本发明提供一种采用苏木精-伊红染色法染色过程中所用的组织返蓝液，并将该组织返蓝液应用于阑尾中淋巴小结的染色评价中。
背景技术：
苏木精-伊红染色法hematoxyli-eoitaiig(he)是病理科常规染色中最常用的技术方法之一，利用碱性染液苏木精将染色质和核酸染成蓝色，与酸性染料伊红所染的细胞质形成蓝红鲜明的对比，辨别不同的组织病理中的细胞形态。实践操作过程苏木精先经酸性溶液分化去除组织过多结合的染料和不应着色的区域，随后在碱性溶液中使着色的细胞呈现蓝色，变得更加清晰适中。
阑尾的管腔小而不规则，细胞种类丰富，上皮含杯状细胞较多，固有层内有极丰富的淋巴组织，大量淋巴小结可连续成层，并突入黏膜下层。淋巴小结分为初级淋巴小结和次级淋巴小结两种，其数量、形态和结构在抗原刺激下呈动态变化。淋巴细胞胞体大小不等，以小淋巴细胞为多。小淋巴细胞大小似红细胞、核圆，一侧常有浅凹，染色质精密呈块状，着色深；胞质少，嗜碱性较强，呈蔚蓝色。中淋巴细胞比中性粒细胞小，核染色略浅，胞质较小淋巴细胞多，蔚蓝色，含少量嗜天青颗粒。淋巴小结是反映体液免疫应答的重要形态学标志。优质的组织切片染色才能完美呈现淋巴小结。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明以阑尾手术标本为研究对象，研究不同碱性溶液在he染色中返蓝效果及最佳混合比，满足优良常规组织切片的要求，做好常规组织切片的室间质控，完美呈现组织的细胞形态，提高病理诊断的准确率。
所述的一种组织返蓝液，该返蓝液为饱和碳酸锂与edta混合液。
所述的饱和碳酸锂与edta混合液的体积比为0.2-5:1。
进一步优选为所述的饱和碳酸锂与edta混合液的体积比为1:4。
he染色过程中经盐酸酒精分化之后的苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态呈蓝色，在分化之后用水洗去酸而中止分化，用弱碱性溶液使苏木精染上的细胞核呈蔚蓝色，即蓝化。一般病理科多用自来水浸洗蓝化，但因各地水质不同，无法达到常规he组织切片室间质控要求。
本发明中采用的流动自来水及部分单纯溶液大多数无法使组织细胞核蓝化，与浆对比度差，核浆颜色相近，区域界线不明显，影响常规切片优良率与病理诊断的准确性。edta是一种碱性溶液ph约9.0，饱和碳酸锂水溶液呈碱性，两种碱性溶液按不同体积混合后，尤其以饱和碳酸锂与edta混合液(体积比1:4)蓝化作用明显优于纯溶液，但在加热条件下(约50℃)，碳酸锂可部分分解成氧化锂和二氧化碳，直接影响混合液的酸碱度使其蓝化效果欠佳。室温条件将饱和碳酸锂与edta混合液(体积比1:4)应用于he染色中的返蓝液具有操作便捷、成本低、效果理想等优势，同时饱和碳酸锂与edta混合液(体积比1:4)商品化也具有可行性。
优良的常规组织切片，可真实反映出组织的细胞正常形态与异型性，在正常组织形态下寻找病变区域和细胞，为疾病的诊断与分类提供依据，提高病理诊断的准确率，不仅能最大限度地达到常规组织切片的室间质控标准，还可全面提升医院的病理科诊断水平与临床综合实力。
附图说明
图1为200倍率下不同返蓝液在he染色中的返蓝效果，其中，a.质量分数为0.3%氨水；b.饱和碳酸锂；c.edta；d.流动自来水；e.饱和碳酸锂与edta混合液(体积比4:1)；f.饱和碳酸锂与edta混合液(体积比1:1)；g.饱和碳酸锂与edta混合液(体积比1:4)。
具体实施方式
实施例1
本技术：
的技术方案选取阑尾手术标本50例。标本前处理一致。
全自动封闭式组织脱水机(thermo,excelsioras)，组织包埋机(常州中威,bmj-b)，石蜡切片机(thermo,hm325)，漂片机(常州中威,ppj-a)，电热恒温干燥箱(上海跃进,hengzi)。
乙二胺四乙酸(edta)购自dako公司。to、苏木素、碳酸锂、醇溶性伊红、盐酸酒精溶液购自baso公司，酒精、氨水购自西陇化工股份有限公司
实验中所有切片厚度3μm。切片在65℃下烤片25min后脱蜡至水，室温下苏木素染色15min，0.5%分化液分化2s，返蓝液返蓝1min，醇溶性伊红染色2s，脱水、透明和封固。返蓝液分别选用质量分数为0.3%氨水、饱和碳酸锂、edta、流动自来水、饱和碳酸锂与edta混合液(体积比为1:1、1:4、4:1)。
本发明的技术方案在相同的前处理、染色步骤及染色条件下，针对阑尾手术标本50例，分别选取七种组织返蓝液，对比质量分数为0.3%氨水、饱和碳酸锂、edta、流动自来水、饱和碳酸锂与edta混合液(体积比为1:1、1:4、4:1)的返蓝效果及最佳混合比，上述实验返蓝所得出的实验结果一致。
七种返蓝液在he染色中的返蓝效果如图1所示。结果表明，七种返蓝液在he染色中均具有返蓝效果，但不同返蓝液对组织返蓝效果存在差异性，比较分析he染色中返蓝差异性可知，(1)质量分数为0.3%氨水、流动自来水、饱和碳酸锂与edta混合液(体积比4:1)、饱和碳酸锂与edta混合液(体积比1:1)(如图1a、1d、1e、1f)组织切片无法呈现组织结构，细胞核返蓝效果无法达标，核紫红色，与浆对比度差，无法辨识淋巴细胞及淋巴小结，无法实现核与浆蓝红相映、核浆分明，直接影响组织切片优良率和诊断准确率；(2)饱和碳酸锂和edta纯溶液返蓝作用略好(如图1b、1c)，其中edta纯溶液返蓝作用优于饱和碳酸锂，淋巴细胞蓝染，与浆对比较好，但次级淋巴小结生发中心不突出；(3)不同体积比的饱和碳酸锂与edta混合液对细胞核蓝化颜色不同，在体积比1:4作用下淋巴细胞细胞核呈黑紫色(如图1e)，体积比1:1时呈紫红色(如图1f)，而体积比1:4条件下才呈现出应有的蓝色(如图1g)；(4)在相同蓝化时间(1min)作用下，七种返蓝液中以饱和碳酸锂与edta混合液(体积比1:4)(如图1g)不仅蓝化作用迅速，蓝化效果明显，缩短手工染色时长，提高染色效率，而且能完美呈现组织结构形态，图中可见中央淡染的次级淋巴小结生发中心，周围淋巴细胞核呈蔚蓝色，颜色鲜艳，核与浆蓝红相映，对比度好，核染色质颗粒清晰，满足常规优良切片标准。