全血EBV‑DNA定量室内质控品的制作方法

本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种全血ebv-dna定量室内质控品。

背景技术：

ebv是一种与鼻咽癌、传染性单核细胞增多症、儿童淋巴瘤等疾病密切相关的感染源，有针对性地进行ebv-dna定量检测对于相关疾病的筛查和诊断方面具有重要意义。

由于ebv主要感染人类口咽部的上皮细胞和b淋巴细胞，相较之下全血细胞的检测要优于血清学的检测。

目前应用于ebv的检测主要有免疫法和实时荧光pcr检测法。实时荧光pcr检测法的主要优势在于能准确的对ebv-dna进行定量，有助于诊断病毒的早期感染、以及减少诊断和治疗的盲目性，对临床的诊疗具有一定意义，但没有合适的全血ebv质控品。

技术实现要素：

为解决现有技术的ebv检测中，实时荧光pcr检测法没有合适的全血ebv质控品的技术问题，本发明提供一种解决上述问题的全血ebv-dna定量室内质控品。

一种全血ebv-dna定量室内质控品，包括低值样本、高值样本、全阴样本，所述全血ebv-dna定量室内质控品的配制方法包括以下步骤：

步骤1：收集ebv-dna检测结果为阴性的全血标本若干个、检测结果大于10⁶iu/ml的全血标本若干个，分别记为阴性样本和阳性样本；

步骤2：备三个样品管，取一定量的所述阴性样本分别置于二个所述样品管中，取一定量的所述阳性样本置于另一所述样品管中，三个所述样品管均充分颠倒混匀，分别记为第一阴性样品管、第二阴性样品管、阳性样品管；

步骤3：对所述阳性样品管中的所述阳性样本进行ebv-dna检测，检测结果记为备用高值；

步骤4：取一定量所述阳性样本加入所述第一阴性样本管中，充分颠倒混匀后进行ebv-dna检测；

如检测结果处于10³iu/ml至10⁴iu/ml之间，则将检测结果记为备用低值；

步骤5：所述步骤四中的检测结果如小于10³iu/ml，则继续向所述第一阴性样本管中加入适量的所述阳性样本，充分颠倒混匀后进行ebv-dna检测；

如大于10⁴iu/ml，则于所述第二阴性样品管中取适量的所述阴性样本加入所述第一阴性样本管中，充分颠倒混匀后进行ebv-dna检测；

直至检测结果处于10³iu/ml至10⁴iu/ml之间，并将检测结果记为备用低值；

步骤6：于所述第一阴性样品管、所述第二阴性样品管、所述阳性样品管中分别加入一定量的叠氮钠，并充分颠倒混匀；

步骤7：分别对加入所述叠氮钠后的所述第一阴性样品管、所述第二阴性样品管、所述阳性样品管中的样本进行ebv-dna检测，明确所述备用低值和所述备用高值的最终值；

所述第二阴性样品管中的所述阴性样本的检测结果记为全阴值；

步骤8：将所述第一阴性样品管、所述第二阴性样品管、所述阳性样品管中的样本分别按照每管300ul的量分装至多个ep管中，即为所述低值样本、所述全阴样本、所述高值样本；

步骤9：将所述低值样本、所述全阴样本、所述高值样本低温冷冻储存。

在本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的一种较佳实施例中，所述步骤6中，所述第一阴性样品管、所述第二阴性样品管、所述阳性样品管中所述叠氮钠的浓度均在0.02%至0.05%之间。

在本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的一种较佳实施例中，所述全血ebv-dna定量室内质控品的的验证方法包括：稳定性评估、均匀性评估、防腐评估。

所述稳定性评估每月进行一次，包括以下步骤：

步骤1-1：每天于所述全血ebv-dna定量室内质控品中抽取两份样本进行ebv-dna检测，持续三天；

步骤1-2：共抽取的六份样本中至少五份样本的检测结果偏倚小于室间质评评价界限，则样本稳定性合格。

所述均匀性评估包括以下步骤：

步骤2-1：于所述全血ebv-dna定量室内质控品中随机抽取十个样本进行ebv-dna检测；

步骤2-2：对所述步骤2-1中的检测结果，分别求其对数值与对数值均值，求得平均差，作为评估基准判定均匀程度。

所述防腐评估包括以下步骤：

步骤3-1：于所述全血ebv-dna定量室内质控品中抽取三份样本进行ebv-dna检测，抽取三份未添加所述叠氮钠的同类样本进行ebv-dna检测；

步骤3-2：对所述步骤3-1中的两批检测结果分别取对数值，求得二者的差值，作为评估基准判定腐败程度。

在本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的一种较佳实施例中，所述全血ebv-dna定量室内质控品的质控方法包括以下步骤：

步骤4-1：按一定规则将所述全血ebv-dna定量室内质控品随机加入正常待检样本中，每二十天将整体的检测结果的对数值进行一次westgard多规则质控图分析；

步骤4-2：完成后设置室内质控规则1-3s及2-2s。

相较于现有技术，本发明提供的所述全血ebv-dna定量室内质控品具有以下有益效果：

一、所述全血ebv-dna定量室内质控品解决了试剂盒内自带质控品不能满足实验要求的问题。同时，由于所述全血ebv-dna定量室内质控品的配制方法具有规范、明确的操作方法及清晰的制作流程，保证质控品的良好质量保证和对实验的敏感性。

二、所述全血ebv-dna定量室内质控品的验证方法中对所述全血ebv-dna定量室内质控品进行均匀性、稳定性验证及抑菌剂比对实验，保证了质控品的质量，使得检测结果更为可靠。

三、所述全血ebv-dna定量室内质控品的质控方法中采用了westgard多规则质控图分析，保证了其对实验敏感、且具有有监测意义。

附图说明

图1是本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的配制方法的流程图；

图2是本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的验证方法的流程图；

图3是本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的质控方法的流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。

请参阅图1，是本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的配制方法1的流程图。

所述全血ebv-dna定量室内质控品的配制方法1包括以下步骤：

s1：样本采集：

收集ebv-dna检测结果为阴性的全血标本若干个、检测结果大于10⁶iu/ml的全血标本若干个，分别记为阴性样本和阳性样本；

s2：样本配置：

备三个45ml样品管，取90ml的所述阴性样本平均分置于二个所述样品管中，取45ml的所述阳性样本置于另一所述样品管中，三个所述样品管均充分颠倒混匀，分别记为第一阴性样品管、第二阴性样品管、阳性样品管；

s3：获取备用高值

对所述阳性样品管中的所述阳性样本进行ebv-dna检测，检测结果记为备用高值；

s4：获取备用低值

取450μl所述阳性样本加入所述第一阴性样本管中，充分颠倒混匀后进行ebv-dna检测，检测结果处于10³iu/ml至10⁴iu/ml之间，将检测结果记为备用低值；

s5：防腐：

于所述第一阴性样品管、所述第二阴性样品管、所述阳性样品管中分别加入一定量的叠氮钠，使其最终浓度为0.02%至0.05%之间，并充分颠倒混匀；

s6：确定质控值：

分别对加入所述叠氮钠后的所述第一阴性样品管、所述第二阴性样品管、所述阳性样品管中的样本进行ebv-dna检测，明确所述备用低值和所述备用高值的最终值；

所述第二阴性样品管中的所述阴性样本的检测结果记为全阴值；

s7：确定质控品：

将所述第一阴性样品管、所述第二阴性样品管、所述阳性样品管中的样本分别按照每管300ul的量分装至多个ep管中，并分别标记为所述低值样本、所述全阴样本、所述高值样本，即为所述全血ebv-dna定量室内质控品；

s8：储存：

将所述全血ebv-dna定量室内质控品置于-70℃的环境下，冷冻储存。

请参阅图2，是本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的验证方法2的流程图。

所述全血ebv-dna定量室内质控品的验证方法2包括稳定性评估21、均匀性评估22、防腐评估23。

所述稳定性评估21每月进行一次，具体包括以下步骤：

s11：抽样检测：

每天于所述全血ebv-dna定量室内质控品中抽取两份样本进行ebv-dna检测，持续三天；

s12：偏倚判定：

共抽取的六份样本中至少五份样本的检测结果偏倚小于室间质评评价界限，则样本稳定性合格。

所述均匀性评估22包括以下步骤：

s21：抽样检测：

于所述全血ebv-dna定量室内质控品中随机抽取十个样本进行ebv-dna检测；

s22：平均差评估：

对所述步骤2-1中的检测结果，分别求其对数值与对数值均值，求得平均差，作为评估基准判定均匀程度。

所述防腐评估23包括以下步骤：

s31：抽样检测

于所述全血ebv-dna定量室内质控品中抽取三份样本进行ebv-dna检测，抽取三份未添加所述叠氮钠的同类样本进行ebv-dna检测；

s32：差值评估：

对所述步骤3-1中的两批检测结果分别取对数值，求得二者的差值，作为评估基准判定腐败程度。

请参阅图3，是本发明提供的全血ebv-dna定量室内质控品的质控方法3的流程图。

所述全血ebv-dna定量室内质控品的质控方法3包括以下步骤：

s41：质控分析：

所述全血ebv-dna定量室内质控品随机混入正常待检样本中，每二十天将整体的检测结果的对数值进行一次westgard多规则质控图分析；

s42：质控规则：

所述s41完成后设置室内质控规则1-3s及2-2s。

相较于现有技术，本发明提供的所述全血ebv-dna定量室内质控品具有以下有益效果：

一、所述全血ebv-dna定量室内质控品解决了试剂盒内自带质控品不能满足实验要求的问题。同时，由于所述全血ebv-dna定量室内质控品的配制方法1具有规范、明确的操作方法及清晰的制作流程，保证质控品的良好质量保证和对实验的敏感性。

二、所述全血ebv-dna定量室内质控品的验证方法2中对所述全血ebv-dna定量室内质控品进行均匀性、稳定性验证及抑菌剂比对实验，保证了质控品的质量，使得检测结果更为可靠。

三、所述全血ebv-dna定量室内质控品的质控方法3中采用了westgard多规则质控图分析，保证了其对实验敏感、且具有有监测意义。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。