如下步骤：

采用精油或其产品处理大脑神经元细胞，检测5-羟色胺、γ-氨基丁酸、褪黑激素、甘氨酸、多巴胺、谷氨酸、去甲肾上腺素和乙酰胆碱的浓度，获得处理组神经递质浓度；

根据如下公式检测处理组神经递质浓度与空白对照组神经递质浓度相比较的变化率：

其中，c1为处理组神经递质浓度，c0为空白对照组神经递质浓度，vc为处理组神经递质浓度与空白对照组神经递质浓度相比较的变化率；

根据vc分别获得5-羟色胺、γ-氨基丁酸、褪黑激素、甘氨酸、多巴胺、谷氨酸、去甲肾上腺素和乙酰胆碱的提神分值xi；提神分值如下：

根据如下公式检测精油或其产品的提神总分值x：

x＝x1+x2+x3+x4+x5+x6+x7+x8

其中，x为提神总分值，x1为5-羟色胺的提神分值，x2为γ-氨基丁酸的提神分值，x3为褪黑激素的提神分值，x4为甘氨酸的提神分值，x5为多巴胺的提神分值，x6为谷氨酸的提神分值，x7为去甲肾上腺素的提神分值，x8为乙酰胆碱的提神分值；

当x≥44时，则精油或其产品为具有提神功效的精油或其产品；

当x＜44时，则精油或其产品为不具有提神功效的精油或其产品。

作为优选，精油或其产品的质量百分比浓度为0.00005％～0.05％。

优选地，精油的质量百分比浓度为0.0005％。

作为优选，精油或其产品处理大脑神经元细胞的时间为5～60min。

优选地，处理的时间为30min。

作为优选，精油或其产品大脑神经元细胞为培养5～15天的大脑神经元细胞。

优选地，大脑神经元细胞为培养10天的大脑神经元细胞。

作为优选，培养的培养基为马血清培养液，细胞接种量为1×10⁴个/ml，培养温度为37℃，培养条件为5％co2。

作为优选，大脑神经元细胞为人体大脑神经元细胞或动物大脑神经元细胞。

在本发明提供的实施例中，动物大脑神经元细胞为鼠大脑神经元细胞。

在本发明提供的实施例中，动物大脑神经元细胞为小鼠大脑神经元细胞。

本发明提供了一种具有提神功效精油或其产品的筛选方法。该筛选方法包括：采用精油或其产品处理大脑神经元细胞，检测5-羟色胺等浓度，获得处理组神经递质浓度；检测处理组神经递质浓度与空白对照组神经递质浓度相比较的变化率vc；根据vc分别获得各个神经递质的提神分值xi；根据求和公式检测精油或其产品的提神总分值x；当x≥44时，则精油或其产品为具有提神功效的精油或其产品。本发明至少具有如下优势之一：

本发明从生物体外细胞及其生理和生化层面，对芳香精油原料和产品进行与提神提神功效相关的可量化评估；

本发明可以解决芳香精油及其产品提神功效的生物学客观数据，对芳香精油及其产品的提神功效评估进行量化；

本发明可以对芳香精油及其产品提神功效进行重复验证；

本发明对芳香精油及其产品提神功效的量化评估和验证均在体外进行，便于操作，同时，这一体外评估方法具有可重复的固化特点；

本发明对芳香精油及其产品提神功效的评估方法，可以有效支持具有提神功效芳香精油的原料挑选、配方设计和调配及其功效检测；

可见，本发明筛选方法针对芳香精油及其产品，进行提神功效的生物学体外评估，具有快速准确、数据可重复、方法可固化、标准客观、以及应用安全的特点。

本发明筛选方法可以加速对芳香精油及其产品的筛选评估进度，对建立具有提神功效的芳香精油及其产品配方调配进行快速评估，为具有提神功效的芳香精油及其产品的使用者提供产品功效说明、产品安全说明、产品使用剂量说明以及产品使用方法说明。

附图说明

图1示脑神经元细胞培养第10天生长状况；

图2～4分别示薄荷精油放置大脑神经元细胞后0～60分钟培养液中神经元细胞所释放的多巴胺、γ氨基丁酸和褪黑激素水平；

图5示柠檬草油对大脑神经元细胞神经递质多巴胺水平的影响；

图6～13分别示不同芳香精油对神经细胞释放5-羟色胺、γ-氨基丁酸、乙酰胆碱、去甲肾上腺素、甘氨酸、谷氨酸、褪黑激素、多巴胺水平的影响；

图14示本发明的工艺流程。

具体实施方式

本发明公开了一种具有提神功效精油或其产品的筛选方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

以下实施案例中的％，如无特别说明，均为质量百分比。

在以下实施例中，在检测各神经递质水平时采用市售试剂盒进行检测，试剂盒中包括显色剂a和显色剂b。

本发明提供的具有提神功效精油或其产品的筛选方法中所用精油或脑神经元细胞均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1脑神经元细胞的培养

1、培养原代小鼠脑神经元细胞

选择新生1天小鼠，分离提取小鼠大脑中神经元细胞，分散于含有马血清的neurobasalmedium(thermofisher,cat.#21103-049)培养液中，然后置于37℃细胞培养箱中进行培养，培养条件为空气:二氧化碳为95:5。每隔一天更换脑神经元细胞培养液。脑神经元细胞培养第10天生长状况如图1所示。

2、培养原代人脑神经元细胞

通过商业途径购买人脑神经元细胞，并将细胞置于含有马血清的neurobasalmedium(thermofisher,cat.#21103-049)培养液中，然后置于37℃细胞培养箱中进行培养，培养条件为空气:二氧化碳为95:5。每隔一天更换脑神经元细胞培养液。脑神经元细胞培养第10天生长状况与图1相近。

实施例2薄荷精油对大脑神经元细胞3种神经递质释放水平影响

薄荷精油(mintpeppermintyakimaoil)对大脑神经元细胞神经递质释放水平影响时间。将薄荷精油加入培养第10天的大脑神经元细胞培养体系中，并使薄荷精油在大脑神经元细胞培养体系中的最终浓度为0.0005％、0.0050％和0.0500％，测量薄荷精油放置大脑神经元细胞后0～60分钟培养液中神经元细胞所释放的多巴胺(dopamine)、γ氨基丁酸(gaba)和褪黑激素(melatonin)水平。本实施例中的神经递质样本收集时间为第5分钟、第10分钟、第15分钟、第20分钟、第30分钟、第40分钟、第50分钟和第60分钟。结果如图2-4所示。

试验结果表明：薄荷精油对大脑神经元细胞胞释放多巴胺(dopamine)、γ氨基丁酸(gaba)和褪黑激素(melatonin)等神经递质的时间可以在加入样品后第5分钟开始变得明显，这一过程可以持续60分钟。数据提示，芳香精油样品对大脑神经元细胞神经递质释放的样本收集时间在第5分钟到第30分钟之间更具有一定的线性关系。

实施例3薄荷精油对大脑神经元细胞多种神经递质释放水平影响

在不同浓度下，薄荷精油(mintpeppermintyakimaoil)对大脑神经元细胞在第30分钟时，对神经元细胞培养体系中不同神经递质释放水平的影响，见下表1。本实施例所涉及的神经递质包括多巴胺(dopamine)、五羟色胺(5hydroxy-tryptamine)、γ-氨基丁酸(gammaaminobutyricacid)、乙酰胆碱(acetylcholine)、去甲肾上腺素(noradrenaline)、甘氨酸(glycine)、谷氨酸盐(glutamine)和褪黑激素(melatonin)。

表1薄荷精油对大脑神经元细胞的不同神经递质释放水平的影响

上述试验结果显示，在一定浓度下，薄荷精油可促进退黑色素、多巴胺、去甲肾上腺素的释放，同时抑制5-羟色胺、γ-氨基丁酸、甘氨酸、乙酰胆碱、谷氨酸的释放。此外，这一实验结果显示，不同剂量薄荷精油对促进或者抑制不同神经递质的释放具有一定的量效关系。

实施例4柠檬草油对大脑神经元细胞神经递质多巴胺水平的影响

本实施例涉及了柠檬草油对大脑神经元细胞神经递质多巴胺水平的影响以及提神功效的分析。

试验方法：将柠檬草油加入培养第10天的大脑神经元细胞培养体系中，并使柠檬草油在大脑神经元细胞培养体系中的最终浓度为0％、0.00005％、0.0005％，测量精油放置大脑神经元细胞后30分钟培养液中神经元细胞所释放的神经递质多巴胺水平。

检测结果如图5所示。实验数据显示，不同浓度的柠檬草油，可以提升大脑神经元细胞多巴胺水平。多巴胺对人的感觉、兴奋、记忆等信息传递密切相关，因此，本申请通过这项测量可以从数据上得知，柠檬草油在500ppm浓度时，对脑神经元细胞的兴奋性刺激作用提升了32.22％，在这一浓度下调配相关产品，可能获得对人体较好的提神作用。

实施例5提神功效精油的筛选方法

本实施例研究了不同芳香精油对多种大脑神经元细胞神经递质水平的影响。本实施例所涉及的芳香精油浓度均为0.0005％。

试验方法：将精油加入培养第10天的大脑神经元细胞培养体系中，并使精油在大脑神经元细胞培养体系中的最终浓度为0.0005％，测量精油放置大脑神经元细胞后30分钟培养液中神经元细胞所释放的神经递质水平。

本实施案例所涉及的神经递质包括多巴胺(dopamine)、五羟色胺(5hydroxy-tryptamine)、γ-氨基丁酸(gammaaminobutyricacid)、乙酰胆碱(acetylcholine)、去甲肾上腺素(noradrenaline)、甘氨酸(glycine)、谷氨酸盐(glutamine)和褪黑激素(melatonin)。

本实施例所涉及的芳香精油包括芳樟油(hohe)，迷迭香油(rosemaryoil)，罗勒油(basiloil)，柠檬草油(lemongrassoil)，依兰油(ylangiiimadagascareo)，薄荷油(mintpeppermintyakimaoil)，柠檬油(lemonoilitaly)，桉叶油(eucalyptusglobulusoil)。

不同芳香精油对神经细胞处理后的多种神经递质水平检测结果如图6-13所示。

根据上述检测结果，采用如下的评估体系计算各种芳香精油在提神方面的分值。工艺流程图见图14。提神作用评估体系的标准如表2所示，计算结果如表3所示。

表2芳香精油对大脑神经元细胞在提神作用评估体系的标准

注：评分数值越高，说明兴奋型神经递质浓度越高或抑制型神经递质浓度越低。

表3芳香精油对大脑神经元细胞的提神分值

*注：

es10：薄荷精油12％+柠檬草油7％+柠檬桉精油4％+葡萄柚精油5％+佛手柑精油8％+罗勒精油6％+没药精油8％+甜杏仁油50％；

es32：苦橙精油6％+超级薰衣草精油8％+依兰精油4％+天竺葵精油4％+丝柏精油3％+玫瑰草精油4％+罗马洋甘菊精油6％+橙花精油7％+安息香精油8％+甜杏仁油50％。

本发明以44分为分界线，总分越高，样品的提神效果越好。表3数据显示，某些浓度的薄荷油和柠檬草油对脑神经元细胞神经递质释放水平的总分值超过44分，提示在相应浓度下，该样品可能具有较好的提神作用；而其他精油样品在相应浓度下对脑神经元细胞神经递质释放水平的总分值未超过44分，则提示在相应浓度下，该样品可能不具有较好的提神作用。实验3中样品es32和es10分别为阴性和阳性对照，es32对脑神经元细胞神经递质释放水平的总分值为28分，es10对脑神经元细胞神经递质释放水平的总分值为51分，提示采用这一评估方法，可以获得与对照样品相一致的提神作用的判断。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。