本发明涉及养殖技术领域，具体涉及一种鸡群中种母鸡白血病病毒的检测方法。
背景技术：
鸡白血病是由鸡白血病病毒(alv)引起的一种传染性肿瘤病，目前该病不仅对蛋鸡产业造成巨大危害，在我国地方品种中也有较高的感染率和发病率，对家禽养殖业造成了严重的损失。鸡白血病的防治主要是对患病或者携带鸡白血病病毒的宿主进行有效净化，从而达到控制传播的目的。
目前鸡白血病检测主要分为四个阶段：1、1日龄，检测种母鸡和公鸡的胎粪；2、8-10周龄，检测公鸡血浆；3、18-20周龄，检测开产前排毒高峰期种母鸡蛋清，公鸡的血浆和精液；4、22-24周龄，正式制种前进行复检。目前对18-20周龄以及22-24周龄的种母鸡蛋清进行白血病病毒检测采用的是alvp27抗原elisa检测的方法淘汰阳性种母鸡，但是由于检测工作量大，试剂盒价格高，成本投入多，种鸡场需要承受的经济压力较大。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够降低鸡群中种母鸡白血病病毒检测工作中的工作量和经济成本的方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种鸡群中种母鸡白血病病毒检测方法，包括以下步骤：
s1：将待检测种母鸡按笼位顺序编号，按编号收集待检测笼位内每只种母鸡的种蛋，吸取所述种蛋蛋清并将同一个笼位内每只种母鸡的种蛋蛋清混合得到混合样本；
s2：检测所述混合样本是否存在白血病病毒，若所述混合样本检测结果为阴性，则所述混合样本对应的所有所述蛋清样本为阴性，所述蛋清样本对应的待检测种母鸡未携带白血病病毒，若所述混合样本检测结果为阳性，则将所述混合样本对应的笼位中所有的种母鸡进行清除。
进一步，每个笼位中种母鸡的数量为2或3只。
进一步，所述种蛋蛋清混合前反复冻融2-3次以降低其粘稠度，并于混合前恢复至室温。
进一步，步骤s2中使用alv-p27抗原进行白血病病毒的检测。
本发明的有益效果是：使用本发明的方法对鸡群中种母鸡蛋清进行白血病病毒检测时，通过将几个不同的样本混合进行检测的方式，可以减少检测次数，降低工作量，节约时间，降低成本，综合效益明显。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例的试验群体为本公司养殖的b、c二个地方鸡品种，其中b为欣华粉壳蛋鸡，c为欣华绿壳蛋鸡。每个品种各取450只进行实验，试验群体为每笼3只。
1、将900只待检测种母鸡按笼位顺序编号为笼位1号、笼位2号......笼位300号，按编号收集每个笼位内每只种母鸡的种蛋，将收集的种蛋经75％酒精擦拭消毒后，每枚吸取1ml蛋清于1.5ml离心管，并将蛋清样本在-20℃下反复冻融3次以降低其粘稠度，然后恢复至室温，将同一笼位内每只种母鸡的种蛋蛋清各取500μl混合均匀成混合样本。
2、检测每个混合样本中是否存在白血病病毒，如果混合样本检测结果为阴性，则所述混合样本对应的所有所述蛋清样本为阴性，所述蛋清样本对应的待检测种母鸡未携带白血病病毒，若所述混合样本检测结果为阳性，则将混合样本中对应的的笼位中所有的种母鸡进行清除。为了验证此种方法的准确率，分别单独鉴定每个血清样本是否携带白血病毒作为对照组，计算本方法检测的准确率。
本实验使用avianleukosisvirusantigentestkit检测白血病病毒，具体操作步骤如下：
(1)首先取出包被板，将20倍浓缩洗涤液用双蒸水稀释20倍后备用记录好待检测样品的位置，分别在a1、b1孔内各加入100μl未经稀释的阴性对照，在c1、d1孔内各加入100μl未经稀释的阳性对照，在对应的检样孔快速加入100μl待检样品。避光盖好反应板，并置于20-26℃孵育1小时。
(2)垂直方向甩掉包被板孔中的液体，用300μl稀释好的洗涤液洗涤反应板孔4-5次，最后一次在吸水纸上轻轻拍打反应板以将液体甩干。
(3)快速于每反应孔中加入100μl酶标抗体，避光盖好反应板，置于20-26℃继续孵育1小时，重复步骤(2)。
(4)快速向每个反应孔中加入100μl底物液，避光盖好反应板，于20-26℃下避光孵育15分钟。
(5)取出反应板，于每反应孔中加入100μl终止液以终止反应。
(6)使用酶标检测仪(biotek)测量样品及对照于波长为450nm处的吸光度。
(7)结果判定：当阳性对照平均值减去阴性对照平均值大于0.20，且阴性对照平均值不大于0.10时，检测结果有效。
检测结果：单独用每个蛋清样本进行检测，900只中检出27只阳性，阳性率为3％，用本实施例方法检测出75只阳性种母鸡，阳性率为8.33％。
实施例2
本实施例的试验群体为本公司养殖的a、b二个地方鸡品种，其中a为江汉鸡，b为欣华粉壳蛋鸡。每个品种各取450只进行实验，试验群体为每笼2只。
1、将900只待检测种母鸡按笼位顺序编号为笼位1号、笼位2号......笼位450号，按编号收集每个笼位内每只种母鸡的种蛋，将收集的种蛋经75％酒精擦拭消毒后，每枚吸取1ml蛋清于1.5ml离心管，并将蛋清样本在-20℃下反复冻融3次以降低其粘稠度，然后恢复至室温，将同一笼位内每只种母鸡的种蛋蛋清各取500μl混合均匀成混合样本。
2、检测每个混合样本中是否存在白血病病毒，如果混合样本检测结果为阴性，则所述混合样本对应的所有所述蛋清样本为阴性，所述蛋清样本对应的待检测种母鸡未携带白血病病毒，若所述混合样本检测结果为阳性，则将混合样本中对应的笼位中所有的种母鸡进行清除。为了验证此种方法的准确率，分别单独鉴定每个血清样本是否携带白血病毒作为对照组，计算本方法检测的准确率。
本实验使用avianleukosisvirusantigentestkit检测白血病病毒，具体操作步骤如下：
(1)首先取出包被板，将20倍浓缩洗涤液用双蒸水稀释20倍后备用记录好待检测样品的位置，分别在a1、b1孔内各加入100μl未经稀释的阴性对照，在c1、d1孔内各加入100μl未经稀释的阳性对照，在对应的检样孔快速加入100μl待检样品。避光盖好反应板，并置于20-26℃孵育1小时。
(2)垂直方向甩掉包被板孔中的液体，用300μl稀释好的洗涤液洗涤反应板孔4-5次，最后一次在吸水纸上轻轻拍打反应板以将液体甩干。
(3)快速于每反应孔中加入100μl酶标抗体，避光盖好反应板，置于20-26℃继续孵育1小时，重复步骤(2)。
(4)快速向每个反应孔中加入100μl底物液，避光盖好反应板，于20-26℃下避光孵育15分钟。
(5)取出反应板，于每反应孔中加入100μl终止液以终止反应。
(6)使用酶标检测仪(biotek)测量样品及对照于波长为450nm处的吸光度。
(7)结果判定：当阳性对照平均值减去阴性对照平均值大于0.20，且阴性对照平均值不大于0.10时，检测结果有效。
检测结果：单独用每个蛋清样本进行检测，900只中检出28只阳性，阳性率为3.11％，用本实施例方法检测出50只阳性种母鸡，阳性率为5.55％。
用本发明的方法对鸡群进行把白血病病毒检测时，可以减少检测次数，降低工作量，节约时间，降低成本特别是因进口试剂盒购进有配额限制和价格垄断情况，且种母鸡不需要或不必单笼饲养、捡蛋进行鸡白血病的疾病净化，能提高养殖鸡笼等资产的使用效率，准确率较高，综合效益明显。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。