本发明属于生物科技领域，特别涉及免疫原与包被原的制备鉴定方法。
背景技术：
ota广泛存在于粮谷类、葡萄干、可可、巧克力、咖啡、葡萄酒、调料、乳制品等多种食品和饲料中，可以通过食物链进入人和动物体内，具有蓄积毒性。饲料中ota的污染较为严重，动物通过采食被污染的饲料摄入ota。研究发现，单胃动物摄入体内的ota大部分通过血液被转移至肾脏，并在消化道和肾小管的近端和远端被吸收，ota通过肝肠循环被反复分泌和吸收，位于肠道的微生物会把ota转化成无毒性的代谢产物otα；而进入血液的ota与has紧密结合，在动物体内非常稳定，不易被代谢降解，因此动物性食品，尤其是猪的肾脏、肝脏、肌肉、血液等常有ota检出。针对人体或动物体内可能存在ota，需要制备出免疫原与包被原。
技术实现要素：
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于克服上述现有技术中ota污染的技术问题，提供免疫原与包被原的制备鉴定方法，本发明可提高人体或动物对抗ota的免疫力。
本发明的目的是这样实现的：免疫原与包被原的制备鉴定方法，包括以下步骤：
（1）采用水溶性乙基二甲氨丙基碳化二亚胺法制备免疫原个包被原，使ota与载体蛋白的偶联比为50:1，制备好免疫原与包被原；
（2）将制备好的免疫原与包被原分别在紫外可见光谱扫描仪检测在200-400nm下进行扫描，通过数据对比可定性证明偶联成功与否，同时计算出以蛋白含量计的偶联物的浓度以及分子间的偶联比
作为本发明的进一步改进，所述步骤（1）中，偶联反应中使用的ota和载体蛋白用量为:ova2.34mg、bsa1.51mg、ota5.0mg，偶联反应均在青霉素瓶中进行。
作为本发明的进一步改进，所述步骤（1）中，免疫原与包被原的制备具体包括一下步骤：
（101）载体蛋白溶于1ml去离子水中，将ota溶于0.5mldmso中再滴入到载体蛋白溶液中；
（102）10mgedc溶于0.2ml去离子水，滴入到步骤（101）中制备好的溶液中；
（103）4℃搅拌反应16h，反应后若有沉淀，离心去除沉淀后进行透析；
（104）反应结束，将产物放入经处理的透析袋中，均用去离子水透析，没8h换一次透析液，透析72h后，收集放置于-20℃保存。
作为本发明的进一步改进，所述步骤（2）中，将偶联物适当稀释后，测定波长为260和280nm时的分光光度值，从光谱图获得数据进行分析和计算偶联比率。
作为本发明的进一步改进，所述步骤（2）中，计算偶联比率具体包括以下步骤：
（201）系列稀释小分子和载体蛋白,分别读出小分子和载体蛋白的最大吸收峰处(分别为λa、λb)的吸光度,做出浓度对吸光度的标准吸收曲线f(a)和f(b)；
（202）将偶联物稀释至适当浓度后，将浓度代入到f(b)中得到吸光度a1，读出在偶联物最大吸收峰处的吸光度a2；
（203）a=a2-a1(偶联物中小分子对总吸光度的贡献值=偶联物的吸光度-载体蛋白对吸光度的贡献)，将a代入f(a),得到偶联物中小分子的浓度c，m(摩尔浓度)=c(质量浓度)/分子量；
（204）用pbs作为空白对照,紫外分光光度计测定包被原溶液的od280nm、od260nm，然后按下列公式偶联比，公式为:
偶联比=[m(偶联物)一m(载体蛋白)]/m(ota)。
具体实施方式
免疫原与包被原的制备鉴定方法，包括以下步骤：
（1）采用水溶性乙基二甲氨丙基碳化二亚胺法制备免疫原个包被原，使ota与载体蛋白的偶联比为50:1，制备好免疫原与包被原；
（2）将制备好的免疫原与包被原分别在紫外可见光谱扫描仪检测在200-400nm下进行扫描，通过数据对比可定性证明偶联成功与否，同时计算出以蛋白含量计的偶联物的浓度以及分子间的偶联比
步骤（1）中，偶联反应中使用的ota和载体蛋白用量为:ova2.34mg、bsa1.51mg、ota5.0mg，偶联反应均在青霉素瓶中进行。
步骤（1）中，免疫原与包被原的制备具体包括一下步骤：
（101）载体蛋白溶于1ml去离子水中，将ota溶于0.5mldmso中再滴入到载体蛋白溶液中；
（102）10mgedc溶于0.2ml去离子水，滴入到步骤（101）中制备好的溶液中；
（103）4℃搅拌反应16h，反应后若有沉淀，离心去除沉淀后进行透析；
（104）反应结束，将产物放入经处理的透析袋中，均用去离子水透析，没8h换一次透析液，透析72h后，收集放置于-20℃保存。
步骤（2）中，将偶联物适当稀释后，测定波长为260和280nm时的分光光度值，从光谱图获得数据进行分析和计算偶联比率，计算偶联比率具体包括以下步骤：
（201）系列稀释小分子和载体蛋白,分别读出小分子和载体蛋白的最大吸收峰处(分别为λa、λb)的吸光度,做出浓度对吸光度的标准吸收曲线f(a)和f(b)；
（202）将偶联物稀释至适当浓度后，将浓度代入到f(b)中得到吸光度a1，读出在偶联物最大吸收峰处的吸光度a2；
（203）a=a2-a1(偶联物中小分子对总吸光度的贡献值=偶联物的吸光度-载体蛋白对吸光度的贡献)，将a代入f(a),得到偶联物中小分子的浓度c，m(摩尔浓度)=c(质量浓度)/分子量；
（204）用pbs作为空白对照,紫外分光光度计测定包被原溶液的od280nm、od260nm，然后按下列公式偶联比，公式为:
偶联比=[m(偶联物)一m(载体蛋白)]/m(ota)。