一种载脂蛋白E检测试剂盒的制作方法

本实用新型属于医学免疫领域，尤其涉及一种载脂蛋白E检测试剂盒。

背景技术：

载脂蛋白E(ApoE)是一个含有299个氨基酸结合有磷脂的糖蛋白。其分子量为34kD。ApoE可以在各种组织中合成，但肝脏为主，首先合成的是含有317个氨基酸的前肽，这个前肽在内质网中经过蛋白水解作用除去 18个氨基酸的信号肽，再经过糖基化作用和细胞外液的脱唾液酸形成成熟的ApoE；ApoE分泌入血液后转移到脂蛋白中。ApoE是脂蛋白所必须的结构蛋白，可通过与各组织细胞的受体结合，参与脂蛋白代谢，调节胆固醇水平，激活卵磷脂腿固醇脂舫蘸转移酶(LCAT)，并具有某种免疫调节作用。测定ApoE对诊断和治疗高脂血症动脉粥样硬化等疾病提供了重要理论依据。载脂蛋白E主要存在于CM、VLDL、IDL和部分HDL中，正常人血浆ApoE 浓度为0.03～0.05g/L。Apo E的浓度与血浆甘油三酯含量呈正相关。

已知测定ApoE的方法有层析法、电泳法、免疫分析法、其中层析法和电泳法操作繁琐，不能进行批量样本分析和直接上全自动生化分析仪等缺点，而免疫分析法中的免疫扩散法、放射免疫分析法、荧光标记免疫分析法、酶标记免疫分析法、化学发光免疫分析法也存在诸多不足之处；如需特殊的设备，样品需处理，不能上全自动生化分析仪进行批量监测分析等。临床常用的免疫比浊法因其样本用量少，可直接在全自动生化分析仪上批量样本分析、操作简单受其欢迎；此外，现有技术的载脂蛋白E试剂盒，在使用时，由于对温度的要求较高，现有试剂盒无法准确控制试剂瓶内温度，容易使试剂发送变异。

技术实现要素：

本实用新型针对现有技术的不足，提供了一种载脂蛋白E检测试剂盒，包括：盒体、盒盖、试剂瓶、温控仪、储能装置、固定装置、温度传感器、取物盖、卡槽、卡扣、制冷装置。

所述的盒体中设置有试剂瓶，其中所述的试剂瓶包括R1试剂瓶和R2试剂瓶。所述的固定装置包括卡槽和卡扣。所述的卡扣设置在试剂瓶的底部，并且所述的卡扣与所述的盒体底部设置的卡槽配合设置，所述的试剂瓶通过固定装置固定在卡槽内。所述的盒体底部嵌设有一个制冷装置，其中所述的制冷装置嵌设在卡槽内。所述的温控仪与制冷装置连接。所述的盒体上方设置有温度传感器，并且在所述的温度传感器的信号端与温控仪连接。此外，所述的制冷装置与储能装置连接，通过储能装置为制冷装置供电。所述的盒盖上设置有与试剂瓶的位置相对应的取物口，且取物口内旋接有取物盖。所述的R1试剂瓶内设置有试剂R1，所述的R2试剂瓶内设置有试剂R2。

所述的试剂R1包括：缓冲剂、表面活性剂、氯化钠、高分子加速剂、广谱杀菌剂、聚凝胺、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、APOE抗体试剂和纯化水。所述的高分子加速剂为聚乙二醇4000，所述的试剂R1中甘氨酸缓冲液、氯化钠、十二烷基酚、高分子加速剂、谱杀菌剂、聚凝胺、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白的含量分别为35mmol/L、3％(W/V)、2-3％(W/V)、 40％(W/V)、3％(W/V)、0.2％(W/V)、1％(W/V)。所述的试剂R1其余均为纯化水。

所述的试剂R2包括：反应剂稀释液、羊抗人APOE抗血清以及恒定值校准液。所述的恒定值校准液包括，缓冲剂、APOE抗原、抗氧化剂、增效剂、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、丙酸钠以及纯化水。其中所述的缓冲剂为磷酸缓冲液，所述的抗氧化剂为甘草抗氧化物，所述的增效剂为柠檬酸。所述的试剂R2中磷酸缓冲液、APOE抗原、甘草抗氧化物、柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、丙酸钠的含量分别为30mmol/L、5mmol/L、 8mmol/L、3mmol/L、3mmol/L、3mmol/L。所述的试剂R2其余均为纯化水。

所述的储能装置为太阳能电池板。

所述的制冷装置为制冷管。

所述的固定装置包括卡槽和卡扣。

所述的温度传感器设置有两个。

所述的缓冲剂为甘氨酸缓冲液，其含量分别为35mmol/L。

所述的试剂R1中聚乙二醇的数均分子量为4000。

所述的试剂R1的制备过程中又添加了特定的表面活性剂-十二烷基酚。

所述的试剂R2的包被过程中加入乳胶粒子，有效提高了试剂盒的灵敏度。

所述的抗氧化剂为甘草抗氧化物，所述的抗氧化剂先溶解在80ml乙醇中再加入试剂R2中。

有益效果:

本实用新型一种载脂蛋白E检测试剂盒，通过温控仪控制制冷装置，保持试剂瓶恒温，避免了试剂的变质。试剂中添加有特定的表面活性剂和乳胶粒子，提高了试剂的准确度。此外，试剂R1、试剂R2和校准液成分简单，协同作用强，稳定性好，能够在长期保存中保持质量稳定。同时试剂盒具有抗干扰能力强，检测数据稳定性好，准确性高，可重复性强，无需对样本进行稀释等前期处理，检测简单，效率高。

附图说明：

图1是本实用新型一种载脂蛋白E检测试剂盒的结构示意图；

图2是本实用新型盒盖的结构示意图；

图3是本实用新型进行检测所得的APOE的测定值与通过放射免疫分析法所得的APOE测定值的相互关系示意图。

具体实施方式

下面通过附图和实施例，对本实用新型的技术方案做进一步的详细描述。

如图1至图3所示为所述的一种载脂蛋白E检测试剂盒，包括：盒体1、盒盖2、试剂瓶3、温控仪4、储能装置5、固定装置6、温度传感器7、取物盖8、卡槽10、卡扣11、制冷装置13。

所述的盒体1中设置有试剂瓶3，其中所述的试剂瓶3包括R1试剂瓶 31和R2试剂瓶32。所述的固定装置6包括卡槽10和卡扣11。所述的卡扣 11设置在试剂瓶3的底部，并且所述的卡扣11与所述的盒体1底部设置的卡槽10配合设置，所述的试剂瓶3通过固定装置6固定在卡槽10内，保证了试剂瓶3稳定的放置在盒体1上。所述的盒体1底部嵌设有一个制冷装置 13，其中所述的制冷装置13嵌设在卡槽10内。所述的温控仪4与制冷装置 13连接。所述的盒体1上方设置有温度传感器7，并且在所述的温度传感器 7的信号端与温控仪4连接。通过温控仪4控制所述的制冷装置13的温度，从而控制试剂瓶内的温度，并且通过温度传感器7将检测的温度通过信号传输回温控仪4。此外，所述的制冷装置13与储能装置5连接，通过储能装置5为制冷装置13供电，其中所述的储能装置5为太阳能电池板。所述的盒盖 2上设置有与试剂瓶3的位置相对应的取物口，且取物口内旋接有取物盖8，可以避免在取用试剂瓶时，打开盒盖后，外界空气进入盒体内，使得盒体温度上升，在盒盖上设置了取物盖后，仅仅需要打开取物盖就可以实现试剂瓶 3的使用，大大减小了盒体内外的温度对流。所述的R1试剂瓶内设置有试剂 R1，所述的R2试剂瓶内设置有试剂R2。

所述的试剂R1包括：缓冲剂、表面活性剂、氯化钠、高分子加速剂、广谱杀菌剂、聚凝胺、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、APOE抗体试剂和纯化水。其中所述的缓冲剂为甘氨酸缓冲液，因甘氨酸为具有氨基和羧基的两性离子，故有很强的缓冲性。所述的高分子加速剂为聚乙二醇4000，并且所述的R1酸碱度为PH＝7-8；所述的试剂R1的制备过程中又添加了特定的表面活性剂-十二烷基酚。所述的试剂R1中甘氨酸缓冲液、氯化钠、十二烷基酚、高分子加速剂、谱杀菌剂、聚凝胺、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白的含量分别为35mmol/L、3％(W/V)、2-3％(W/V)、40％(W/V)、3％(W/V)、 0.2％(W/V)、1％(W/V)。所述的试剂R1其余均为纯化水。

所述的试剂R2包括：反应剂稀释液、羊抗人APOE抗血清以及恒定值校准液。所述的恒定值校准液包括，缓冲剂、APOE抗原、抗氧化剂、增效剂、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、丙酸钠以及纯化水。其中所述的缓冲剂为磷酸缓冲液，所述的抗氧化剂为甘草抗氧化物，所述的增效剂为柠檬酸。并且所述的R1酸碱度为PH＝7-8；同时在R2的包被过程中加入乳胶粒子，有效提高了试剂盒的灵敏度。所述的试剂R2中磷酸缓冲液、APOE抗原、甘草抗氧化物、柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、丙酸钠的含量分别为30mmol/L、5mmol/L、8mmol/L、3mmol/L、3mmol/L、3mmol/L。所述的试剂R2其余均为纯化水。

本实用新型利用抗原抗体反应，加入试剂R1解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露，然后加入试剂R2使有高度特异反应性的抗APOE抗体与样本中相应的抗原反应，形成不溶性的抗原-抗体复合物，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的APOE含量成正比。在规定波长下测定该不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知恒定的校准液比较，则可计算出样本中的APOE的含量。

按照需要的恒定值校准液将相应量的APOE抗原加入上述溶液中，制备得APOE恒定值校准液。获得的APOE测定值与通过放射免疫分析法所得的 APOE测得值进行比较，获取相关性r＝0.9861。

综上所述，本实用新型的内容并不局限在上述的实施例中，本领域的技术人员可以在本发明的技术指导思想之内提出其他的实施例，但这些实施例都包括在本发明的范围之内。