一种茶尺蠖活体检测的实验方法与流程
本发明涉及活体昆虫实验，具体涉及到茶尺蠖活体检测信息素的实验装置和方法。
背景技术：
茶尺蠖是一种普遍存在于茶园中的害虫，给茶叶生产造成严重的危害，导致直接的经济损失。在茶尺蠖的防治中，目前主要手段还是通过人眼发现辨别从而了解虫害爆发情况。昆虫信息素主要有示踪信息素，报警信息素，性信息素等，利用昆虫信息素的高度专一性对虫情起到监测作用。在实验室环境中对茶尺蠖活体进行信息素的检测也缺乏相关实验装置。检测茶尺蠖性信息素的传感器已经有相关的应用，但是相关应用只是将购买的茶尺蠖性信息素溶液滴加到传感器中，而缺乏发情期茶尺蠖雌蛾活体释放的性信息素的检测方案。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种茶尺蠖活体检测的实验方法。可实现茶尺蠖释放性信息素的收集，检测。
一种茶尺蠖活体检测的实验方法，包括：步骤1：设置实验装置，包括收集管，吸附管，脉冲气体发生器，气泵，电化学工作站及其配套设施，电化学阻抗生物传感器等；步骤2：将上述实验组分成实验组和空白对照；步骤3：开动脉冲气体发生器气泵，电化学生物传感系统进行茶尺蠖性信息素检测实验，并记录数据；步骤4：处理实验结果并且计算得出环境中的茶尺蠖性信息素浓度；
在一个实施例中，在步骤1中，吸附管中茶尺蠖雌蛾应多于5只。
在一个实施例中，在步骤1和步骤3中，电化学生物传感器的电极选用e-platel8系列的叉指形金电极。
在一个实施例中，在步骤1和步骤3中，电化学生物传感器换能器使用茶尺蠖性信息素结合蛋白2（eoblpbp2）蛋白。
在一个实施例中，在步骤1中电化学阻抗生物传感器需要使用（z,z,z）-3,6,9-十八碳三烯或者6,7-环氧（z,z）-3,9-十八碳二烯标定。
在一个实施例中，在步骤4中，电化学传感系统采用电化学阻抗谱技术(eis)。
在一个实施例中，收集管由铁架台支起，吸附管由蝴蝶夹固定位置，脉冲气体发生器在收集管一侧。收集管另一侧与吸附管连接，吸附管与二个连续的锥形瓶相连接，另一端与气泵连接。所有连接除吸附管与吸附管的连接之外都是用橡胶管连接。
本发明的有益效果是：该茶尺蠖活体检测方法能够在实验室环境下有效检测由茶尺蠖雌蛾活体释放的性信息素。
附图说明
图1是本发明实施茶尺蠖活体检测性信息素方案的框架示意图。
图2是本发明中电化学传感器元件制备图。
图3a、3b是归一化阻抗-配基浓度对数图。
图4是茶尺蠖雌蛾活体检测阻抗谱图。
图5a、5b是归一化阻抗-时间图，5a.茶尺蠖雌蛾实验组5b.空白对照组。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
如图1所示，一种茶尺蠖活体检测的实验装备和方案，为了实现以上所述的目的，本发明采用如下方案，本装置有若干段胶管，气泵1在管道一端缓慢泵入气体，气体经过分别装有超纯水的广口瓶2和超纯水中放入活性炭的广口瓶3，此举为了得到干净不潮湿的空气，该管道的另一端插入吸附管4，吸附管4在实验时应对准电化学传感系统5中的某通道。另一管道一端连接脉冲气体发生器6，另一端连接装有茶尺蠖活体的收集管7，收集管7连接到吸附管4上，让茶尺蠖产生的性信息素缓慢从收集管7中流入吸附管4，再经吸附管4进入准备好的电化学传感系统5的检测通道中。
收集管7中的气体流出速度稍微大于吸附管4中的气体流入速度，以免空气进入收集管7而阻碍收集管中气味混合物的流出；收集管连接前先抽气10分钟，除去整个气流回路中可能的杂质；收集管7和吸附管4使用前必须进行净化和老化处理，以祛除其中杂质；不同茶尺蠖释放的气量不同，收集时间以具体操作为准；各种玻璃仪器和连接管要洁净。
在实验预处理阶段，首先是茶尺蠖雌蛾的处理：选取状态良好、体型健壮的未交尾的茶尺蠖雌蛾若干只，放入烧杯中备用。然后是过滤物质处理：活性炭和硅胶实验前都必须经过高温120℃处理4h，以排除其中的水分。收集管和吸附管使用前须进行净化和老化处理，条件为氮气以10-50ml/min的流速、300-340℃的高温、保持3-6h流过收集管和吸附管。
本发明的具体实验方法为：
步骤1：茶尺蠖雌蛾五只为一组用镊子放入到收集管7中，收集管7的进气口8用软管与脉冲气体发生器6相连，打开脉冲气体发生器6先空气循环一分钟，使茶尺蠖释放的气体充满收集管7，以加快后续实验的进行，出气口11插入到吸附管4上的小孔中，收集管7和吸附管4均用铁架台进行固定；吸附管4的进气口用软管与盛放硅胶和活性炭的瓶子和盛放超纯水的瓶子连接，用于净化进入吸附管4的空气，出气口对准电极板孔槽。收集管进气口端与脉冲气体发生器相连，通过输送一定流速的空气来带动富集管中气体的流动，出气口插入富集管上的小孔洞中，通过富集管将气味传送到电极板孔槽中。吸附管4的进气口分别与活性炭瓶、超纯水瓶和气泵相连，出气口对准电极传感系统的孔槽。当气泵1打开时，空气在吸附管4中由进气口向出气口形成一定的空气流。此时再打开脉冲气体发生器6，茶尺蠖释放的气体就被送入到吸附管4中，并随着气流一起流向电极板孔槽。
步骤2：根据收集管7中是否放入茶尺蠖雌蛾将实验分为实验组和空白对照组。
步骤3：开动脉冲气体发生器6和气泵1，电化学工作站采用交流复阻抗方式，记录等效电路阻抗的实部和虚部数据。
步骤4：使zview软件拟合作为检测蛋白与配基相互作用的参数rct。本实验方法中，电化学生物传感系统需先标定得到nic—配基浓度对数曲线参数，即
技术特征：
技术总结
本发明公开了一种茶尺蠖活体检测的方法，包括，步骤1：设置经过预处理过的装置包括收集管，吸附管，收集管由铁架台支起，吸附管由蝴蝶夹固定位置，脉冲气体发生器在收集管一侧。收集管另一侧与吸附管连接，吸附管与二个连续的锥形瓶相连接，另一端与气泵连接。所有连接除吸附管与吸附管的连接之外均由橡胶管连接；步骤2：将实验分成实验组和空白对照组，实验组在收集管中放入茶尺蠖，空白对照组则不放；步骤3：开动气体发生器和气泵再配合连接好传感系统的电化学工作站进行实验，并记录数据；步骤4：处理实验结果并得出由茶尺蠖雌蛾释放的性信息素浓度。本方法可以在实验室环境下有效检测到由茶尺蠖雌蛾活体释放的性信息素气体分子。
技术研发人员：李红亮;唐明珠;郑立波
受保护的技术使用者：中国计量大学
技术研发日：2017.10.10
技术公布日：2018.04.13
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