本发明涉及一种方法，特别是一种动脉壁成分的染色和鉴定方法。
背景技术：
在临床医学和动物科研过程中，经常需要对动脉进行检测。这其中涉及动脉的病理检测、需要对动脉壁的每种成分进行观察和鉴定。
正常动脉壁包括三层：(1)内层：靠近血流、又叫内膜，是动脉壁最薄的一层，由动脉内皮细胞构成，起到屏障和保护动脉的作用；(2)中层：位于内层和外层之间，又叫中膜，是动脉壁最厚的一层，由排列整齐的多层平滑肌细胞、弹力纤维和排列不规则的胶原纤维构成，具有收缩和舒张功能；(3)外层：为接触到血管周围组织的部分，由疏松结蹄组织构成，以成纤维细胞为主、并含螺旋状或纵向分布的弹性纤维和较多胶原纤维。
在动脉粥样硬化及高血压等病理情况下，动脉三层的结构、成分将发生改变，对它们的正确鉴别有利与分析该病人或动物的病理生理情况，从而正确指导诊断和治疗。
现有技术中涉及动脉壁的染色及识别技术主要有：(1)无染色：这种情况是动脉标本制成冰冻或石蜡切片后直接放在显微镜下观察，可以看到动脉的轮廓，推测动脉壁各种成分但无法细致区分。(2)苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，简称he染色：是现病理技术中最常用的染色方法，被广泛应用于临床病理及科研实验。he染色中只有两种染料，其中苏木精为碱性染料，将细胞核内染色质的核糖体染成紫蓝色；而伊红是酸性染料，将细胞质和细胞外基质中的成分染成红色。故he染色的优点是简单，染料品种少、染色步骤少、染色过程快。缺点是，除细胞胞核被染成蓝色外，其它成分均被染成红色，无法确切区分动脉壁的其它成分。(3)动脉内皮细胞免疫组化染色：即血管性血友病因子(vwf)免疫组织化学染色。它可特异性的区别动脉内皮细胞，染色原理是动脉内皮细胞特异性的表达vwf,故采用可以识别vwf的抗vwf抗体进行免疫组化染色，通过抗原-抗体特异性结合及化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而定位定量定性的研究动脉内皮细胞。缺点是耗时长、无法确定动脉壁其它成分。(4)平滑肌免疫组化染色：即阿尔法-肌动蛋白(α-actin)平滑肌细胞免疫组织化学染色。它可特异性的区别动脉平滑肌细胞，染色原理与动脉内皮细胞类似。动脉平滑肌细胞特异性的表达具有收缩功能的微丝蛋白α-actin，因此，采用可识别α-actin的抗α-actin抗体、并结合化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定平滑肌细胞。除α-actin外，α-sma也是阿尔法-肌动蛋白，同样用于平滑肌细胞的免疫组化检测。缺点是α-actin抗体和α-sma抗体均无法识别动脉壁其它成分。
上述各种染色可以观察到动脉壁的轮廓，可以分别观察到细胞核、动脉内皮细胞或平滑肌细胞，缺点是不能同时区别动脉壁的所有成分。而同时正确鉴别动脉壁的各个成分具有一定必要性。因此，现有的动脉染色技术有待进一步提高。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种通过化学染色使动脉壁不同成分呈现不同颜色，通过区别颜色、结合形态学改变，从而识别动脉壁成分，协助动脉的诊断及治疗的动脉壁成分的染色和鉴定方法。
本发明的目的可以通过以下措施来达到：一种动脉壁成分的染色和鉴定方法，其特征在于：对石蜡动脉切片依次经加温、脱蜡、水化、铁化苏木精染色、酸性苯胺蓝染色、酸性红染色，再经脱水、透明、封片，使动脉壁中不同成分呈现不同颜色。
本发明的目的还可以通过以下措施来达到：
进一步的，所述的脱蜡、水化过程包括依次将切片浸泡于2盒100％酒精各3分钟、2盒95％酒精各3分钟、2盒70％酒精各3分钟、2盒蒸馏水各3分钟。
进一步的，铁化苏木精染色、酸性苯胺蓝染色、酸性红染色各10分钟，每一步染色之后均需用水清洗切片。
进一步的，铁化苏木精液的配制：称取苏木精0.5g、氯化铁0.58g，溶解于95％酒精50ml、盐酸0.5ml、蒸馏水49.5ml中。
进一步的，酸性苯胺蓝的配制：称取苯胺蓝2.5g，溶解于冰醋酸3ml、蒸馏水97ml中。
进一步的，酸性红的配制：称取猩红色0.9g、酸性品红0.1g，溶解于冰醋酸1ml、蒸馏水99ml中。
进一步的，所述的加温过程：将石脉切片放置于切片托盘上并置于56'c温箱中，加温1小时。
进一步的，所述的脱水、透明过程：依次将切片浸泡于95％乙醇2分钟、100％乙醇2分钟、二甲苯2分钟。
进一步的，所述的封片过程：沥去切片上的液体，或用吸管小心吸去切片上多余的液体，切片放置与空气中5分钟自然干燥，在切片上滴1-2滴水溶性封片剂或粘合剂-树脂，在切片上用盖玻片覆盖组织，避免盖玻片与载玻片组织之间出现空气泡，以免影响美观及结果观察。
本发明相比现有技术具有如下优点和积极效果：
1、细胞核被染成深蓝或者黑色为小圆点或小长条；弹力纤维被染成黑色呈绳梭状；胶原纤维被染成蓝色为绳梭状；内皮细胞胞质被染成玫瑰红色为长条形；平滑肌细胞胞质被染成玫瑰红色为长梭形。依据这些染成的颜色和形态学特点，从而识别动脉壁成分。
2、通过染色使动脉壁不同成分呈现不同颜色，通过区别颜色、结合形态学改变，识别动脉壁成分，协助动脉的诊断及治疗。这不同于现有的动脉染色技术(见背景技术)，它们不能同时鉴别动脉壁的各个成分，每一种技术只能明确某一种或二种动脉壁成分。
具体实施方式
本发明下面将结合实施例作进一步详述：
1、准备标本：
①取材：分离需要检测的动脉段标本；
②固定：将标本浸泡于10％福尔马林液中24小时以上；
③包埋：将动脉标本包埋于石蜡块中，注意动脉段需垂直包埋；
④切片：将石蜡标本切成5um厚度的蜡片；
⑤贴片：将组织蜡片平整的贴敷于载玻片上制成动脉切片备用。
2、染料液体配制：
①铁化苏木精液：称取苏木精0.5g、氯化铁0.58g，溶解于95％酒精50ml、盐酸0.5ml、蒸馏水49.5ml中；
②苯胺蓝液：称取苯胺蓝2.5g，溶解于冰醋酸3ml、蒸馏水97ml中；
③酸性红液：称取猩红色0.9g、酸性品红0.1g，溶解于冰醋酸1ml、蒸馏水99ml中。
3、组织染色：
①加温：将切片组织放置于托盘中再置于56’c温箱中加温1小时：
②脱蜡及水化：依次将切片浸泡于梯度酒精中脱蜡及蒸馏水中水化，2盒100％酒精各3分钟、2盒95％酒精各3分钟、2盒70％酒精各3分钟、2盒蒸馏水各3分钟；
③苏木精染色：将切片组织浸泡于苏木精染液中10分钟，之后自来水清洗5分钟或用清水浸泡3分钟x2次，再经蒸馏水漂净；
④苯胺蓝染色：将切片组织浸泡于苯胺蓝染液中10分钟，之后自来水清洗5分钟或用清水浸泡3分钟x2次，再经蒸馏水漂净；
⑤酸性红液染色：将切片组织浸泡于酸性红液体中10分钟，之后自来水清洗5分钟或用清水浸泡3分钟x2次，再经蒸馏水漂净；⑥脱水与透明：将切片浸泡于梯度酒精中快速脱水，95％乙醇2分钟、100％乙醇2分钟，再用二甲苯处理2分钟以增加组织透明度。
4、封片：
①干燥切片：沥去切片上的液体，或用吸管小心吸去切片上多余的液体，切片放置与空气中5分钟自然干燥；
②滴加封片剂：在切片上滴1-2滴水溶性封片剂或粘合剂-树脂；
③覆盖盖玻片：在切片上用盖玻片覆盖组织，避免盖玻片与载玻片组织之间出现空气泡，以免影响美观及结果观察。
5、观察结果：
①将切片放置于显微镜下观察染色结果，通过被染颜色–识别动脉壁的成分–结合结构特点以便确定-可知所用染料：
◆深蓝或黑色–为细胞核–呈小圆点或小长条形–由铁化苏木精所染
◆深蓝或黑色–为弹力纤维–呈绳梭状–由铁化苏木精所染
◆蓝色–为胶原纤维–呈绳梭状结构–由苯胺蓝所染
◆玫瑰红色–位于动脉内膜的为内皮细胞–呈长条形–由酸性品红液所染
◆玫瑰红色–位于动脉中膜的为平滑肌细胞–呈长梭形–由酸性品红液所染
②动脉壁成分识别的意义：
随着年龄的增长或在高血压冠心病等时，动脉内膜、中膜及外膜均发生改变：
◆内膜：内皮细胞受损、连续性中断，内膜增厚、突出管腔内。
◆中膜：内膜下或中膜的平滑肌细胞、胶原纤维、弹力纤维三者的比例发生改变，平滑肌细胞增加、胶原纤维增加、弹力纤维减少、断裂或钙化。
◆外膜：动脉外膜纤维结蹄组织大量增生。
以上改变导致动脉直接增加、管腔狭窄、动脉僵硬度增加、顺应性下降。其中动脉官腔狭窄程度与内膜增生程度呈正相关、动脉僵硬度与胶原含量呈负相关与弹力纤维含量呈正相关。动脉成分的正确鉴别，有利于疾病性质及程度的正确诊断及治疗。