雌二醇丝印传感器及其制备方法与流程

本发明涉及生物传感器技术领域，具体而言，涉及雌二醇丝印传感器及其制备方法。

背景技术：

雌二醇在血液中的浓度主要受下丘脑-垂体-性腺轴调节控制，呈周期性波动规律。正常育龄妇女体内血液中雌二醇含量为67pmol/l～1800pmol/l不等，随着月经周期呈周期性改变。雌二醇在卵泡初期时浓度最低，可低至100pmol/l以下，而处于排卵期时浓度最高可达1800pmol/l以上，妇女绝经后雌二醇水平则持续低于100pmol/l。

雌激素在促进女性性征的发育及维持、促进生殖细胞的成熟、形成受精卵、胚胎着床以及维持妊娠中起着必不可少的作用。其中雌二醇(e2)的水平在评估女性生殖功能中尤其重要。雌二醇浓度过高或过低都会导致生殖及内分泌系统紊乱，从而引发多种疾病，例如幼女性早熟、月经紊乱、不孕不育、异位妊娠等。

随着人们对于体内雌二醇浓度测定的越来越重视，用于体内雌二醇测定的方法和仪器正以日新月异地速度发展着。目前用于体内雌二醇测定的方法主要有：放射免疫分析法(ria)、酶联免疫吸附分析法(elisa)、免疫放射分析法(irma)、时间分辨荧光免疫分析(delfia)、酶放大化学发光法(immulite)、电化学发光法(elecsys)、色谱法(chromatography)。

放射免疫分析法优点突出：特异性强，不受周围环境和样本内干扰物质的影响；低本底和高灵敏度；与小分子量同位素的结合不影响免疫反应；应用范围广，具有完善的放射测量体系；操作简便等。但其缺点也是显而易见的：同位素的半衰期使得试剂盒稳定性低；结合于抗原或抗体分子上的125i分子有限，过高会引起结合物的自照射分解；试剂的使用，购买以及废物处理等均引起一定的辐射安全问题；实验容易产生交叉反应、假阳性反应，采血量大，反应测定时间较长。

酶联免疫吸附分析法方法特异性高、操作简便、无污染。但是这种通过比色法或偏振光法进行检测的方法干扰大，易产生假阳性反应，其灵敏度和稳定性也未能高于放射免疫分析法。

免疫放射分析法标记抗体的比活度高，提高了分析的灵敏度(＞l0^-12～l0^-9mol/l)。反应快，范围广，特异性高，稳定度高的优点让免疫放射分析法越来越受到青睐，但是由于放射性标记带来的半衰期短和同位素污染成为该方法不可避免的负面影响。

酶放大化学发光分析法灵敏度高(＞l0^-12～l0^-9mol/l)、时间短、自动化程度高、线性范围宽、对环境无污染，其采用的化学发光法可与ria媲美，是一种功能全，运行平稳，高效快速准确的化学发光分析仪。但是化学发光分析仪价格昂贵，重要操作环节须由专业人员监控，对机器运行环境有一定要求，不利于临床推广。

电化学发光法具有灵敏度高(＞l0^-12～l0^-9mol/l)、仪器设备简单、分析速度快、易实现自动化等优点，然而该方法采用非直接标记，易造成交叉污染，易受环境因素干扰，并且设备价格昂贵，依然不适合广大患者方便利用。

色谱法灵敏度极高(l0^-14～l0^-9mol/l)，检出限低，分析时间短。但是该方法在测定之前需要对待测物质进行多种处理，仪器价格昂贵，并且需要专业人员才能操作，不利于临床上广泛使用。

因此，亟需一种用于雌二醇测定特异性强，稳定性好，且使用方便的快速诊断医疗器械。

技术实现要素：

本发明的目的包括提供一种雌二醇丝印传感器及其制备方法，以提供一种用于雌二醇测定的特异性强，稳定性好，且使用方便的快速诊断医疗器械。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

第一方面，本发明提供了一种雌二醇丝印传感器，其包括：塑料承印基材以及铺印于塑料承印基材上的导电基轨层，在导电基轨层的中间部分的末端印制有工作电极，在导电基轨层的两侧部分的末端分别印制有辅助电极层和参比电极层，形成三电极体系，且工作电极层的表面经过多壁碳纳米管和十六烷基三甲基溴化铵的复合修饰。

第二方面，本发明还提供了一种上述雌二醇丝印传感器的制备方法，其至少包括：在印制于所述塑料承印基材上的所述导电基轨层的中间部分的末端以及两侧部分的末端分别印刷所述工作电极层、所述辅助电极层和所述参比电极层，形成三电极体系；利用所述多壁碳纳米管和所述十六烷基三甲基溴化铵对所述工作电极层的表面进行复合修饰。

通过在塑料承印基材上形成的三电极体系，并且工作电极层通过多壁碳纳米管和十六烷基三甲基溴化铵的复合修饰后，使得该传感器能够发生电化学反应，并能够对雌二醇进行特异性识别，进而能够达到对雌二醇进行测定时灵敏度高，特异性强，稳定性好，且使用方便的效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为通过实施例1的雌二醇丝印传感器检测的给予外源性e2后48h内大鼠体内e2的变化曲线；

图2为大鼠子宫和卵巢脏器指数(n＝6)；

图3为大鼠子宫和卵巢解剖图片；

图4为通过实施例1的雌二醇丝印传感器检测的小鼠血中e2的swv曲线；

图5为通过实施例1的雌二醇丝印传感器检测的大鼠血中e2的swv曲线。

具体实施方式

为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施方式或实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施方式的涉及雌二醇丝印传感器及其制备方法进行具体说明。

根据本发明的第一方面，一些实施方式提供一种雌二醇丝印传感器，其包括：塑料承印基材以及铺印于塑料承印基材上的导电基轨层，在导电基轨层的中间部分的末端印制有工作电极层，在导电基轨层的两侧部分的末端分别印制有辅助电极层和参比电极层，形成三电极体系，且工作电极层的表面经过多壁碳纳米管和十六烷基三甲基溴化铵的复合修饰。

该雌二醇丝印传感器可以通过连接计算机等采用电化学测定方法即伏安法为中心，以反应体系中的电位，电流或电量变化反映待测反应体系中发生的化学反应的量度的方法。循环伏安法是在某一电位下反转扫描方向，同时检测还原反应和氧化反应的方法。本发明的实施方式中，通过在塑料承印基材上形成的三电极体系，并且工作电极层通过多壁碳纳米管(mwnt)和十六烷基三甲基溴化铵(ctab)的复合修饰后，使得该传感器能够发生电化学反应，并能够对雌二醇进行特异性识别，进而雌二醇在丝网印刷传感器工作电极表面进行氧化还原反应，将反应体系中雌二醇的浓度变化转化为电流-电位曲线，从而达到对生物样品中雌二醇进行微量测定的目的。

具体地，一些实施方式中，导电基轨层可以是由银油墨印刷出的导电银基轨。银油墨为市场上常规售卖的镜面银油墨，又名银浆等。通过银油墨印刷得到的电路基板，导电银基轨具有很好的导电性能，进而能够提高传感器的导电性。

根据一些实施方式，工作电极层和辅助电极层均可以为碳油墨印制的电极层，碳油墨是一种改良型的纯碳素颗粒发热的产品，发热时无辐射，产生对人体有益的红外线，参比电极层可以为银/氯化银油墨印制的电极层。

为了充分避免导电油墨成分渗透到待测体系中对反应进行造成干扰，一些实施方式中，导电基轨层未印刷电极的部分覆盖有一层绝缘层。从而通过绝缘层能够对三个电极的其他部分进行覆盖，同时三个电极部分由于设置有电极层，进而使得整个导电基轨层不会直接与待测体系进行接触，使得不会有银油墨进行待测体系中，因此，测试结果更加准确。

一些实施方式中，塑料承印基材为pvc承印基材。通过选择pvc材质的塑料板作为承印基材，使得得到的传感器的稳定性更佳。

根据本发明的另一方面，一些实施方式还提供了雌二醇丝印传感器的制备方法，其至少包括：

s1、在印制于塑料承印基材上的导电基轨层的中间部分的末端以及两侧部分的末端分别印刷工作电极层、辅助电极层和参比电极层，形成三电极体系。

具体地，一些实施方式中，需要先将导电银基轨印制在塑料承印基材上，通过将塑料承印基材例如pvc承印基材放置于导电网版印刷面下，各边对齐标记点。在导轨网版上均匀印刷导电油墨(例如银油墨)，导电油墨即可在塑料承印基材上印刷出导电基轨层。在印刷出导电基轨层后，将得到的基材板放置于65～75℃的温度下干燥25～35min，例如放置于烘箱内进行烘干操作。优选地，放置于70℃烘箱中烘干30min。一些实施方式中，塑料基材板的尺寸大小可以为13×8×0.5cm。

需要说明的是，印刷有导电银基轨的承印基材也可以通过购买的方式直接从市场得到。

一些实施方式中，工作电极层、辅助电极层和参比电极层的印刷先后顺序不限，可以是先印刷工作电极层，再印刷辅助电极层和参比电极层；也可以是先印刷辅助电极层，再印刷工作电极层和参比电极层。

具体地，在导电基轨层印刷工作电极层、辅助电极层和参比电极层后均将印刷后的承印基材板均在65～75℃的温度下干燥25～35min。例如，印制工作电极层、辅助电极层和参比电极层的顺序为先印刷工作电极层，再印刷辅助电极层，最后印刷参比电极层。则在印刷工作电极层后，将印刷后的承印基材板均在65～75℃的温度下干燥25～35min，然后再印刷辅助电极层，然后将印刷后的承印基材板均在65～75℃的温度下干燥25～35min，再印刷参比电极层，最后再印刷后的承印基材板均在65～75℃的温度下干燥25～35min。干燥过程均可以在烘箱内进行烘干。优选在70℃烘箱中烘干30min。

一些实施方式中，工作电极层、辅助电极层和参比电极层均通过丝网印刷形成，即通过工作电极网版、辅助电极网版和参比电极网版进行印刷。

s2、利用多壁碳纳米管和十六烷基三甲基溴化铵对工作电极层的表面进行复合修饰。

具体地，对工作电极层的表面进行复合修饰具体可以包括：将多壁碳纳米管-十六烷基三甲基溴化铵复合修饰液(mwnt-ctab复合修饰液)涂于工作电极层的表面，并干燥，优选地，室温下自然干燥。通过复合修饰液的形式能够使得充分对工作电极进行修饰，达到很好的修饰效果。

进一步地，一些实施方式中，多壁碳纳米管-十六烷基三甲基溴化铵复合修饰液由以下步骤制备得到：将十六烷基三甲基溴化铵和多壁碳纳米管在水中混合后，进行超声分散。超声分散的方式可以使得多壁碳纳米管能够在十六烷基三甲基溴化铵的溶液中充分分散。优选地，超声分散的时间至少为25min。

优选地，先将十六烷基三甲基溴化铵配置为浓度为0.8～1.2％的十六烷基三甲基溴化铵溶液，再和多壁碳纳米管混合后进行超声分散；十六烷基三甲基溴化铵和多壁碳纳米管的质量比可以为100：4～6。上述比例的修饰成分进行配比后能够充分与工作电极进行结合。

根据一些实施方式，为了避免导电油墨成分渗透到待测体系中对反应进行造成干扰，该制备方法还可以包括以下步骤：

s3、在导电基轨层未印刷电极的部分通过绝缘层网版印刷绝缘油墨，形成绝缘层。

具体地，绝缘层网版上均匀印刷绝缘油墨，使绝缘油墨印制于对齐的pvc板传感器上方并覆盖电极部分。将印制好的pvc板平置于70℃烘箱中烘干20min。该步骤可以在未对工作电极进行修饰之前进行，也可以在对工作电极进行修饰之后进行，或者也可以在未形成电极层之前进行。

制备好的雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)存储于干燥器中备用，使用前先采用去离子水冲洗电极表面除掉灰尘。

雌二醇丝印传感器的使用方法为常规循环伏安法的检测方法，将需要待检测的液体施加到雌二醇丝印传感器上，连接计算机等，雌二醇在丝网印刷传感器工作电极表面进行氧化还原反应，将反应体系中雌二醇的浓度变化转化为电流-电位曲线。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例通过以下步骤制备雌二醇丝印传感器：

(1)导电基轨层：将pvc承印基材放置于导轨网版印刷面下，各边对齐标记点。在导轨网版上均匀印刷银油墨，银油墨即可在pvc承印基材上印刷出导电银基轨。将印制好的pvc板平置于70℃烘箱中烘干30min。

(2)工作电极层：待步骤1制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在工作电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板中间导电银基轨末端，形成工作电极。将印制好的pvc板平置于70℃烘箱中烘干30min。

(3)辅助电极层：待步骤2制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在辅助电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板右边导电银基轨末端，形成辅助电极。将印制好的pvc板平置于70℃烘箱中烘干30min。

(4)参比电极层：待步骤3制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在参比电极网版上均匀印刷银/氯化银油墨，使银/氯化银油墨印制于对齐的pvc板左边导电银基轨末端，形成参比电极。将印制好的pvc板平置于70℃烘箱中烘干30min。

(5)绝缘层：待步骤4制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在绝缘层网版上均匀印刷绝缘油墨，使绝缘油墨印制于对齐的pvc板传感器上方并覆盖电极部分。将印制好的pvc板平置于70℃烘箱中烘干20min。

(6)表面修饰剂的制备：称取0.1gctab溶于10ml蒸馏水中，配制成1％的ctab溶液，再加入5mgmwnt，配制成mwnt-ctab修饰液，超声分散30min，多次超声分散后使mwnt-ctab修饰液分散均匀，备用。

(7)电极表面的修饰：用移液器吸取1.0μlmwnt-ctab复合修饰液滴涂于传感器工作电极表面，于室温自然干燥，制得雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)。

(8)将制备好的雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)储存于干燥器中备用，使用前先采用去离子水冲洗电极表面除掉灰尘。

实施例2

本实施例通过以下步骤制备雌二醇丝印传感器：

(1)导电基轨层：将pvc承印基材放置于导轨网版印刷面下，各边对齐标记点。在导轨网版上均匀印刷银油墨，银油墨即可在pvc承印基材上印刷出导电银基轨。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(2)工作电极层：待步骤1制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在工作电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板中间导电银基轨末端，形成工作电极。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(3)辅助电极层：待步骤2制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在辅助电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板右边导电银基轨末端，形成辅助电极。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(4)参比电极层：待步骤3制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在参比电极网版上均匀印刷银/氯化银油墨，使银/氯化银油墨印制于对齐的pvc板左边导电银基轨末端，形成参比电极。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(5)绝缘层：待步骤4制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在绝缘层网版上均匀印刷绝缘油墨，使绝缘油墨印制于对齐的pvc板传感器上方并覆盖电极部分。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干22min。

(6)表面修饰剂的制备：称取0.11gctab溶于10ml蒸馏水中，配制成1.1％的ctab溶液，再加入6mgmwnt，配制成mwnt-ctab修饰液，超声分散26min，多次超声分散后使mwnt-ctab修饰液分散均匀，备用。

(7)电极表面的修饰：用移液器吸取1.0μlmwnt-ctab复合修饰液滴涂于传感器工作电极表面，于室温自然干燥，制得雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)。

(8)将制备好的雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)储存于干燥器中备用，使用前先采用去离子水冲洗电极表面除掉灰尘。

实施例3

本实施例通过以下步骤制备雌二醇丝印传感器：

(1)导电基轨层：将pvc承印基材放置于导轨网版印刷面下，各边对齐标记点。在导轨网版上均匀印刷银油墨，银油墨即可在pvc承印基材上印刷出导电银基轨。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(2)工作电极层：待步骤1制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在工作电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板中间导电银基轨末端，形成工作电极。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(3)辅助电极层：待步骤2制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在辅助电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板右边导电银基轨末端，形成辅助电极。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(4)参比电极层：待步骤3制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在参比电极网版上均匀印刷银/氯化银油墨，使银/氯化银油墨印制于对齐的pvc板左边导电银基轨末端，形成参比电极。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干33min。

(5)绝缘层：待步骤4制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在绝缘层网版上均匀印刷绝缘油墨，使绝缘油墨印制于对齐的pvc板传感器上方并覆盖电极部分。将印制好的pvc板平置于68℃烘箱中烘干22min。

(6)表面修饰剂的制备：称取0.09gctab溶于10ml蒸馏水中，配制成0.9％的ctab溶液，再加入4mgmwnt，配制成mwnt-ctab修饰液，超声分散28min，多次超声分散后使mwnt-ctab修饰液分散均匀，备用。

(7)电极表面的修饰：用移液器吸取1.0μlmwnt-ctab复合修饰液滴涂于传感器工作电极表面，于室温自然干燥，制得雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)。

(8)将制备好的雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)储存于干燥器中备用，使用前先采用去离子水冲洗电极表面除掉灰尘。

实施例4

本实施例通过以下步骤制备雌二醇丝印传感器：

(1)导电基轨层：将pvc承印基材放置于导轨网版印刷面下，各边对齐标记点。在导轨网版上均匀印刷银油墨，银油墨即可在pvc承印基材上印刷出导电银基轨。将印制好的pvc板平置于72℃烘箱中烘干26min。

(2)工作电极层：待步骤1制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在工作电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板中间导电银基轨末端，形成工作电极。将印制好的pvc板平置于72℃烘箱中烘干26min。

(3)辅助电极层：待步骤2制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在辅助电极网版上均匀印刷碳油墨，使碳油墨印制于对齐的pvc板右边导电银基轨末端，形成辅助电极。将印制好的pvc板平置于72℃烘箱中烘干26min。

(4)参比电极层：待步骤3制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在参比电极网版上均匀印刷银/氯化银油墨，使银/氯化银油墨印制于对齐的pvc板左边导电银基轨末端，形成参比电极。将印制好的pvc板平置于72℃烘箱中烘干26min。

(5)绝缘层：待步骤4制作的pvc板烘干后，取出冷却，再在绝缘层网版上均匀印刷绝缘油墨，使绝缘油墨印制于对齐的pvc板传感器上方并覆盖电极部分。将印制好的pvc板平置于72℃烘箱中烘干18min。

(6)表面修饰剂的制备：称取0.1gctab溶于10ml蒸馏水中，配制成1％的ctab溶液，再加入5mgmwnt，配制成mwnt-ctab修饰液，超声分散32min，多次超声分散后使mwnt-ctab修饰液分散均匀，备用。

(7)电极表面的修饰：用移液器吸取1.0μlmwnt-ctab复合修饰液滴涂于传感器工作电极表面，于室温自然干燥，制得雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)。

(8)将制备好的雌二醇丝印传感器(mwnt/ctab-spe)储存于干燥器中备用，使用前先采用去离子水冲洗电极表面除掉灰尘。

试验例

将实施例1得到的雌二醇丝印传感器用来在生物样本中进行应用。

一、雌二醇丝印传感器的特异性实验

将0.15gedta-na2加入到10ml生理盐水中，配制成15mg/mledta-na2抗凝剂，加到ep管中，抗凝比例为v抗凝剂：v血液＝1：10。

将购买回来的sd大鼠随机分组(n＝6)，分为空白组(生理盐水)、雌二醇低剂量组(0.18mg/kg)、雌二醇中剂量组(0.9mg/kg)、雌二醇高剂量组(4.5mg/kg)。

腹腔给药后，分别于6h，12h，18h，21h，22h，23h，26h，32h，48h采用眼底静脉采血，每次采血0.5ml，将50μl血样加入到50μl的0.1m的na2co3/硼砂缓冲液(ph＝11)中，采用mwnt/ctab-spe测定血样中雌二醇(e2)含量。

48h后处死大鼠，取出卵巢和子宫，称重脏器与体重并记录脏器指数。

其结果如图1、图2以及图3所示，图1为给予外源性e2后48h内大鼠体内e2的变化曲线。图1中曲线由下到上依次为对照空白组、雌二醇低剂量组(0.18mg/kg)、雌二醇中剂量组(0.9mg/kg)、雌二醇高剂量组(4.5mg/kg)的曲线。图2为大鼠子宫和卵巢脏器指数(n＝6)。图3为大鼠子宫和卵巢解剖照片。

从图1中可以看出，给予大鼠注射外源性雌二醇后，大鼠体内的雌二醇含量呈现规律性变化，在22h附近达到最大吸收峰，符合雌二醇药代动力学特点。分别给予大鼠注射低、中、高剂量的雌二醇后，大鼠体内的雌二醇浓度表现出较好的量效关系，因此，mwnt/ctab-spe能特异性地测定出血样中的雌二醇。

通过计算大鼠卵巢和子宫脏器指数(如图2)，结果发现，同空白对照组大鼠卵巢和子宫脏器(如图3)相比，给予低剂量雌二醇组的大鼠卵巢和子宫脏器指数出现明显增加，子宫壁明显增厚(如图3b)，可能是雌二醇促进子宫细胞增生；给予中剂量雌二醇组的大鼠卵巢和子宫脏器指数略微增长，和对照组无明显差异(如图3c)；给予高剂量雌二醇组的大鼠卵巢和子宫脏器指数反而下降，子宫出现一定程度的萎缩(如图3d)，可能是高浓度的雌二醇抑制了子宫的机能。

二、雌二醇丝印传感器测定小鼠血中e2的含量

将0.15gedta-na2加入到10ml生理盐水中，配制成15mg/mledta-na2抗凝剂，加到ep管中，抗凝比例为v抗凝剂：v血液＝1：10。

将饲养km小鼠摘眼球取血，将100μl血样加入到100μl的0.1m的na2co3/硼砂缓冲液(ph＝11)中，采用mwnt/ctab-spe测定血样中雌二醇含量。

在上述样本中，分别加入0，0.1nm，0.3nm和0.5nm的e2，求得加样标准曲线和相关系数。结果如图4所示，图4为利用mwnt/ctab-spe在0.1m的na2co3/硼砂缓冲液(ph＝11)中测定小鼠血样中雌二醇含量的swv曲线。

在上述基础上，继续增加雌二醇浓度。随着雌二醇浓度的升高(0，0.1nm，0.3nm，0.5nm)，峰电流值与浓度呈线性关系。小鼠血中雌二醇的加样标准曲线相关系数为0.9933。通过计算得到，正常小鼠血中的雌二醇含量为2.24×10^-9m。

三、雌二醇丝印传感器测定大鼠血中e2的含量

将0.15gedta-na2加入到10ml生理盐水中，配制成15mg/mledta-na2抗凝剂，加到ep管中，抗凝比例为v抗凝剂：v血液＝1：10。

将饲养sd大鼠摘眼球取血，将100μl血样加入到100μl的0.1m的na2co3/硼砂缓冲液(ph11)中，采用mwnt/ctab-spe测定血样中雌二醇含量。

在上述样本中，分别加入0，0.1nm，0.3nm和0.5nm的e2，求得加样标准曲线和相关系数。

图5为利用mwnt/ctab-spe在0.1m的na2co3/硼砂缓冲液(ph＝11)中测定大鼠血样中雌二醇含量的swv曲线。在上述基础上，继续增加雌二醇浓度。随着雌二醇浓度的升高(0，0.1nm，0.3nm，0.5nm)，峰电流值与浓度呈线性关系。大鼠血雌二醇的加样标准曲线相关系数为0.9941。通过计算得到，正常大鼠血中的雌二醇含量为0.791×10^-9m。

四、不同方法测定血中e2的含量及回收率比较

将0.15gedta-na2加入到10ml生理盐水中，配制成15mg/mledta-na2抗凝剂，加到ep管中，抗凝比例为v抗凝剂：v血液＝1：10。

将饲养sd大鼠摘眼球取血，移至离心管，4℃下以5000r/min离心5min，分别取300μl上清液，分别备用于mwnt/ctab-spe和ria法的测定。

分别采用mwnt/ctab-spe和ria法测定血清中雌二醇浓度，分别加0，0.1nm，0.3nm和0.5nm的e2溶液(终浓度)的加样回收率。计算结果表1所示。

表1血样中e2回收率测定表(浓度单位：×1^0-9m)

加样回收率反映了测定的准确度，由表1的结果，可以发现mwnt/ctab-spe和ria法相比较，回收率更接近于100％，mwnt/ctab-spe准确度优于ria法，并且mwnt/ctab-spe可以直接用于血样测定，减少了前处理步骤，优势更加明显。

综上所述，针对现今雌二醇检测方法中前处理过程复杂，采血量大，病人依从性差的缺点，将本发明的实施方式制得的mwnt/ctab-spe直接用于生物血样中雌二醇的测定。由于雌二醇(e2)是一种内源性物质，通过给予大鼠外源性的雌二醇，按照雌二醇在体内的药物代谢过程，观察大鼠体内雌二醇的变化过程，从而判断mwnt/ctab-spe对血样中雌二醇的特异性测定。给予大鼠注射外源性雌二醇后，大鼠体内雌二醇浓度与剂量表现出较好的量效关系，从而表明mwnt/ctab-spe能特异性地测定血样中的雌二醇。另外通过计算大鼠子宫和卵巢脏器指数，发现低剂量的雌二醇能促进子宫壁加厚，高剂量的雌二醇反而导致子宫萎缩。从而提示了雌二醇浓度能在一定程度上影响生殖系统的发育。

以上结果表明mwnt/ctab-spe对雌二醇具有足够的灵敏度，能够直接用于生物样本的测定，可以成为进行雌二醇相关性研究和药物筛选及临床诊断辅助的有效工具。另外，通过与ria法比较，可以发现mwnt/ctab-spe的回收率更接近于100％，准确度优于常规用于雌二醇检测的ria法。而且ria法操作复杂，前处理步骤冗长，mwnt/ctab-spe作为一种新型的快速诊断即抛性检测手段的优势更加明显。

以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。