本发明涉及生物波检测
技术领域：
，具体而言，涉及一种生物波检测试剂盒及其应用，可以用于测定细胞的氧化还原指标，从而用于探索人体内氧的供给水平。
背景技术：
：生物波研究奠基于二十世纪八十年代初，在实验细菌潜在生长研究中，培养基加入吖啶黄(acriflavine)作为生长抑制剂，在进行预备试验，观察到绿脓杆菌(pseudomonasaeruginosa)培养生长24小时，培养物置室温条件下，菌落边缘出现色泽深浅交替的层次状变化现象。进一步选择奇异变形杆菌(proteusmirabilis)实验研究，已知这种细菌具有迁徙生长特性。将菌种点状接种在含ttc的固体营养培养平板中心，置波动培养箱内。8小时后，中心生长出红色圆形菌落，随后，菌落周边出现单细胞层扩展现象，中心红色菌落外周形成黄色环状菌落。3小时环状菌落次内边缘又出现红色环状菌落，红黄同心环状菌落反复交替。显微观察，中心菌落细菌形态呈短杆状和纤细状混合生长。同心环状菌落，红色由短杆状细菌组成，黄色由纤细状组成，以两者交替形成宏观有序特征。表现生命有机整体，形态结构有序性变化过程，伴随着生理学变化，表现生物代谢性相变，显示短杆状细菌呈氧化还原阳性反应，纤细状呈阴性。研究组称这种群体细胞生命活动节律性为“生物波”。其中，红黄菌落交界呈整齐陡变特征，表现生物场效应发生在转变过程中，同心环作为生命的载体，把生命带到无限空间，菌落是生命节律性活动遗留的残迹。数学模型建立从理论上阐明单种群杆菌的波动生长。现代生物学研究，已充分阐明生物有机体与体内外环境变化构成耦合振荡系统，表现生物与自然的统一，这种统一观念，理论上自达尔文进化论开辟现代生物学之后已普遍接受。其中，自然选择观与古希腊自然医学观两者基本一致。显示几千年来，生物学和医学的不同领域探索，均集中在自然范畴内，形成生物医学潜在发展的总趋势。上世纪60年代，自然科学带头学科数理化研究进展形成的重大突破，从确定观向非确定观转变，预示着复杂性探索时代的到来。生物学复杂性早已公认，待非确定观的影响扩大，渐渐促成生物复杂性探索领域。发展到70年代，总势头已经明朗，生物波应运而生。生物波研究主要涉及到，机体与内外环境构成耦合振荡系统，形成源于自然的医学理论发展趋势。随着研究深入，客观上要求掌握人体生物波动态变化，促成“生物波效应时间序性测定技术”的建立，相继展开在不同领域的实际应用。初步满足天-人耦合振荡系统中，人体对自然最佳适应的时机选择，加速生命有机体与自然环境结合的医学单一化技术形成。生物波临床医学研究显示，这一过程必然适应于现代科学的时代要求。但是，现有技术中还未实现定量表述生物与自然的关联。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供一种生物波检测试剂盒，以解决生物波不能量化的问题，所述的生物波检测试剂盒，采用特定染料，以辅助成分构成特殊的序性复合操作技术，对淋巴细胞，嗜中性粒细胞和红细胞生化代谢相变测定，具有检测准确、统计方便等优点。本发明的第二目的在于提供一种所述的生物波检测试剂盒的应用，可以应用在嗜中性粒细胞、淋巴细胞生物波效应时间序性解压缩测定，大脑约束债测定和细胞生物弱荧光反应实验。为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：一种生物波检测试剂盒，包括按照体积份数计的如下组份：染料1～2份，抗血凝剂2～4份，密度梯度离心分离液2～3份，磷酸盐溶液7～8份和生理盐水1～2份；所述染料选自二苯基溴化四唑溶液或者吖啶橙溶液中的一种，所述二苯基溴化四唑溶液的质量百分数为0.1％～0.3％，优选为0.15％～0.25％；所述吖啶橙溶液的质量百分数为0.01％～0.10％，优选为0.04％～0.06％；所述密度梯度离心分离液包括聚蔗糖溶液0.5～1份和泛影葡胺溶液1～3份，优选的，所述密度梯度离心分离液包括聚蔗糖溶液0.75～1份和泛影葡胺溶液1～2.25份；所述磷酸盐溶液由磷酸氢二钠与磷酸二氢钠混合得到，优选的磷酸盐溶液的ph为7～8，更优选的为7.2。优选的，以体积份数计，还包括：琥珀酸钠溶液1～2份，所述琥珀酸钠溶液的质量百分数为5.2％～5.5％，优选的为5.3％～5.4％，更进一步优选的为5.4％。优选的，以体积份数计，还包括：去离子水5.5～5.8份，优选的去离子水为5.6～5.65份。优选的，所述聚蔗糖溶液的质量百分数为30％～50％，更优选的为40～50％，更进一步优选为40％；优选的，所述泛影葡胺溶液的质量百分数为70％～80％，更优选的为76％。优选的，所述抗血凝剂为柠檬酸钠溶液，所述柠檬酸钠溶液的质量百分数为3％～4％，更优选的为3.8％。优选的，所述生理盐水的浓度为0.85％～0.9％。优选的，所述密度梯度离心分离液应用于分离细胞密度为1.080～1.085g/ml的嗜中性粒细胞。优选的，所述密度梯度离心分离液应用于分离细胞密度为1.052～1.077g/ml的淋巴细胞。优选的，所述密度梯度离心分离液应用于分离细胞密度为1.09～1.11g/ml的红细胞。所述的生物波检测试剂盒在嗜中性粒细胞、淋巴细胞生物波效应时间序性解压缩测定、大脑约束债测定和细胞生物弱荧光反应中的应用。与现有技术相比，本发明的有益效果为：(1)本申请所提供的生物波检测试剂盒，以染料二苯基溴化四唑溶液以及吖啶橙，以辅助成分构成特殊的序性复合操作技术，用于生命有机体各种组织的细胞，包括嗜中性粒细胞，淋巴细胞的生化代谢检验，也包括淋巴细胞和红细胞生物弱荧光反应。(2)本申请所提供的生物波检测试剂盒，以显示群体细胞同步节律性相变动态变化过程，用于生物有机体生物波的显示。(3)本申请所提供的生物波检测试剂盒检测得到的生物波可以用作人体体质变化预报、恶劣天气预报、选时给药预报等多方面的应用。具体实施方式下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。一种生物波检测试剂盒，包括按照体积份数计的如下组份：染料1～2份，抗血凝剂2～4份，密度梯度离心分离液2～3份，磷酸盐溶液7～8份和生理盐水1～2份；所述染料选自二苯基溴化四唑溶液或者吖啶橙溶液中的一种，所述二苯基溴化四唑溶液的质量百分数为0.1％～0.3％，优选为0.15％～0.25％；所述吖啶橙溶液的质量百分数为0.01％～0.10％，优选为0.04％～0.06％；所述密度梯度离心分离液包括聚蔗糖溶液0.5～1份和泛影葡胺溶液1～3份，优选的，所述密度梯度离心分离液包括聚蔗糖溶液0.75～1份和泛影葡胺溶液1～2.25份；所述磷酸盐溶液由磷酸氢二钠与磷酸二氢钠混合得到，优选的磷酸盐溶液的ph为7～8，更优选的为7.2。在本申请中，染料选自二苯基溴化四唑溶液或者吖啶橙溶液中的一种，mtt，是细胞氧化还原的指示剂，氧化还原反应主要是由氧化还原酶或脱氢酶催化的，这种反应是由氢的供体把氢原子转移到氢的受体的酶促反应。而mtt正是这种试药。以四唑盐为受氢体。在反应中，由脱氢酶将底物的氢原子转移至四唑而形成formazan。二苯基溴化四唑溶液和吖啶橙在氧化还原反应中都属于四唑类化合物二苯基溴化四唑溶液用于嗜中性粒细胞的染色。吖啶橙3，6-(二甲胺基)吖啶盐酸盐，分子式c17h19n3hclzncl2，分子量438.12g/mol，是一种荧光色素，用于淋巴细胞和红细胞的荧光染色。其检测激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm。它与细胞中dna和rna结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与dna结合量少发绿色荧光，与rna结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核dna和rna染色。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。密度梯度离心分离液用于密度梯度离心，密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成——连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心分离液就是这种介质，其特点是：1)能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；2)ph中性或易调为中性；3)浓度大时渗透压不大；4)对细胞无毒。磷酸盐溶液为缓冲溶液，缓冲溶液的ph控制在弱碱性，优选7～8，更优选的为7.2。优选的，以体积份数计，还包括：琥珀酸钠溶液1～2份，所述琥珀酸钠溶液的质量百分数为5.2％～5.5％，优选的为5.3％～5.4％，更进一步优选的为5.4％。琥珀酸钠溶液为底物稳定剂，有助于减少非特异反应，提高敏感性。优选的，以体积份数计，还包括：去离子水5.5～5.8份，优选的去离子水为5.6～5.65份。优选的，所述抗血凝剂为柠檬酸钠溶液，所述柠檬酸钠溶液的质量百分数为3％～4％。优选的，所述生理盐水的浓度为0.85％～0.9％。优选的，所述密度梯度离心分离液应用于分离细胞密度为1.080～1.085g/ml的嗜中性粒细胞。优选的，所述密度梯度离心分离液应用于分离细胞密度为1.052～1.077g/ml的淋巴细胞。优选的，所述密度梯度离心分离液应用于分离细胞密度为1.09～1.11g/ml的红细胞。所述的生物波检测试剂盒在嗜中性粒细胞、淋巴细胞生物波效应时间序性解压缩测定、大脑约束债测定和细胞生物弱荧光反应中的应用。当随血液循环的嗜中性粒细胞群表现的生物波动态作为整体生物波的代表，是这种细胞随血液循环传递脑生物波变化，进而影响周围组织生物波的联系重要因素是生物场效应过程。脑是全身神经系统的中枢，支配全身总体状态。大脑中枢神经系统感知周围自然环境变化，也表现出自然环境的影响因素与脑组织的生物波有紧密的联系，体现出生物波神经起源，嗜中性粒细胞由此随血液循环游动于全身，是周围组织与脑中枢联系的主要细胞群，以动物实验可以看出脑生物波变化与嗜中性粒细胞群的变化密切相关，生物波研究认为两者的联系建立在生物场效应的基础上。当脑细胞群出现生化代谢性相变，嗜中性粒细胞物理性接触相变的脑细胞，也会以细胞信息传递作用转变成一致性变化代谢趋向，完成生物场效应过程。嗜中性粒细胞的生物波动态，可能以同样的方式与全身的周围组织的细胞群之间再一次发生场效应，把从脑组织获得的生物波动态信息传递到周围。生物场效应是生物波基础研究的主要内容，使不同细胞群之间的信息传递而完成生物波的转变过程。显示有机体各种组织细胞以自组织生化相变过程，构成同步性变化并传递全身。生物波起源于中枢神经系统，以神经组织细胞接受环境刺激以细胞生物相变，表现对刺激作用的反应。并以生物场效应形成生物波特有的神经刺激的传导途径。在中枢神经通过神经传导途径，接受周围刺激和传递反射运动。生物波研究，以生物波特有的方式把中枢神经生物波状态传递到周围各组织，使其发生相同的生物波动态过程，显示表现中枢神经传递的又一种途径，称之“神经双支配传导途径”。即在生理学中阐述清楚的神经纤维的神经突轴传导和生物波网络传递。生物波过程开始于神经系统的感知，转化为生物波信号，这种信号以生物场效应传递给血液循环的嗜中性粒细胞，形成相同的生物波动态，再以生物场效应的方式传遍全身，构成动态性生物波网络。生物波网络动态结构及基本生理功能，是神经纤维传导联系中枢与周围之外，经生物波网络传递神经刺激的又一途径。将神经感知信息从中枢到周围的传递方式。这种以中枢神经系统下意识反应，促成细胞同步相变，导致整体呈一致代谢性反应过程，生物波研究称之为“生物波网络神经传递途径”。中枢神经双支配途径被确定。由于全身细胞呈同步性生化相变，导致微环境生态竞争性抑制力增强，产生波动排异功效，同时也发出整体性预报反应。实施例1本申请所提供的生物波检测试剂盒，包括以下组份：溶液名称体积/ml浓度/％(质量百分数)柠檬酸钠溶液23.8聚蔗糖溶液0.7540泛影葡胺溶液2.2576磷酸盐溶液21ph＝7.2二苯基溴化四唑溶液10.2琥珀酸钠溶液15.4生理盐水20.85将上述溶液分类，标签及说明，构成试剂盒的基本组成。使用时，按照以下顺序：抗凝剂柠檬酸钠、分离液聚蔗糖和泛影葡胺、缓冲液磷酸盐、染色液二苯基溴化四唑溶液、复染液琥珀酸纳、稀释液生理盐水。实施例2本申请所提供的生物波检测试剂盒，包括以下组份：将上述溶液分类，标签及说明，构成试剂盒的基本组成。使用时，按照以下顺序：抗凝剂柠檬酸钠、分离液聚蔗糖和泛影葡胺、缓冲液磷酸盐、染色液二苯基溴化四唑溶液、复染液琥珀酸纳、稀释液生理盐水。实施例3本申请所提供的生物波检测试剂盒，包括以下组份：溶液名称体积/ml浓度/％(质量百分数)柠檬酸钠溶液23.8聚蔗糖溶液140泛影葡胺溶液176磷酸盐溶液7ph＝7.2吖啶橙溶液20.05去离子水5.65-生理盐水1.240.85将上述溶液分类，标签及说明，构成试剂盒的基本组成。使用时，按照以下顺序：抗凝剂柠檬酸钠、缓冲液磷酸盐、分离液泛影葡胺、稀释液生理盐水、分离液聚蔗糖、稀释液去离子水、染色液丫啶橙。实施例4本申请所提供的生物波检测试剂盒，包括以下组份：将上述溶液混匀，得到该试剂盒。使用时，按照以下顺序：抗凝剂柠檬酸钠、缓冲液磷酸盐、分离液泛影葡胺、稀释液生理盐水、分离液聚蔗糖、稀释液去离子水、染色液丫啶橙。实施例5本申请实施例1所提供的生物波试剂盒在嗜中性粒细胞、淋巴细胞生物波效应时间序性解压缩测定中的应用采集末稍血标本250μl加柠檬酸钠溶液，进行下列操作：1)血液样本抗凝血后分成不同组份，置于37℃后，分别0、10、20、30、40、50、60分钟取一份进一步操作；2)密度梯度离心分离：样品加在10ml分离液表层1500转，嗜中性粒细胞2～3分钟，淋巴细胞15～20分钟离心；3)分别取纯化淋巴细胞、嗜中性粒细胞悬液滴片；4)分别取淋巴细胞、嗜中性粒细胞滴片，分别置21℃和51℃孵育12分钟5)滴加染色溶液，在37℃环境染色10～40分钟；6)高倍显微镜下，5分钟之内完成60个细胞中阳性计数7)统计阳性细胞数百分比。实施例6本申请实施例3所提供的生物波试剂盒在大脑约束债测定中的应用取密度梯度离心分离的嗜中性粒细胞悬液，分别滴加在8张载玻片上，置51℃孵育，分别在0、5、10、12、14、16、20、25分钟取出，置37℃染色20分钟。高倍显微镜下，完成100个细胞中阳性计数，统计阳性细胞数百分比。实施例7本申请实施例4所提供的生物波试剂盒在细胞生物弱荧光反应实验中的应用1)取红细胞悬液滴片，荧光染色，立即显微镜荧光光源下计数弱荧光细胞数，以相差镜下计数弱荧光视野范围内的全部细胞数，计算弱荧光细胞百分比；2)取淋巴细胞悬液滴片，加固定液自然干燥，荧光染色，显微镜荧光光源下计数弱荧光细胞数，同时计数视野范围内的全部细胞数，计算弱荧光细胞百分比。实验例1生物反应性效力采用实施例5提供的应用方法，在进行生物波效应时间序性测定原理实验中，采用称之为r二数技术方法，包括采用生物稳定剂g1cnac。实验显示g1cnac稳定人体生物波作用的发挥，取决于环境变化条件。实验采用51℃和21℃，分别代表环境主要变化因素。为助于对实验数据统计分析，规定51℃实验条件测定值为t值，21℃对照实验为c值，计算t、c比例。当tcr＝1时，表现出g1cnac稳定作用生效时间，反映此时人体对环境变化的敏感性较高。tcr≠1，表现由于此时人体对环境变化反应较低，故稳定剂不发挥作用。东北人体深冷却反应也清楚表现t值高于c值时反应能力较低。在实际应用过程中，发现c值的高低是人体生物活力高低的表现，与tcr表现人体对环境变化的敏感程度呈一致性，故直接选用c值与t值较低时间为生物对环境反应敏感时间。只是tcr值过高则用于人体将遇到极端气候变化，或体内特别异常状态的预报判定。这种反应性效力，是今天的生物波效应时间序性解压缩测定技术设计的生物学基础，构成对同一标本细胞生物学反应性效力间断序性表达。人体生物波与天气变化相关性：2011年4月份，兴城已进入多雨季节。天气变化显示出典型的海洋性气候，表现雨前乌云密布现象，之后则呈一阵下雨，一段晴天特征。所测定的人体生物波动态，常表现正下雨阶段呈高值，间断性晴天为低值。17日人群生物波动态常规测定，由于天气变化的典型性，健康个体生物波测定相应的表现出高低变化动态，结果见表1，显示ewd值从8：20到20:20共十二个小时生物波效应时间序性压缩实验测定的生物波效应时间序性解压缩测定(exosomaticwavedetection，ewd)数值变化动态。显示大部分时间数值较高，其中10:20和14:20两时间点较低。根据近期人体生物波与天气变化特点，观察这两个低值段天气变化，能否与以往同样表现生物波动态的预报性，以接近10:00开始转晴，11:00后继续下雨，14:00开始下雨逐渐减小，14:15继续下雨，接近14:20雨停，到15:00又继续下小雨一直持续到晚上。表1天气变化与生物波效应时间序性动态一致性统计表表1显示的观察记录，当天测定结果与天气变化表现出典型的人体生物波与天气变化相关性特征。人体生物波包括c、t两项实验测值的动态过程，其中出现两个低c值点都是雨停的时间，其余时间c值和全部t值均在3以上。分析认为两个低值点的晴天现象，与其它时间由雨天到晴天的天气变化过程中，相伴随的人群生物波动态变化表现的第一晴天现象基本一致。与第一晴天发生的基本原理可能也相一致，主要是局部高空云层气流变化，表现云飘远离当地的方向性，对地球表面生物有机体产生离心力作用的结果。显示兴城的海洋性气候表现的云层流动速度较快，产生的力量较大显示的人体生物波与天气变化的典型表现。2012年7月1日，早上8:00采集标本，对正常人群生物波效应时间序性动态测定试验，接近10:00报告测定结果，显示8:00到16:00生物波c值在1.33-4.67，t值在1-4范围内。根据近期正常人群生物波动态范围，c值在1-5左右，其ewd值表现反常现象，18:00至20:00c值5.83-8，t值2.67-5，详见表2。表2年轻健康个体生物波ewd动态与极端天气出现的时间关系表测定结果显示青、老年之间生物波动态差别较大。18:00青年生物波动态中出现孤峰，这与近期人群生物波动态表现差距较大。按照人群生物波反映环境变化的判定原则，但考虑到个体现象发生与年轻人生物波动态有关，结合青年当天个体无明显体质变化相关特征，而分析判定为对恶劣气象的预报表现。实际情况发生在下午6:00后，天气突然变化，乌云密布，风力加强，19:30开始下小雨，伴有稀疏的小体积冰雹，体积及密度逐渐增加，20:00出现大体积冰雹，最大1.5公分左右，持续约十分钟。实验例2大脑约束债测试采用本申请实施例6所提供的应用进行大脑约束债测试，目的是了解心理学变化以及由心理压力过大或精神活力集中过度，引起皮层活动约束。以数字化能债指数检测技术显示约束程度。这是生物波研究最新技术，为心理卫生、健康调理、内环境稳定三方面提供试验检测手段。根据不同个体状态和所处环境差异，可以联系心理压力、精神活力或二者兼有的特征性指标。设定0～25八个指标判定大脑约束债与身体内环境相互作用，从而建立心理压力过大或精神活力集中过度对全身作用的数学关系。2011-12-30徐姓病例服用抗抑郁类药物盐酸曲唑酮片50mg，第二天感觉精神恍惚，嗜睡等症状，进行ldcc测定，结果详见表3。表3病例ldcc对比表中显示以往测定ldcc最高值在实验时间的十二分钟处，属于正常范围，当天测定数值最高值在实验时间的十分钟处，反映ldcc测定结果受到影响。实验例3细胞生物弱荧光反应采用本申请实施例7所提供的应用进行细胞生物弱荧光反应测试。红细胞因铁卟啉存在，正常情况下对荧光素产生淬灭作用，当铁卟啉减少而导致荧光素残留时间延长出现弱荧光。弱荧光表现癌症病人贫血体质，同时也提出红细胞铁卟啉减少氧传递速度下降，易发癌症。揭示红细胞氧对癌症发生抑制作用，g1cnac提高红细胞氧传递速度，通过荧光消失验证结果，证明g1cnac对癌症预防作用。尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；本领域的普通技术人员应当理解：在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围；因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些替换和修改。当前第1页12