液相色谱法测定阿戈美拉汀中间体及其有关物质的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定阿戈美拉汀中间体及其有关物质的方法。

背景技术：

阿戈美拉汀是首个褪黑素受体激动剂又是5-羟色胺2c(s-htx)受体拮抗剂。是一种被批准用于治疗精神疾病的药物，主要用于抗抑郁、抗焦虑、调整睡眠节律及调节生物钟作用；阿戈美拉汀中间体化学名为(7-甲氧基-1-萘基)乙胺，分子式为c13h15no，分子量为201.26，其结构式如下：

在合成阿戈美拉汀的过程中，需要控制一些关键中间体的纯度，以减少副反应的发生和杂质的生成，从而提高产物收率和纯度。合成该化合物涉及的有关物质有5个，分别为阿戈美拉汀杂质a、b、c、d、e结构式如下：

阿戈美拉汀杂质a阿戈美拉汀杂质b

阿戈美拉汀杂质c阿戈美拉汀杂质d

阿戈美拉汀杂质e。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种分析阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质的方法，从而实现阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质分离和测定，保证阿戈美拉汀原料药的质量可控。

本发明所述的用液相色谱法分析阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质的方法，是采用八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以缓冲盐溶液-有机相为流动相。

本发明所采用的色谱柱品牌为inertsil、alltima或phenomenex。

上述所说的有机相选自以下溶剂中的一种或几种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃，优选甲醇或乙腈。

上述所说的流动相中的缓冲盐溶液选自磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、高氯酸盐，优选磷酸酸盐。缓冲盐溶液的浓度为0.01～0.1mol/l，缓冲盐溶液的ph为2.0~5.0。

上述所说的方法中流动相的洗脱梯度为：

。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

1）取阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质适量，加乙腈适量溶解，配制成每1ml含阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质5～50μg的样品溶液。

2）设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为200～300nm，柱温箱温度为20～40℃，自动进样器温度为10～30℃。

3）取1）的样品溶液10～50μl，注入液相色谱仪，完成阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质的测定。其中：

高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，

cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站；

色谱柱：c8（inertsil，250×4.6mm，5μm）；

流动相：a相：0.03mol/l磷酸二氢钾缓冲液，b相：乙腈；

梯度洗脱：

；

流速：1.0ml/min；

检测波长：230nm；

柱温：40℃；

进样体积：10μl；

自动进样器温度：25℃。

本发明能够有效的分离阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质，解决了阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质的分离测定问题，从而确保了阿戈美拉汀原料药的质量可控。

附图说明

图1为实施例1时的阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质hplc图；

图2为实施例1时的空白溶剂hplc图；

图3为实施例2时的阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质hplc图；

图4为实施例3时的阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质hplc图。

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站；

色谱柱：c8（alltima，250×4.6mm，5μm）；

流动相：a相：0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液，b相：乙腈；

梯度洗脱：

；

流速：1.0ml/min；

检测波长：230nm；

柱温：40℃；

进样体积：10μl；

自动进样器温度：25℃。

实验步骤

取阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质适量，用乙腈溶解样品，配制成含阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质5μg/ml的溶液作为供试品溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1，图1为阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质色谱图，图中保留时间为41.013min的色谱峰为阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺的色谱峰，其它为其有关物质的色谱峰；图2为空白溶剂色谱图。

实施例2

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站；

色谱柱：c8（inertsil，250×4.6mm，5μm）；

流动相：a相：0.03mol/l磷酸二氢钾缓冲液，b相：乙腈；

梯度洗脱：

；

流速：1.0ml/min；

检测波长：230nm；

柱温：35℃；

进样体积：10μl；

自动进样器温度：25℃。

实验步骤

取阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其各有关物质适量，用乙腈溶解样品，配制成含阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及各有关物质5μg/ml的溶液作为供试品溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3，图3为阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质色谱图，图中保留时间为41.577min的色谱峰为阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺的色谱峰，其它为其有关物质的色谱峰。

实施例3

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站；

色谱柱：c8（inertsil，250×4.6mm，5μm）；

流动相：a相：0.01mol/l磷酸二氢钾缓冲液，b相：乙腈；

梯度洗脱：

；

流速：1.0ml/min；

检测波长：230nm；

柱温：40℃；

进样体积：10μl；

自动进样器温度：25℃。

实验步骤

取阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其各有关物质适量，用乙腈溶解样品，配制成含阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及各有关物质5μg/ml的溶液作为供试品溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图4，图4为阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺及其有关物质色谱图，图中保留时间为41.102min的色谱峰为阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙胺的色谱峰，其它为其有关物质的色谱峰。