专利名称：一种分离分析阿戈美拉汀中间体及其终产品的hplc方法
技术领域：
本发涉一种高效液相分析方法，尤其是一种阿戈美拉汀中间体及其终产品的 分离与分析测定。
背景技术：
阿戈美拉汀(Agomelatine)是一种褪黑素激动剂，具有抗抑郁症状作用， 可在不影响白天活动状态的情况下改善夜间睡眠情况。在化学合成过程中经过几 个中间体关键歩骤，所以在终产品中可能残留有各中间体，会影响产品的质量， 所以建立分离分析方法对其进行质量控制是非常必要的，其各中间体及终产品的 结构如下
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阿戈美拉汀N- (2- (7-甲氧基-l-萘基)乙基)-乙酰胺，
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中间体—4 ((7_甲氧基_3， 4-二氢-l-萘基)乙腈)
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中间体-5 ((7-甲氧基-1-萘基)乙腈)<formula>formula see original document page 4</formula>
中间体-6 (2- (7-甲氧基-l-萘基)乙胺盐酸盐)
从以上各成分结构上来考察，结构非常相似，所以采用HPLC方法时，在同 一色谱柱上要想达到各组分有效的分离是非常困难的，事实也是如此，通过改变 二元流动相比例、pH值、离子强度等方法结果均不理想。而且到目前为止，没 有文献报道对阿戈美拉汀的中间体及终产品的成功分离分析方法。
后经反复试验意外发现，采用C18柱，缓冲液(pH值2 7)与另外两种有 机溶剂以--定配比成三元流动相，流动相的流速为1.0mL/min。用该方法可以快 速有效的分离分析阿戈美拉汀中间体及其终产品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离分析阿戈美拉汀中间体及其终产品的高效 液相色谱方法，从而实现阿戈美拉汀中间体与及其终产品的分离分析测定。本发 明用高效液相色谱法分离分析阿戈美拉汀中间体及其终产品。
本发明所说的用高效液相色谱法分析分离阿戈美拉汀中间体及其终产品的 方法，是以C18为色谱柱，缓冲液(pH值2 7)与另外两种有机溶剂以一定配 比成三元组合为流动相，流动相的流速为1.0mL/min。用该方法可以快速有效的 分离分析阿戈美拉汀中间体及其终产品。
本发明的有机溶剂选自下列化合物乙腈、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇。 所述的有机溶剂优选甲醇和乙腈与甲醇和乙醇以一定比例配比；最优选的有机溶 剂为甲醇和乙腈以一定比例配比。其中一种有机溶剂另外一种有机溶剂缓冲 液的比例为30~50% (v/v) 30 10% (v八'):50 30% (v/v)。缓冲液的pH值 为2~7，所述的缓冲液的pH值优选为2.5 5;最优选2.7 4。缓冲液采用的缓冲 盐为醋酸钠-醋酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸氢二钾-磷酸，优选为醋酸钠-醋酸、 磷酸氢二钠-磷酸；最优选磷酸氢二钠-磷酸。
本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现 (1) 取阿戈美拉汀中间体样品适量，采用流动相溶解，配制成每lmL含 阿戈美拉汀0.1 1 mg的样品溶液。
(2) 设置流动相流速为0.4 L2mL/min,检测波长为230nm,室温。
(3) 取(l)的样品溶液2-50 nL注入液相色谱仪，完成阿戈美拉汀中间体 及终产品分离与分析。
图1流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液(O.OIM磷酸氢二钠，磷酸调pH至2.7) =42 : 18 : 40，其中图谱中1为中间体-6， 2为中间体-4， 3为阿戈美拉汀，4为 中间体-5，可以看出在该条件下阿戈美拉汀主峰可以和三个中间体完全分离。
图2流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液(0.01M磷酸氢二钠，磷酸调pH至2.7) =40 : 20 : 40;其中图谱中1为中间体-6, 2为中间体-4， 3为阿戈美拉汀，4为 中间体-5，可以看出在该条件下阿戈美拉汀主峰可以和三个中间体完全分离。
图3流动相为甲醇-乙腈-醋酸钠缓冲液(冰醋酸调pH至2.7) =40 : 20 : 40; 其中图谱中1为中间体-6， 2为中间体-4， 3为阿戈美拉汀，4为中间体-5，可以 看出在该条件下阿戈美拉汀主峰可以和三个中间体完全分离。
图4流动相为甲醇-异丙醇-醋酸钠缓冲液(冰醋酸调pH3.8) =40 : 15 : 5;其 中图谱中l为中间体-6， 2为中间体-4， 3为中间体-5, 4为阿戈美拉汀，可以看
出在该条件下阿戈美拉汀主峰可以和三个中间体完全分离。
图5流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液(O.OIM磷酸氢二钠，磷酸pH至3.0) =42 : 18 : 40:其中图谱中1为中间体-6， 2为中间体-4， 3为阿戈美拉汀，4一 中间体-5，可以看出在该条件下阿戈美拉汀主峰可以和三个中间体完全分离。
图6流动相为甲醇-乙腈-醋酸钠缓冲液(冰醋酸调pH至2.7) =30 : 30 : 40; 其中图谱中1为中间体-6， 2为中间体-4和中间体-5, 3为阿戈美拉汀，可以看 出在该条件下阿戈美拉汀主峰可以和三个中间体完全分离。 图7 (对比实施例)流动相为甲醇一水(冰醋酸，pH2.7) =60:40;其中图 谱中1为中间体-6， 2为中间体-4， 3为阿戈美拉汀和中间体-6，可以看出在该条 件下阿戈美拉汀主峰与中间体-6不能完全分离。
具体实施例方式
实施例1
1. 仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液(0.01M 磷酸氢二钠，磷酸调pH至2.7) =42 : 18 : 40;流速1.0mL/min;检测波
长230 nm;柱温室温；进样体积10 μL。
2. 实验歩骤
将阿戈美拉汀中间体和终产品混合，采用流动相溶解样品，按上述条件进行 高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图l。
实施例2
1. 仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液(0.01M 磷酸氢二钠，磷酸调pH至2.7) =40:20:40;流速1.0mL/min;检测波 长230 nm;柱温室温；进样体积10 μL。
2. 实验歩骤
将阿戈美拉汀中间体和终产品混合，采用流动相溶解样品，按上述条件进行
高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图2 实施例3
1. 仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇-乙腈-醋酸钠缓冲液(冰醋 酸调pH至2.7) =40:20:40;流速1.0mL/min;检测波长230 nm;柱
温室温；进样体积10 μL
2. 实验歩骤
将阿戈美拉汀中间体和终产品混合，采用流动相溶解样品，按上述条件进行 高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3 实施例4
1. 仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp， SPD-M10Avp, SCL-10Avp, DGU-12A 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇-异丙醇-醋酸钠缓冲液(冰 醋酸调pH至3.8) =40:15:45;流速1.0mL/min;检测波长230nm; 柱温室温；进样体积10 U L
2. 实验歩骤
将阿戈美拉汀中间体和终产品混合，采用流动相溶解样品，按上述条件进行
高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图4 实施例5
1. 仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A 色谱柱:C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇-乙腈-(0.01M磷酸氢二钠， 磷酸调pH至3.0) =42:18:40;流速1.0mL/min;检测波长230 nm;
柱温室温；进样体积10 W L
2. 实验歩骤
将阿戈美拉汀中间体和终产品混合，采用流动相溶解样品，按上述条件进行
高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图5 实施例6
1. 仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp, SPD-M10Avp, SCL-10Avp， DGU-12A 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇-乙腈-醋酸钠缓冲液(冰醋 酸调pH至2.7) =30:30:40;流速1.0mL/min;检测波长230 nm;柱
温室温；进样体积10 U L
2. 实验歩骤
将阿戈美拉汀中间体和终产品混合，采用流动相溶解样品，按上述条件进行 高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图6 对比实施例
1. 仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp， SPD-M10Avp, SCL-10Avp， DGU-12A 色谱柱C18 (250mmx4.6nun);流动相甲醇-水(冰酉昔酸，pH2.7) =60 :10 : 40;流速1.0mL/min;检测波长230 nm;柱温室温；进样体积
10 uL
2. 实验歩骤
将阿戈美拉汀中间体和终产品混合，采用流动相溶解样品，按上述条件进行
高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图权利要求
1. 一种高效液相色谱法分离分析阿戈美拉汀中间体及终产品的方法，其特征在于以C18(250×4.6mm，5μm)，缓冲液(pH值2～7)与另外两种有机溶剂以一定配比成三元流动相。
2. 根据权利要求1所述的分析分离方法，其特征在于色谱柱选用C18 (250X 4.6mm ， 5,)。
3. 根据权利要求1所述的分析分离方法，其特征在于所说的另外两种有机溶剂 选自以下几种化合物其中的任意两种乙腈、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇， 优选甲醇和乙腈、甲醇和乙醇的混合溶液，最优选甲醇和乙腈的混合溶液。
4. 根据权利要求1所述的分离分析方法，其特征在于一种有机溶剂另外一种 有机溶剂:缓冲液的比例为30~50% (v/v) : 30~跳(v/v) : 50 30% (v/v)。
5. 根据权利要求l所述的分离分析方法，其特征在于所述缓冲液的pH值为2 7， 优选2.5 5，最优选3 4。
6. 根据权利要求1所述的分离分析方法，其特征在于缓冲液中采用的缓冲盐为 醋酸钠-醋酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸氢二钾-磷酸，优选为醋酸钠-醋酸、磷 酸氢二钠-磷酸，最优选磷酸氢二钠-磷酸。
7. 根据权利要求l所述的分析分离方法，其特征在于包括以下几个歩骤(1) 取阿戈美拉汀中间体样品适量，采用流动相溶解，配制成每lmL含 阿戈美拉汀0.1 1 mg的样品溶液；(2) 设置流动相流速为0.4 1.2mL/min,检测波长为230nm，室温；(3) 取(1)的样品溶液2-50 UL注入液相色谱仪，完成阿戈美拉汀中间 体及终产品分离与分析。
8. 根据权利要求5所述的分离分析方法，其特征在于流动相的流速优选为1 mL/min。
全文摘要
本发明公开了一种阿戈美拉汀中间体、及其终产品的分离与分析测定方法，采用高效液相色谱，以C18为色谱柱，缓冲液(pH值2～7)与另外两种有机溶剂以一定配比组成三元流动相，流动相的流速为1.0mL/min，用该方法可以快速有效的分离分析阿戈美拉汀中间体及其终产品。
文档编号G01N30/02GK101206200SQ20061016538
公开日2008年6月25日 申请日期2006年12月19日 优先权日2006年12月19日
发明者宁美英 申请人:北京德众万全药物技术开发有限公司