一种ASE法萃取辛夷中木兰脂素的方法与流程

本发明属于木兰脂素的提取领域，尤其是一种ASE法萃取辛夷中木兰脂素的方法。
背景技术：
：2015年版药典方法中所记载的关于提取辛夷中木兰脂素的方法为：取本品粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20ml，称定重量，浸泡30分钟，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml，加在中性氧化铝柱(100～200目，2g，内径为9mm，湿法装柱，用乙酸乙酯5ml预洗)上，用乙醇15ml洗脱，收集洗脱液，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。该方法所需时间较长，而且对技术人员的专业要求较高。技术实现要素：针对上述不足，本发明旨在提供一种萃取时间短且重复性好的ASE法萃取辛夷中木兰脂素的方法。为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE法萃取辛夷中木兰脂素的方法，依次包括下述步骤：步骤1：将辛夷样品粉碎，取1g与1g硅藻土混合均匀；步骤2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜和3g中性氧化铝的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤3：用乙醇萃取，结束后，用乙醇定容至50ml，摇匀、过滤，取滤液，即可。优选地，步骤3所述的萃取条件为：压力为1500psi，温度为100℃，时间为10min，次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。优选地，步骤2所述的ASE萃取池体积为10ml。本发明与传统方法相比，具有下述优点：1、本发明提高了温度降低溶剂的黏度，减少了溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；2、由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，故萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态；3、本发明考察了使用乙酸乙酯、乙醇作为提取溶剂，结果乙酸乙酯与乙醇的提取效果基本一致，由于乙酸乙酯提取后不能直接作为上HPLC的溶剂需要蒸干，故采用乙醇更方便，故采用乙醇作为提取溶剂；4、本发明考察了加入1g、2g、3g的中性氧化铝、不加入中性氧化铝进行考察，结果RAD为1.18％，证明加入中性氧化铝对其结果影响不大，但是又达到净化效果，所以试验过程中可以是用1g中性氧化铝进行除杂。附图说明图1为以木兰脂素对照品的浓度(mg)-峰面积进行线性回归图；图2为木兰脂素对照品的色谱图；图3为使用ASE法提取所得的木兰脂素的色谱图；图4为使用药典方法提取所得的木兰脂素的色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求书做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护的范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、agilent1260超高效液相色谱仪。1.2试剂：水：符合GB/T6682规定的一级水；乙醇(CH4O)：色谱纯(液相色谱用)。2、方法2.1对照品溶液的制备：取木兰脂素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备：2.2.12015年版药典方法：取本品粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20ml，称定重量，浸泡30分钟，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml，加在中性氧化铝柱(100～200目，2g，内径为9mm，湿法装柱，用乙酸乙酯5ml预洗)上，用乙醇15ml洗脱，收集洗脱液，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：样品经粉碎机粉碎，取粗粉约1g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀待用，移入到预先放好过纤维素滤膜和3g中性氧化铝(层析用)的10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3ASE萃取条件：压力为1500psi，温度为100℃，萃取时间为10min，次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。2.4色谱条件与系统适用性试验a)仪器：agilent1260超高效液相色谱仪；b)色谱柱：AgilentZORBAXExtend-C18，1.8μm，4.6×100mm；c)柱温：35℃；d)流速：0.4mL/min；e)流动相：：乙腈-四氢呋喃-水(35：1：64)；f)检测波长278nm；理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。2.5测定法照高效液相色谱法(通则0512)测定；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.6标准限值要求本品按干燥品计算，含木兰脂素(C23H28O7)不得少于0.40％。2.7、计算(外标法)式中CR——对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；AX——供试品的峰面积；AR——对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3、结果3.1线性关系取木兰脂素对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加乙醇制成每1ml含木兰脂素1.0292mg的溶液，然后分别精密吸取该溶液0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、1.2ul进行HPLC测定，并依照上述方法测定，结果详见表1。以对照品浓度(mg)-峰面积进行线性回归，详见图1，求得回归方程：y＝1,323.5649x-37.8978,R2＝0.9999，结果表明：木兰脂素在0.1029-1.2350mg/ml范围内呈良好的线性关系。表1线性试验结果3.2重复性试验取相同批号的样品(批号：辛夷-3)约1g，共3份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中盐酸水苏碱的含量见表2，RSD为2.22％，结果表明ASE提取方法重复性良好。表2重复性实验结果3.3精密度和稳定性试验取木兰脂素对照品溶液(1.0292mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为0.5％，详见图2，结果表明仪器精密度良好。另外，使用ASE法提取所得的木兰脂素的色谱图见图3；使用药典方法提取所得的木兰脂素的色谱图见图4。3.4样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(3批)表3使用不同的ASE仪器及药典方法的提取结果表4使用药典方法与使用ASE1法的提取结果对比药典ASE1平均值％RAD％辛夷-14.234.394.311.9辛夷-24.144.774.467.1辛夷-34.004.234.122.8表5使用药典方法与使用ASE2法的提取结果对比药典ASE2平均值％RAD％辛夷-14.234.354.291.4辛夷-24.144.864.508.0辛夷-34.004.324.163.9表6使用ASE1与使用ASE2法的提取结果对比ASE1ASE2平均值％RAD％辛夷-14.394.354.370.5辛夷-24.774.864.810.9辛夷-34.234.324.271.04、讨论：4.1提取溶剂的考察实验中考察了使用乙酸乙酯、乙醇作为提取溶剂，结果乙酸乙酯与乙醇的提取效果基本一致，由于乙酸乙酯提取后不能直接作为上HPLC的溶剂需要蒸干，故采用乙醇更方便，故采用乙醇作为提取溶剂。4.2加入净化剂量的考察试验中考察了加入1g、2g、3g的中性氧化铝、不加入中性氧化铝进行考察，结果RAD为1.18％，证明加入中性氧化铝对其结果影响不大，但是又达到净化效果，所以试验过程中可以是用1g中性氧化铝进行除杂。以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围内。当前第1页1 2 3