阿戈美拉汀中间体及其有关物质的分离检测方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定阿戈美拉汀中间体2-（7-甲氧基萘-1-基）乙腈及其有关物质的方法。

背景技术：

阿戈美拉汀是首个褪黑素受体激动剂又是5-羟色胺2c(s-htx)受体拮抗剂。是第一种被批准用于治疗精神疾病的药物，主要用于抗抑郁、抗焦虑、调整睡眠节律及调节生物钟作用。阿戈美拉汀中间体化学名为2-（7-甲氧基萘-1-基）乙腈，分子式为c13h11no，分子量为197.24，结构式为：

。

对阿戈美拉汀中间体化学纯度的有效控制，可减少阿戈美拉汀合成中副反应的发生和杂质的生成，从而提高产物收率和纯度。对于阿戈美拉汀中间体主要控制的有关物质有2个，分别是有关物质1：7-甲氧基-2-萘满酮和有关物质2：7-甲氧基-3，4-二氢-1-萘基乙腈，

结构式分别为：

有关物质1有关物质2。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种分析阿戈美拉汀中间体化学纯度的方法，从而实现阿戈美拉汀中间体及其有关物质分离和测定，最终保证阿戈美拉汀的质量可控。

本发明所述的用液相色谱法分析阿戈美拉汀中间体其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例含酸水溶液-有机相为流动相。

本发明所采用的色谱柱品牌为kromasil、apollo或dikma等。

上述所说的有机相选自以下溶剂中的一种或几种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃，优选甲醇或乙腈。

上述所说的酸水溶液中包含的酸选自以下无机盐中的一种：磷酸、碳酸、甲酸、乙酸，优选磷酸。

其中酸水溶液中包含的酸的浓度为0.1～0.5%，优选浓度为0.1%。

上述所说的方法，其含酸水溶液与有机相的体积比为磷酸水-乙腈=50:50~60：40，优选比例为55:45。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

1）取阿戈美拉汀中间体适量，加乙腈适量溶解，配制成每1ml含阿戈美拉汀中间体及其有关物质0.1～1.0mg的样品溶液。

2）设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为200～300nm，柱温箱温度为20～30℃。

3）取1）的样品溶液10～50μl，注入液相色谱仪，完成阿戈美拉汀中间体化学纯度的测定。其中：

高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站

色谱柱：c18（kromasil，250×4.6mm，5μm）；

流动相：0.1%磷酸水-乙腈（55:45）

流速：1.0ml/min

检测波长：220nm

柱温：室温

进样体积：10μl

本发明能够有效的分离阿戈美拉汀中间体及其有关物质，解决了阿戈美拉汀中间体及其有关物质的分离测定问题，从而确保了阿戈美拉汀原料药的质量可控。

附图说明

图1为实施例1时的阿戈美拉汀中间体及其有关物质hplc图；

图2为实施例1时的空白溶剂hplc图；

图3为实施例2时的阿戈美拉汀中间体及其有关物质hplc图；

图4为实施例3时的阿戈美拉汀中间体及其有关物质hplc图；

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站

色谱柱：c18（apollo，250×4.6mm，5μm）

流动相：0.1%磷酸水-乙腈（55:45）

流速：1.0ml/min

检测波长：220nm

柱温：室温

进样体积：10μl

实验步骤

取阿戈美拉汀中间体及其各有关物质适量，用乙腈溶解样品，配制成含阿戈美拉汀中间体0.2mg/ml，各有关物质5μg/ml的溶液作为供试品溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~2，图1为阿戈美拉汀中间体及其有关物质色谱图，图中保留时间24.348min的色谱峰为阿戈美拉汀中间体，其余为各有关物质色谱峰；图2为空白溶剂色谱图。

实施例2

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站

色谱柱：c18（kromasil，250×4.6mm，5μm）

流动相：0.2%磷酸水-乙腈（50:50）

流速：1.0ml/min

检测波长：220nm

柱温：室温

进样体积：10μl

实验步骤

取阿戈美拉汀中间体及其各有关物质适量，用乙腈溶解样品，配制成含阿戈美拉汀中间体0.2mg/ml，各有关物质5μg/ml的溶液作为供试品溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3，图3为阿戈美拉汀中间体及其有关物质色谱图，图中保留时间15.440min的色谱峰为阿戈美拉汀中间体，其余为各有关物质色谱峰。

实施例3

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10asvp柱温箱，lcsolution工作站

色谱柱：c18（kromasil，250×4.6mm，5μm）

流动相：0.1%磷酸水-乙腈（55:45）

流速：1.0ml/min

检测波长：220nm

柱温：室温

进样体积：10μl

实验步骤

取阿戈美拉汀中间体及其各有关物质适量，用乙腈溶解样品，配制成含阿戈美拉汀中间体0.2mg/ml，各有关物质5μg/ml的溶液作为供试品溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图4，图4为阿戈美拉汀中间体及其有关物质色谱图，图中保留时间21.566min的色谱峰为阿戈美拉汀中间体，其余为各有关物质色谱峰。

对上述阿戈美拉汀中间体及其有关物质的分析方法进行如下验证：

1、溶剂干扰及系统适用性实验

取阿戈美拉汀中间体适量，乙腈溶解并配置成浓度为0.2mg/ml的溶液作为样品溶液；取阿戈美拉汀中间体及其各有关物质适量，用乙腈溶解样品，配制成含阿戈美拉汀中间体0.2mg/ml，各有关物质5μg/ml的溶液作为系统适用性溶液；另取乙腈适量作为空白溶剂，按实施例3的色谱条件进行分离测定，记录色谱图。由图4可知，在此条件下，阿戈美拉汀及其有关物质的色谱峰峰形良好，分离度符合要求，且溶剂对阿戈美拉汀中间体及其有关物质的测定无干扰。

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2、溶液稳定性

取阿戈美拉汀中间体适量，乙腈溶解并配置成浓度为0.2mg/ml的溶液作为供试品溶液，在室温条件下，按实施例3的色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10、12、16、20和24小时进样，考察样品定量测定时溶液的稳定性，由结果可见，该供试品溶液在24小时内稳定。

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3、进样重复性

取阿戈美拉汀中间体适量，乙腈溶解并配置成浓度为0.2mg/ml的溶液作为供试品溶液，按实施例3的色谱条件，重复进样6针，考察样品定量测定时的进样重复性。由结果可见，主峰保留时间和峰面积无明显变化，rsd%值符合要求，进样重复性良好。

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4、重复性

取阿戈美拉汀中间体适量，乙腈溶解并配置成浓度为0.2mg/ml的溶液作为供试品溶液，平行配制6份。按实施例3的色谱条件，考察样品定量测定时的重复性。由结果可见，主峰保留时间和主峰纯度无明显变化，rsd%值符合要求，重复性良好。

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5、中间精密度

不同日期，不同人，不同仪器条件下，按照重复性实验操作。由结果可见，合并重复性共12个样品，主峰保留时间和主峰纯度无明显变化，rsd%值符合要求，中间精密度良好。

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6、耐用性

进一步考察了流速、色谱柱品牌等的耐用性。结果发现，在微调流动相比例、流速、柱温、ph值和改变色谱柱品牌的条件下，阿戈美拉汀中间体及其有关物质的峰面积，相对保留时间，分离度，理论塔板数均无显著差异，说明该方法耐用性良好。

7、检测限

分别取阿戈美拉汀中间体及其各有关物质适量，精密称定，加乙腈溶解样品，配制成各自的贮备液，再分别精密量取贮备液适量，逐级稀释，按实施例3的色谱条件进样考察。阿戈美拉汀中间体及其各有关物质检测限数据如下表所示：

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